ATP细胞活力试验在测量宫颈癌固有放射敏感性中的应用前景

Background. Intrinsic radiosensitivity using the clonogenic assay and the cell surviving fraction at 2 Gy (SF2) has been shown to be an independent prognostic factor for patient response to radiotherapy in carcinoma of the cervix. The clonogenic assay has significant shortcomings, making it unsuitable for routine clinical use. The ATP cell viability assay (ATP- CVA) has been shown to have a high tumor evaluability rate, technical simplicity, and reproducibility in chemosensitivity testing. Aims. This study compares the ATP- CVA with the clonogenic assay in the in vitro radiosensitivity testing of cervical cancer cell lines. Correlation of in vitro radiosensitivity and in vivo patient response was also determined. Methods. Five cervical carcinoma cell lines (SiHa, HeLa, Caski, C- 33A, and C4- 1) were tested using the ATP- CVA and the clonogenic assay. Survival curves were plotted and the mean SF2 values obtained by the two different assay methods were compared using ANOVA to see if there were significant differences. Mean SF2 values obtained from 27 cervical cancers were compared with clinical outcomes. Results. The SF2 values for the cell lines ranged from 0.28 to 0.67 when tested using the ATP- CVA. Using the clonogenic assay, the SF2 values ranged from 0.27 to 0.70. ANOVA with Bonferroni pairwise multiple comparison showed no significant difference between the mean SF2 values for the individual cell lines between the two assay methods. Twenty- three cervical cancer samples (85% ) were evaluable for SF2 using ATP- CVA. The mean SF2 values of patients who had locoregional failure were significantly higher than those who achieved local control (P < 0.01). Conclusions. Testing intrinsic radiosensitivity using the surviving fraction at 2 Gy (SF2) is comparable using the two assay methods of ATP- CVA and clonogenic assay. The ATP- CVA should be further investigated in the testing of intrinsic radiosensitivity in patients with cervical cancer.

ATP诱导细胞死亡与骨质疏松调控

骨质疏松症作为一种广泛存在的骨骼系统疾病,其发病机制至今尚未完全阐明。研究表明,ATP诱导的细胞死亡与成骨细胞、破骨细胞和骨髓间充质干细胞之间存在着密切的关系,其通过多个途径影响骨吸收、骨形成和骨代谢涉及骨组织的动态平衡和骨质疏松症的发病机制,进而参与骨质疏松症的病理过程。本文综述了ATP诱导细胞死亡的分子机制,深入探讨了ATP在骨质疏松症中的作用机制,旨在为骨质疏松症提供新的研究靶点和诊疗思路。

氟中毒对肉鸡促红细胞生成素和红细胞膜ATP酶的影响

研究氟中毒对肉鸡促红细胞生成素(EPO)和红细胞膜ATP酶的影响。选用240只1日龄的健康萨索肉鸡,随机分为对照组(F,11 mg/kg)、高氟1组(F,300 mg/kg)、高氟2组(F,600 mg/kg)、高氟3组(F,900 mg/kg)四组,正常饲喂,分别于染毒第14天、28天和42天检测网织红细胞数目、红细胞膜的ATP酶活性、红细胞渗透脆性、血清中促红细胞生成素等血液相关指标。结果表明,氟中毒导致肉鸡血液网织红细胞数量降低、红细胞膜ATP酶活性降低,红细胞渗透脆性增加、血清促红细胞生成素(EPO)含量降低,是导致肉鸡发生贫血的根本原因之一。

外周血CD4^(+)PD-1^(+)Tcells及CD4^(+)T淋巴细胞ATP含量与复发性卵巢癌疗效的相关性分析

目的 探讨外周血CD4^(+)程序性细胞死亡受体-1(PD-1)^(+)T cells及CD4^(+)T淋巴细胞三磷酸腺苷(ATP)含量与复发性卵巢癌疗效的相关性。方法 选取30例复发性卵巢癌患者为复发组,30例未复发卵巢癌患者为非复发组;另选取30名同期体检健康者作为对照组。评估外周血CD4^(+)PD-1^(+)T cells及CD4^(+)T淋巴细胞ATP含量与复发性卵巢癌疗效的相关性。结果 复发组和非复发组的CD4^(+)PD-1^(+)T cells较对照组明显升高(P<0.05)。复发组和非复发组的CD4^(+)T淋巴细胞ATP含量较对照组明显降低(P<0.05)。复发组治疗后CD4^(+)PD-1^(+)Tcells显著低于治疗前(P<0.05),治疗后CD4^(+)T淋巴细胞ATP含量显著高于治疗前(P<0.05)。CD4^(+)PD-1^(+)T cells与复发性卵巢癌疗效成负相关(r=-0.393,P=0.039),CD4^(+)T淋巴细胞ATP含量与复发性卵巢癌疗效成正相关(r=0.449,P=0.031)。结论 复发性卵巢癌患者外周血CD4^(+)PD-1^(+)T cells及CD4^(+)T淋巴细胞ATP含量与疗效密切相关。

脊髓小胶质细胞中释放ATP的SWELL1通道参与神经病理性疼痛

外周神经损伤后,细胞外三磷酸腺苷(ATP)介导的嘌呤能信号对脊髓小胶质细胞激活和神经病理性疼痛至关重要。然而,ATP释放的机制仍然知之甚少。该研究发现体积调控阴离子通道(volume-regulated anion channel,VRAC)是一个ATP释放通道,在小胶质细胞中被炎症介质鞘氨醇-1-磷酸(sphingosine-1-phosphate,S1P)激活。SWELL1(也称为Lrrc8a)是VRAC必需的亚基,小鼠小胶质细胞特异性敲除Swell1减少了由周围神经损伤引起的脊髓细胞外ATP增加。而且,基因敲除小鼠还表现出脊髓小胶质细胞活化减少、背角神经元过度兴奋下降、诱发的和自发的神经病理性疼痛样行为下降。该研究通过高通量筛选确定了一个FDA批准的药物—双香豆素作为一种新型有效的VRAC抑制剂。鞘内给予双香豆素减轻了小鼠神经损伤引起的机械性触诱发痛。该研究证明脊髓中小胶质细胞释放ATP的VRAC是神经病理性疼痛的关键因素,也是治疗这种疾病的潜在靶点。

自体回收血与库血红细胞酶活性及ATP含量的比较

目的比较术中自体回收处理血和库存两周红细胞的酶活性以及红细胞ATP含量的差异。方法选择估计术中出血量在600ml以上的择期全麻手术患者50例,术中采用血液回收机进行洗涤式自体血液回收,取患者自体回收处理血及库存两周以枸橼酸钠枸橼酸无水葡萄糖磷酸二氢钠腺嘌呤(CPDA)为保养液的异体浓缩红细胞各50份,每份6ml,分别检测红细胞ATP酶(Na+K+ATP酶、Ca2+ATP酶、Mg2+ATP酶)、葡萄糖6磷酸脱氢酶(G6PD)活性及红细胞ATP含量。结果红细胞酶活性和ATP含量回收血与库血间差异均无显著意义。结论洗涤式自体血液回收处理的红细胞ATP酶、G6PD活性及ATP含量与库存两周异体红细胞接近。

细胞外ATP促葡萄糖细胞膜转运的回顾性研究

通过葡萄糖、ATP、细胞膜转运早期研究文献,分析葡萄糖细胞膜转运研究中ATP用词、分类、加入方法、检测方法、实验结果等,探讨细胞外ATP在细胞膜转运中的作用。研究细胞外ATP在葡萄糖细胞膜转运中的作用。

强直性肌营养不良症的红细胞膜ATP酶的研究

对13例MyD病人和13例健康人的红细胞膜的Na^+-K^+ATP酶和Ca^(2+)-Mg^(2+)ATP酶进行测定,发现两组的Na^+-K^+ATP酶活力无显著区别,且均可被乌本苷抑制,而MyD组的Ca^(2+)-Mg^(2+)ATP酶活力则高于对照组。证明在MyD中存在膜的缺陷,推测Ca^(2+)-Mg^(2+)ATP酶活力改变与细胞内高钙水平有关。

急性低氧对家兔血浆SOD、MDA、NO和红细胞ATP酶的影响

目的 探讨不同程度急性低氧对家兔血浆超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)和红细胞ATP酶活性的影响。方法 以人工吸入含氧量分别为12.5％和8.5％的氮氧混合气体(模拟海拔4000m和6500m高原急性低氧)造成急性低氧,时间为20min,然后测定血浆中的SOD、MDA、NO和红细胞ATP酶的变化。结果 急性低氧后两组家兔血浆中的SOD活力均明显降低(P<0.05);MDA含量均明显升高(P<0.05);红细胞ATP酶活性均明显降低(P<0.05)。NO含量在12.5％低氧组明显下降(P<0.05),而在8.5％低氧组明显升高(P<0.05);结论 急性低氧可使自由基产生增加,红细胞ATP酶活性降低,对机体有一定的影响。

原发性高血压患者红细胞内Ca^(2+),Mg^(2+)水平及细胞膜ATP酶活性

对正常人及原发性高血压患者细胞内、外Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋浓度和细胞膜ＡＴＰ酶活性之间的关系进行评价。方法检测３２名正常人（ＮＴ），５５例原发性高血压病（ＨＴ）患者血浆和细胞内Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋浓度（原子吸收法），细胞膜ＡＴＰ酶活性（比色法）。结果ＨＴ组血浆Ｃａ２＋浓度明显低于ＮＴ组，红细胞内Ｃａ２＋浓度明显高于ＮＴ组，红细胞膜Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶及Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活性明显低于ＮＴ组。血浆Ｍｇ２＋和红细胞内Ｍｇ２＋浓度与ＮＴ组无明显差别。结论原发性高血压患者细胞膜Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶和Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活性明显减低，血浆Ｃａ２＋水平明显减低，红细胞内Ｃａ２＋超载。反映膜缺陷和离子运输系统失常与原发性高血压发病有关。而细胞内、外Ｍｇ２＋水平变化与高血压之间的关系须进一步研究。

储存红细胞ATP代谢circRNA筛选及功能预测

目的筛选4℃储存前、后期红细胞差异表达的circRNA并初步预测其功能。方法采集健康无偿献血者5（人）份血样200 m L/份,制备成悬浮红细胞,滤除白细胞后（悬浮滤白红细胞）分为3组：4℃储存0、20及40 d组,对3组标本用第2代高通量测序技术检测,根据FDR〈0.05且｜log2FC｜〉1这2个条件,以火山图和表达模式聚类分析筛选出差异基因并用cytoscape作出mRNA—circRNA—miRNA网络图;通过KEGG和GO分析筛选出与ATP代谢相关的circRNA验证;最后通过生信软件预测hsacirc0007470—hsa-miR-155-5p—MRP4的分子结合具体区域及生物学功能。结果红细胞储存20 d较0 d时差异表达的circRNA有119个,40 d较20 d时差异表达的circRNA有110个,2个储存阶段都有差异表达的circRNA共有41个。KEGG和GO分析显示在差异表达的circRNA中hsacirc0007470的亲本基因MRP4富集于c AMP代谢通路。mireap、miranda、targetscan、circBase、miRBase、mirTar Base软件分析及序列比对显示hsacirc00007470可与hsa-miR-155-5p结合;hsa-miR-155-5p可与MRP4结合。经PCR验证,红细胞储存在0、20、40 d时,hsacirc00007470、MRP4、hsa-miR-155-5p的变化倍数分别为1.00±0.02、1.36±0.09、0.53±0.16,1.00±0.01、1.87±0.48、0.45±0.20,1.00±0.02、0.43±0.20、0.98±0.29。红细胞储存0、20、40 d时,总ATPase（U/gHb）分别是40.87±5.883、18.300±2.847、10.21±1.636;ATP（U/gHb）分别是8.708±1.25、3.082±0.166、2.462±0.252。结论储存红细胞中存在circRNA,且含量会随储存时间发生改变,储存20 d后红细胞的hsacirc00007470与ATPase及ATP表达呈同向相关性,hsacirc00007470或许能解除hsa-miR-155-5p对MRP4的抑制作用,通过ATP代谢途径改善红细胞变形能力。

NIDDM病人红细胞变形能力与红细胞ATP酶活性和红细胞内离子浓度关系的研究

本文检测了４２例ＮＩＤＤＭ病人红细胞变形能力（ＥＤ）和红细胞ＡＴＰ酶活性、红细胞内离子浓度的变化。结果显示ＮＩＤＤＭ病人红细胞滤过指数（ＩＦ）较对照组明显增高（Ｐ＜０．００１）；红细胞Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶和Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活性较对照组明显降低（Ｐ＜０．０１），Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活性变化不明显；红细胞内Ｎａ＋、Ｃａ２＋浓度较对照组明显增高（Ｐ＜０．０１），而Ｍｇ２＋浓度较对照组明显降低（Ｐ＜０．０１）。有血管病变者这些变化较无血管病变者更明显。ＮＩＤＤＭ病人红细胞ＩＦ与Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶、Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活性呈负相关（ｒ＝－０．４６８，－０．４５８，Ｐ＜０．００１），与红细胞内Ｎａ＋、Ｃａ２＋浓度呈正相关（ｒ＝－０．４７３，０．４６６，Ｐ＜０．Ｄ０１），与Ｍｇ２＋浓度呈负相关（ｒ＝－０．４３６，Ｐ＜０．０１）。

人离体红细胞ATP含量与死亡时间和环境温度的关系

目的研究通过红细胞ATP含量推断早期死亡时间的适用温度范围和时间范围。方法采集12名健康捐血者全血各40mL，分装后分别保存于15、20、25、30℃的恒温箱中，以4h间隔取血样，采用生物发光法检测ATP含量，各组进行统计学分析，推导线性回归方程，计算各时间点的偏离时间。结果4组平均偏离时间差距较大，15、20、25、30℃组平均偏离时间分别为4．80、2．04、1．77、5．71h，而30℃组随着统计时间段的缩短平均偏离时间从5．71h缩短至1．67h。结论红细胞ATP含量这一参数最佳适用温度范围为20．30℃，有效评估时间20℃为64h．25℃为40h．30℃为28h。

细胞表面ATP合酶的研究进展

在细胞能量转变过程中,线粒体ATP合酶是一个关键酶。一般认为ATP合酶严格定位于线粒体膜上。但迄今已发现,该酶还在新生血管内皮细胞膜、某些类型的肿瘤细胞膜和脂肪细胞等细胞的膜上分布,而在正常细胞上却没有。利用细胞膜上存在ATP合酶的这个特性,已进行了许多血管形成、肿瘤抑制和脂类代谢等方面的功能研究,对该现象的机制也进行了初步地阐释。该文将对现有的研究结果作一综述。

胡萝卜atp9基因的克隆表达及细胞质雄性不育的相关性研究

以胡萝卜及其它植物atp9基因序列信息设计引物,分离并克隆了胡萝卜细胞质雄性不育相关的线粒体基因片段,并利用半定量RT-PCR和Real-time PCR技术研究了该基因在不育系和相应保持系中的表达情况。结果表明:与保持系相比,atp9基因在不育系中发生了若干碱基的置换及缺失;基因表达分析表明,不育系atp9基因在花蕾的前3个发育时期表达量明显较低,并在大花蕾期超过了保持系,但是在盛花期其表达量又低于保持系。推测atp9基因的结构变异和异常表达与胡萝卜细胞质雄性不育有着密切关系。

原发性高血压患者红细胞内Ca^(2+)浓度及红细胞膜Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATPase活性变化与左心室肥厚的关系

目的 探讨原发性高血压 (EH)患者伴左心室肥厚 (LVH)和不伴LVH红细胞内游离Ca2 + 浓度、红细胞膜Ca2 + Mg2 + ATPase活性的变化及其相互关系。方法 检测 30名正常血压者 (NT组 ) ,82例轻度和中度EH患者 (其中LVH组 4 0例 ,非LVH组 4 2例 )外周血红细胞内Ca2 + 浓度及红细胞膜Ca2 + Mg2 + ATPase活性。结果 (1)EH组外周血红细胞内Ca2 + 浓度显著高于NT组 ,红细胞膜Ca2 + Mg2 + ATPase活性明显低于NT组。 (2 )EH患者中LVH组外周血红细胞内Ca2 + 浓度高于非LVH组 ,红细胞膜Ca2 + Mg2 + ATPase活性低于非LVH组 ;(3)相关分析表明LVMI与红细胞内Ca2 + 浓度呈正相关 ,与红细胞膜Ca2 + Mg2 + ATPase活性呈负相关。结论 EH患者尤其是伴LVH时外周血红细胞内Ca2 + 浓度升高而红细胞膜Ca2 + Mg2 + ATPase活性降低 ,提示LVH与红细胞内Ca2 + 过度超负荷有关。

基因表达谱芯片筛选NS5ATP3转染细胞差异表达基因

目的:应用基因芯片技术.检测丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白5A(NS5A)反式激活基因NS5ATP3的表达对肝母细胞瘤细胞HepG2基因表达谱的影响.进一步阐明NS5ATP3蛋白可能的分子生物学功能.方法:没计并合成NS5ATP3基因序列特异性的引物,应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增NS5ATP3蛋白编码基因片段,以常规的分子生物学技术将获得的NS5ATP3编码基因片段克隆到TA载体中进行核苷酸序列的测定,构建真核表达载体pcDN.A3.1(-)-NS5ATP3.以脂质体转染肝母细胞瘤细胞系HepG2,提取mRNA,逆转录为cDNA,与转染空白表达载体pcDNA3.1(-)的HepG2细胞进行cDNA芯片分析.结果:构建的表达载体经过限制性内切酶分析和DNA序列测定,证实准确无误.提取高质量的mRNA,逆转录为cDNA,进行DNA芯片技术分析.在1152个基因表达谱的筛选中,发现有6个基因表达水平显著上调,18个基因表达水平显著下调.结论:应用基因表达谱芯片技术成功筛选了NS5ATP3转染细胞后差异表达基因,为进一步阐明NS5ATP3蛋白可能的生物学功能提供依据.

eATP——植物细胞外的信使分子

对近年来植物细胞外ATP生理功能和信号转导机制的研究进展作介绍。

细胞外ATP对低温下菜豆叶片光系统Ⅱ运行及光能分配的影响

细胞外ATP(eATP)可作为一种重要的胞外分子调节植物的多种生理反应。该研究以菜豆(Phaseolus vulgaris L.)品种‘农普12号’幼苗叶片为实验材料,研究了胞外1.0mmol/L ATP溶液对低温下(10℃、10h)菜豆叶片光系统Ⅱ(PSⅡ)运行及光能分配的影响。结果显示:(1)低温胁迫(10℃、10h)对菜豆叶片PSⅡ的潜在最大光化学效率(F_v/F_m)没有产生显著性影响,但低温胁迫却降低了叶片的实际光化学运行效率[Y(Ⅱ)],同时降低了PSⅡ的光化学反应能量(P),增加了天线热耗散能量(D)和非光化学反应耗散能量(E),使叶片胞外ATP水平有所下降。(2)叶片施加外源ATP可以有效缓解低温胁迫下菜豆叶片胞外ATP水平的下降,同时使叶片的实际光化学效率[Y(Ⅱ)]和光化学反应能量(P)显著上升,也使天线热耗散能量(D)非光化学反应耗散能量(E)均显著下降。研究表明,低温胁迫降低了菜豆叶片PSⅡ的光化学运行并增加了光能的耗散,而在低温胁迫下增加胞外ATP水平能够有效提高菜豆叶片光化学反应的运行效率并降低光能的耗散。

慢支肺、脾、肾虚证型与红细胞ATP关系的探讨

慢支肺、脾、肾虚证型与红细胞ＡＴＰ关系的探讨江明（福建中医学院３５０００３）杨惠华陈志强（福建医学院附属协和医院３５０００３）关键词慢性支气管炎肺气虚脾阳虚肾阳虚红细胞ＡＴＰ慢性支气管炎中医认为是肺、脾、肾三脏俱虚之证，为了探讨它的虚证本质，我们对慢...