线粒体ATP敏感钾通道开放剂对大鼠肺缺血-再灌注损伤的保护作用

目的探讨线粒体ATP敏感钾通道开放剂二氮嗪（DE）对肺缺血-再灌注损伤（L／R）的保护作用。方法建立大鼠肺I／R模型，随机设立假手术（sham）组、I／R组、DE组、线粒体ATP敏感钾通道阻断剂5-羟基葵酸（5-HD）组，每组10只，观察各组肺组织病理形态学变化，测定肺湿／干质量比，检测肺组织髓过氧化物酶（MPO）活性、丙二醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶（SOD）活性。结果与sham组比较，I／R组肺组织出现明显损伤性病理形态学变化，肺湿／干质量比明显增加（P〈0．05），肺组织MPO活性显著增高、MDA含量显著增加和SOD活性显著降低（P〈0．05）。与I／R组比较，DE组肺组织损伤明显减轻，肺湿／干质量比降低（P〈0．05），肺组织MPO活性降低、MDA含量减少、SOD活性增高（P〈0．05）。5-HD组各观察指标与I／R组差异无统计学意义（P〉0．05）。结论线粒体ATP敏感钾通道开放剂DE可通过抑制中性粒细胞聚集、减少自由基产生、增强抗氧化能力对大鼠肺缺血-再灌注损伤产生明显保护作用，该保护作用可被线粒体ATP敏感钾通道阻断剂5-HD所拮抗。

ATP敏感钾通道开放剂与缺氧缺血性脑损伤

ATP敏感钾通道是一类受细胞内ATP浓度调节的通道,在生理条件下处于关闭状态,而在缺氧缺血或代谢抑制时则开放。研究证实,ATP敏感钾通道的开放对缺氧缺血性脑损伤具有保护作用,但机制尚不明确,可能与影响能量代谢、拮抗兴奋性氨基酸毒性、减轻氧化损伤、抑制细胞凋亡和扩张脑血管有关。

ATP敏感性钾通道开放剂埃他卡林对高原脱习服的影响

目的:观察长期口服埃他卡林对高原脱习服的影响。方法:该临床研究采用随机双盲安慰剂平行对照试验方法,随机分为埃他卡林试验组和安慰剂对照组,两组受试者分别为39例和17例。其中,受试者分别口服埃他卡林片(5 mg/片,1次/日)或安慰剂(1片/日),连续服用药物7个月,下山到3700 m停留2 d并停止服药,再返回到海拔1400 m的平原地区,自返回平原的第2、4、6天,进行高原脱习服症状调查,随访受试者的高原脱习服症状并进行症状评分。结果:长期驻扎在5200～5380 m高海拔地区的受试者,返回平原后第2、4、6天,分别有82.4%、52.9%、23.5%的人员产生显著的高原脱习服症状,长期口服埃他卡林,高原脱习服发生率分别为43.6%、30.8%、38.5%;安慰剂对照组返回平原后脱习服反应程度的评分,在第2、4、6天分别为(6.0±1.9)、(4.6±1.0)、(3.8±1.5)分,埃他卡林治疗组分别为(4.4±2.4)、(3.3±1.8)、(4.0±1.5)分,两组比较,在返回低海拔第2、4天,高原脱习服反应的发病率及发病程度均显著减少,第6天的数据两组之间差别无统计学意义。结论:高原地区长期口服埃他卡林可显著减轻高原脱习服的发病程度,降低高原脱习服的发生率,预防高原脱习服。

ATP敏感性钾通道开放剂埃他卡林对大鼠低氧性肺动脉高压的影响

目的 :探讨新型ATP敏感性钾通道开放剂 (KATPCO)埃他卡林 (iptkalim ,Ipt)对低氧性肺动脉高压 (HPH)大鼠肺血管重构的影响。方法 :将大鼠置于常压低氧舱内 (O2 1 0 %± 0 .5 % ) ,8h/d ,每周 6d ,4周后测定平均肺动脉压(mPAP)、RV/ (LV +S) ;用图象分析仪测量与呼吸性细支气管伴行的肺小动脉外径 (ED)、动脉中层壁厚 (MT)、动脉管壁中层面积 (MA)、动脉管腔面积 (VA)和血管总面积 (TAA)。结果 :慢性低氧组大鼠的mPAP和RV/ (LV +S)显著高于正常对照组 (P <0 .0 1 ) ;图象分析显示低氧组大鼠肺小动脉中层壁厚与动脉外径百分比 (MT % )、动脉壁中层面积与血管总面积百分比 (MA % )均显著高于对照组 (P <0 .0 1 ) ;慢性低氧组大鼠肺小动脉管腔面积 (VA)与血管总面积 (TAA)百分比显著低于正常组 (P <0 .0 1 )。Ipt 0 .75mg·kg- 1 ·d- 1 和 1 .50mg·kg- 1 ·d- 1 均可显著抑制低氧性肺血管壁重构 ,降低肺动脉压 ,减少右心室肥厚 ,1 .50mg·kg- 1 ·d- 1 则可逆转持续低氧所致的所有病理性变化。结论

ATP敏感性钾通道开放剂吡那地尔增高Bcl-2表达而抑制PC12细胞缺血性凋亡

目的探讨ATP敏感性钾通道开放剂吡那地尔对缺血缺氧PC12细胞凋亡及对Bcl-2 mRNA和蛋白表达的影响。方法取传代后3d的PC12细胞,分为正常对照组、缺血对照组、吡那地尔处理组、吡那地尔+格列吡嗪处理组共4组。吡那地尔处理组在PC12细胞缺血缺氧前20min加入浓度为100μmol·L-1的吡那地尔;吡那地尔+格列吡嗪处理组则加入浓度100μmol·L-1的吡那地尔和浓度为500μmol·L-1的KATP通道阻断剂格列吡嗪。采用Annexin-V FITC/PI双染流式细胞分析仪检测凋亡率;应用免疫荧光染色和Western blot检测Bcl-2蛋白表达水平;应用RT-PCR检测Bcl-2 mRNA表达水平。结果缺血缺氧后缺血对照组、吡那地尔处理组、吡那地尔+格列吡嗪处理组细胞凋亡率随时间增加而增加,24h达高峰。吡那地尔组与其余组比较差异均有显著性(P<0.01)。缺血对照组、吡那地尔处理组、吡那地尔+格列吡嗪处理组细胞Bcl-2 mRNA及蛋白表达各时间点均增加,12h达高峰。吡那地尔组与其余组比较差异均有显著性(P<0.05,或P<0.01)。缺血对照组和吡那地尔+格列吡嗪处理组比较差异均无显著性(P>0.05)。结论ATP敏感性钾通道开放剂可能通过提高Bcl-2 mRNA及蛋白表达来减轻缺血缺氧后PC12细胞凋亡,发挥保护作用。

ATP敏感性钾通道开放剂对脑缺血／再灌注损伤的保护作用及信号转导机制研究

目的 观察ATP敏感性钾通道（KATP）开放剂对大鼠脑缺血／再灌注（I／R）损伤后神经元凋亡的保护作用及其信号转导机制。方法 将200只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组（A组）、缺血组（B组）、KATP开放剂治疗组（C组）及KATP开放剂和阻断剂联合治疗组（D组）。应用线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）模型，各组于缺血后2h进行再灌注。各组于再灌注6、12、24、48和72h分别取5只大鼠脑组织标本，用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL）检测神经元凋亡，用免疫组化法检测天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）和caspase-9的蛋白表达；各组其余5只大鼠用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）观察caspase-3和caspase-9的mRNA表达。结果 B、C、D组再灌注后各时间点凋亡神经元数以及caspase-3、caspase-9的蛋白和mRNA表达均显著高于A组（P〈0．05或P〈0．01），C组各指标均显著低于B组和D组（P〈0．05或P〈0．01），而B组与D组各指标间比较差异均无显著性（P均〉0．05）。结论 KATP开放剂能显著减少脑I／R损伤后神经元凋亡以及caspase-3、caspase-9的mRNA和蛋白表达，提示KATP开放剂可能通过抑制线粒体通路减少脑I／R损伤后的神经元凋亡。

ATP敏感性钾通道的阻断剂与开放剂研究进展

ATP敏感性钾通道是高血压、心绞痛、糖尿病及缺血性脑损伤等多种疾病的治疗靶点之一。通过对调节KATP通道药物的选择性、可逆性、作用位点以及相互调节的研究,可以对一些临床用药进行重新评估,并指导开发高选择性的KATP通道阻断剂和开放剂。

ATP敏感性钾通道开放剂对培养乳鼠窦房结细胞模拟缺血时细胞活性的影响

目的 观察ATP敏感性钾 (KATP)通道开放剂对模拟缺血窦房结细胞活性的影响 ,并探讨其作用机制。方法 取培养 2d的窦房结细胞 ,以低渗 ( 85mosmol/L)台盼蓝染色及四唑盐 (MTT)比色观察窦房结细胞活性的变化。结果 模拟缺血 4h后 ,窦房结细胞脆性增加、活性降低 ;KATP通道开放剂Pinacidil和Diazoxide能显著降低模拟缺血窦房结细胞脆性 ,增加细胞的活性 ,但两组间无明显的统计学差异 ;KATP通道阻断剂 5 HD能逆转Pinacidil及Diazoxide的上述作用。结论 KATP通道开放剂Pinacidil和Diazoxide对缺血窦房结细胞具有显著的保护作用 ,但这种效果能为KATP通道阻断剂 5 HD阻断。本研究提示窦房结细胞线粒体内膜可能有KATP通道存在 ,它的开放可能是细胞获得保护的关键。

线粒体ATP敏感性钾离子通道开放剂改善冠心病大鼠模型心肌氧化应激损伤的分子机制

目的探索线粒体ATP敏感性钾离子通道(mito KATP)开放剂改善冠心病大鼠模型心肌氧化应激损伤的分子机制。方法选取40只SD大鼠随机分为4组:正常对照组(不造模且不给予二氮嗪药物干预)、假手术组(仅切皮不进行造模手术)、模型组(制作冠心病大鼠模型,但不给予二氮嗪药物干预)和药物组(制作冠心病大鼠模型,给予二氮嗪药物3 mg/kg干预),每组10只。利用实时荧光定量聚合酶链式反应及Western blotting实验测定各组血管生成因子[成纤维细胞生长因子2(FGF-2)和血管内皮生长因子(VEGF)]m RNA及相关蛋白的表达量,同时比较各组大鼠细胞内的乳酸脱氢酶、线粒体膜电位(MMP)和细胞死亡率。采用SPSS 22.0软件进行数据处理。组间比较采用方差分析或者t检验。结果与模型组相比,药物组大鼠FGF-2[(100. 21±12. 33)×103vs (120. 43±10. 33)×103IU]与VEGF [(163. 31±9. 33)×10~3vs (181. 33±11. 13)×10~3IU]m RNA转录水平、FGF-2 [(0. 69±0. 33) vs (1. 32±0. 33)与VEGF [(0. 68±0. 33) vs (1. 20±0. 13)]表达水平、乳酸脱氢酶[(49. 32±3. 51) vs (156. 12±10. 18) U/L]表达均显著降低(P <0. 05)。与模型组相比,药物组细胞死亡率显著降低[(30. 32±3. 48)%vs (66. 12±3. 23)%],而荧光强度显著增加[(780. 12±9. 20) vs (220. 24±6. 15),P<0. 05]。结论 mito KATP通道开放剂可通过促进冠心病大鼠血管FGF-2和VEGF增加,增强乳酸脱氢酶活性,降低MMP、细胞死亡率和冠心病大鼠心肌氧化应激损伤。

盐酸埃他卡林对动脉平滑肌ATP敏感性钾通道与其开放剂[3H]P1075特异性结合与解离动力学过程的影响

目的 :研究盐酸埃他卡林 (iptakalimhydrochlo ride ,Ipt)对 [3 H]P10 75与血管平滑肌ATP敏感性钾通道 (ATP sensitivepotassiumchannel ,KATP)结合和解离动力学过程的影响。方法 :KATP开放剂 [3 H]P10 75与大鼠去内皮主动脉平滑肌特异性结合与解离的动力学试验。结果 :Ipt预先与主动脉平滑肌孵育后 ,[3 H]10 75的结合速率减慢 ,结合幅度降低 ,平衡结合常数KA 降为对照组的 2 8.3% (P <0 .0 1) ;结合[3 H]P10 75的解离速率增快 ,解离幅度增加 ,平衡解离常数KD 则较对照组增加 3.5 3倍 (P <0 .0 1)。在相同条件下 ,KATP 开放剂吡那地尔 (pinacidil ,Pin)的作用与之相似 ,KA值降为对照组的 35 % (P <0 .0 1) ,KD 值较对照组增加 2 .88倍 (P <0 .0 1)。结论 :Ipt与KATP开放剂Pin的作用相似 ,两者均可变构调节KATP,抑制其与开放剂的结合过程 ,促进其解离过程。

ATP敏感性钾通道开放剂对脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨ATP敏感性钾通道开放剂对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法40只Wistar雄性大鼠随机分为四组:A组(假手术组)、B组(缺血组)、C组(KATP开放剂治疗组)及D组(KATP开放剂+阻断剂治疗组)。应用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血模型(MCAO),应用TUNEL法检测神经元凋亡,应用免疫组化方法检测Caspase-3蛋白表达,并观察脑梗死体积及神经功能缺损评分。结果(1)C组脑梗死体积显著小于B、D组(P<0.01),B、D组之间无显著性差异(P>0.05);(2)C组神经功能缺损程度较B、D组显著减轻(P<0.05),B、D组之间无显著性差异(P>0.05);(3)C组神经元凋亡数较B、D组显著减少(P<0.01),B、D组之间无显著性差异(P>0.05);(4)C组Caspase-3蛋白表达显著少于B、D组(P<0.01),B、D组之间无显著性差异(P>0.05)。结论KATP通道开放剂能显著减轻脑缺血再灌注后脑梗死体积、改善神经功能缺损程度、减少Caspase-3蛋白表达、抑制神经元凋亡,对脑缺血再灌注损伤发挥保护作用。

ATP敏感性钾通道开放剂Cromakalim心脏保护机制的初步探讨

本工作用大鼠离体灌流心脏血再灌注损伤模型观察了K_(ATP)通道开放剂克罗卡林(Cromakalim,CRK)的心脏保护作用。结果表明,CRK能明显减少缺血再灌注损伤心肌的LDH及蛋白的漏出(P<0.01),降低脂质过氧化产物MDA的含量(P<0.01),心肌组织及心肌线粒体钙含量也显著降低(P<0.01)。CRK明显抑制心肌线粒体的最大^(45)Ca^(2+)摄取量及摄钙速率。CRK的上述作用均能被K_(ATP)通道阻断剂格列苯脲(Glybenclamide,GLB)所消除。上述结果表明,CRK能通过开放K_(ATP)通道发挥心脏保护作用,其心脏保护作用的机制可能与膜稳定作用、抑制氧自由基的产生及抑制心肌细胞和心肌线粒体钙超载有关。

ATP敏感性钾通道开放剂的脑保护作用研究

细胞上存在两种三磷酸腺苷敏感性钾(KATP)通道,一是位于细胞膜上的ATP敏感的钾通道;二是位于线粒体膜上的ATP敏感的钾通道。KATP通道广泛存在于各种脑区,若给予KATP开放剂则可以使其开放发挥对脑的保护作用。越来越多的研究表明,KATP通道在脑缺氧缺血等病理状态下被激活开放,使大量K+外流,细胞膜超极化,从而使Na+、Ca2+内流减少,避免或减轻钙超载、减少能耗、减轻兴奋性氨基酸及氧自由基释放,保护脑细胞。

ATP敏感的钾通道开放剂对离体肺保护的实验研究

目的研究ATP敏感的钾离子通道开放剂(PCOs)吡那地尔(pinacidil)在离体兔肺保护中的作用。方法将18只杂种灰色家兔随机分成3组,建立离体肺缺血再灌注模型。对照组(n=6)以自体温血直接再灌注2 h;缺血组(n=6)用低钾右旋糖酐保存液(LPD)+二甲基亚砜(DMSO)灌洗,4℃保存8 h后自体温血再灌注2 h;实验组(n=6)用LPD+100μmol.L-1吡那地尔(溶于DMSO中)灌洗,4℃保存8 h后自体温血再灌注2 h。每隔30 min分别经肺动脉和左房插管取血行血气分析,评估离体肺功能;测量湿/干重比,估计肺水含量;光镜下行肺组织形态学检查;制作肺组织匀浆测定超氧化物歧化酶(SOD)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-8(IL-8)含量。结果实验组氧分压差(ΔPO2)和SOD与缺血组比较明显升高(P<0.05);组织形态学检查显示,实验组损伤较缺血组轻;实验组的TNF-α和IL-8含量明显低于缺血组(P<0.05)。结论在保存时间不超过8 h的情况下,用加入吡那地尔的LPD灌洗和保存肺能更好地保护肺功能。

新型钾通道开放剂对心血管ATP-敏感性钾通道基因表达的调节作用

目的:研究脂肪胺类的新型钾通道开放剂(KCO)埃他卡林(Ipt)和氰胍类的KCO吡那地尔(Pin)对大鼠心血管ATP-敏感性钾通道(KATP)的亚基SUR1、SUR2、Kir6.1和Kir6.2等在mRNA水平的调节作用。方法:SD大鼠给药1周后处死并取组织,提取总RNA,利用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)研究以上基因在mRNA水平的改变。结果:与正常对照相比,心脏组织中,Ipt和Pin对KATP的4个亚基在mRNA水平均无显著影响;主动脉平滑肌上,Ipt对4个亚基的mRNA表达无显著影响,但Pin可显著上调SUR2的mRNA表达;尾动脉平滑肌上,Ipt对Kir6.1/Kir6.2、Pin对SUR2/Kir6.1均有显著下调的作用。结论:心肌、大动脉平滑肌和小动脉平滑肌KATP基因表达的调控不同,Ipt选择性调节小动脉平滑肌Kir6.1/Kir6.2;Ipt对心血管KATP基因表达的调节作用不同于Pin。

ATP敏感性钾通道开放剂与心肌保护

ATP敏感性钾通道开放剂是心肌保护研究的新课题。本文对ATP敏感性钾通道开放剂在缺血心肌中的作用心肌保护作用机制以及临床意义等方面进行探讨。

ATP敏感性钾通道开放剂在心血管疾病中的应用

ATP敏感性钾通道开放剂通过激活心肌和血管平滑肌细胞ATP敏感性钾通道,产生舒张血管和心肌保护等效应,用于治疗高血压、心绞痛、心肌梗死、心律失常、心力衰竭等疾病,本文就其在心血管疾病中的应用前景作一综述。

线粒体ATP敏感性钾离子通道开放剂调控冠心病大鼠心肌凋亡的功能及机制

目的:探讨线粒体ATP敏感性钾离子通道开放剂对冠心病大鼠心肌细胞凋亡的影响及机制。方法:将50只SD大鼠随机分为对照组、冠心病组及二氮嗪低、中、高剂量组,除对照组外,其余各组大鼠均用高脂饮食联合垂体后叶素构建冠心病大鼠模型,造模后二氮嗪低、中、高剂量组大鼠分别灌胃3,5,7 mg/kg的二氮嗪,每日给药1次,共14 d,对照组和冠心病组大鼠灌胃等体积的生理盐水。治疗14 d后,取各组大鼠心肌组织,苏木精-伊红(HE)染色检测心肌损伤,原位缺口末端转移酶标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清炎性细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)浓度,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测心肌组织中Cleaved-Caspase 3、Bcl-2、Bax、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶(p-PI3K)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)表达。结果:相比于对照组,冠心病组大鼠心肌损伤严重,血清TNF-α、IL-1β、IL-6显著增加,心肌细胞凋亡指数增加,Cleaved-Caspase 3和Bax表达增加,Bcl-2表达、PI3K和AKT磷酸化水平降低(P<0.05)。相比于冠心病组,二氮嗪低、中、高剂量组大鼠心肌损伤均有缓解,TNF-α、IL-1β、IL-6降低,心肌细胞凋亡指数降低,Cleaved-Caspase 3和Bax表达下调,Bcl-2表达、PI3K和AKT磷酸化水平增加(P<0.05)。结论:线粒体ATP敏感性钾离子通道开放剂二氮嗪可缓解冠心病大鼠心肌细胞损伤及凋亡,其机制为激活抗凋亡的PI3K/AKT信号通路。

核苷酸对ATP-敏感性钾通道开放剂吡那地尔舒血管效应的调节作用

目的 :在正常Wistar大鼠离体主动脉上 ,研究核苷酸类物质ATP ,ADP ,UDP ,GTP及其代谢产物腺苷 (Ade)对ATP敏感性钾通道 (ATP sensitivepotassiumchannel,KATP)开放剂吡那地尔 (pinacidil,Pin)舒血管效应的影响 ,以评价其对动脉平滑肌KATP功能的调节作用。方法 :大鼠离体主动脉去内皮血管环以核苷酸或核苷酸与格列本脲(Gli)孵育 10min后 ,再以KCl2 0mmol·L-1诱发收缩 ,观察Pin的血管舒张效应的变化。结果 :离体去内皮大鼠主动脉标本经ATP ,ADP ,UDP和GTP 4种核苷酸和Ade在 10 0 μmol·L-1浓度下预孵育后 ,Pin舒血管作用发生变化 :①ATP可减弱Pin对KATP的开放作用 ,但增强Gli对KATP的阻断作用。②ADP既减弱Pin对KATP的开放作用 ,又减弱Gli对KATP的阻断作用。③Ade对KATP功能的调节与ADP相似 ,既减弱Pin对KATP的开放作用 ,又减弱Gli对KATP的阻断作用。④UDP 10 0 μmol·L-1可增强Pin对KATP的开放作用 ,但减弱Gli对KATP的阻断作用。⑤GTP可增强Pin激活KATP开放的作用 ,但对Gli阻断KATP开放的作用无影响。结论 :不同的核苷酸和腺苷均可调节血管平滑肌KATP的功能 ,但其调节作用的药理学特征并不相同。