Ghrelin对THP-1源性泡沫细胞ATP结合盒转运子A1和G1表达的调控作用

目的:研究单核/巨噬细胞分化成为泡沫细胞过程中ghrelin对人ATP结合盒转运子A1和G1(ABCA1/ABCG1)表达的调控作用。方法:体外培养人源单核细胞系THP-1,由佛波酯(PMA)作用使其分化为巨噬细胞,后者可在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)存在条件下进一步转变为泡沫细胞。巨噬细胞加入不同浓度的Ghrelin预孵2h后再加入ox-LDL作用不同时间,油红O染色法观察细胞内脂滴含量,运用PT-PCR法检测ABCA1和ABCG1mRNA水平,Western blotting法检测ABCA1和ABCG1蛋白表达,采用酶法,通过荧光分光光度计检测细胞内外胆固醇含量并计算胆固醇流出率。结果:Ghrelin干预可明显减少细胞内脂滴的形成,显著增加胆固醇流出率,并能显著增加单核/巨噬细胞泡沫化过程中ABCA1和ABCG1mRNA水平和蛋白表达,且此作用呈浓度依赖性而不呈时间依赖性。结论:Ghrelin可能通过上调ABCA1和ABCG1转录翻译水平延缓动脉粥样硬化的发生。

脂多糖通过核因子-κB途径下调泡沫细胞ATP结合盒转运体A1的表达

脂多糖(LPS)介导的免疫炎症反应与动脉粥样硬化(As)的发生密切相关,ATP结合盒转运体A1(ABCA1)促进细胞内胆固醇流出,具有抗As作用.观察了LPS对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1表达及胆固醇流出的影响,并探讨TLR4/NF-κB信号途径和LXRs在此过程中的作用.THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞经不同浓度LPS处理或者用LPS作用不同时间,以LPS单独或用NF-κB抑制剂对甲苯磺酰-L-苯丙氨酸氯甲基甲酮(TPCK)预处理细胞后再加入LPS处理.RT-PCR检测ABCA1、TLR4和LXRα mRNA的表达,Western blot检测ABCA1、LXRα及核内NF-κBp65蛋白的表达,液体闪烁计数器检测细胞内胆固醇流出,高效液相色谱分析细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯含量.结果表明,LPS呈浓度和时间依赖性抑制ABCA1的表达,而增加TLR4 mRNA和核内NF-κBp65蛋白的表达,LPS使泡沫细胞内胆固醇流出减少,细胞总胆固醇、游离胆固醇与胆固醇酯增加,TPCK预处理后,LPS的这种作用被部分抑制,LXRα的表达不受LPS和TPCK的影响.这一结果提示,TLR4/NF-κB信号途径介导LPS对ABCA1表达及细胞内胆固醇流出的抑制作用,而LPS对ABCA1表达的调控不通过LXRα途径.

血管紧张素Ⅱ对THP-1源性泡沫细胞ATP结合盒转运子A1的影响

目的:以THP-1源性泡沫细胞为研究对象,探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对THP-1源性泡沫细胞ATP结合盒转运子A1(ABCA1)表达、细胞内胆固醇含量及胆固醇流出的影响。方法:运用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)和W estern b lotting分别检测AngⅡ对ABCA1 mRNA与ABCA1蛋白表达的影响,采用酶法,通过荧光分光光度计检测细胞内胆固醇含量,应用液体闪烁计数仪检测胆固醇流出的变化。结果:AngⅡ能引起THP-1源性泡沫细胞胆固醇含量显著升高(P<0.05)、ABCA1表达显著减少(P<0.05),AngⅡ受体拮抗剂厄贝沙坦(Irb)能显著减少细胞内胆固醇含量(P<0.05)、促进细胞内胆固醇流出及减轻AngⅡ对ABCA1的抑制作用(P<0.05)。结论:AngⅡ有通过其受体抑制ABCA1表达,促进泡沫细胞形成,加速动脉粥样硬化的作用。

新转移相关基因ATP结合盒转运子E1在非小细胞肺癌中的表达及其意义

目的观察ATP结合盒转运子E1(ABCE1)的mRNA和蛋白在非小细胞肺癌组织、癌旁肺组织及转移淋巴结中的表达情况,探讨其在肺癌发生、发展中的意义及其与各种临床病理参数的关系。方法应用半定量逆转录聚合酶链反应、Westernblot和免疫组织化学SP法检测非小细胞肺癌组织、癌旁肺组织和转移淋巴结中ABCE1 mRNA和蛋白的表达情况。结果肺癌组织和转移淋巴结中ABCE1 mRNA和蛋白的表达量均高于癌旁肺组织(P<0.05),且mRNA和蛋白的表达呈正相关(r=3.992,P=0.001)。ABCE1蛋白的表达与患者年龄、性别、组织学分级、有无淋巴结转移及pTNM分期无关(P>0.05),与病理类型有关(P=0.036),在肺腺癌中的表达高于鳞癌;ABCE1 mRNA的表达与肺癌组织学分级有关(P=0.026)。结论 ABCE1的表达可能与非小细胞肺癌的侵袭和转移相关,在肺癌的发生发展过程中起到了重要作用,并可能成为潜在的肿瘤标记物及预后指标。

血管紧张素(1-7)和血管紧张素Ⅱ对THP-1巨噬细胞ATP结合盒转运子A1表达及胆固醇外流的影响

目的探讨血管紧张素(1-7)[Ang(1-7)]及血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对THP-1巨噬细胞ATP结合盒转运子A1(ABCA1)表达及胆固醇外流的影响。方法将诱导分化的巨噬细胞随机分为对照组、AngⅡ组、Ang(1-7)组、AngⅡ+不同浓度Ang(1-7)组、AngⅡ+Ang(1-7)+A-779组,分别运用RT-PCR及Western blot方法检测AB-CA1 mRNA及蛋白的表达,液体闪烁计数仪检测胆固醇流出的变化。结果与对照组相比,AngⅡ可抑制ABCA1mRNA(0.471±0.036比0.857±0.053,P<0.05)及蛋白(0.473±0.029比0.652±0.031,P<0.05)的表达,减少胆固醇外流(8.937±0.353比13.942±0.478,P<0.05);而Ang(1-7)促进ABCA1 mRNA(0.949±0.087比0.857±0.053,P<0.05)及蛋白(0.722±0.045比0.652±0.031,P<0.05)的表达,增加了胆固醇外流(15.477±0.882比13.942±0.478,P<0.05),且呈剂量依赖性地减弱AngⅡ的抑制作用(P<0.05);ABCA1 mRNA及蛋白的表达和胆固醇外流A-779组与AngⅡ组比较差异无统计学意义(0.472±0.063比0.471±0.036、0.515±0.048比0.473±0.029及9.309±0.333比8.937±0.353,P>0.05)。结论 AngⅡ可抑制巨噬细胞ABCA1的表达、减少胆固醇外流;Ang(1-7)通过其特异性受体MAS受体介导拮抗AngⅡ抑制巨噬细胞ABCA1的表达,促进胆固醇流出,进而对动脉粥样硬化的发生发展起保护作用。

ATP结合盒转运子A1R219K基因多态性与2型糖尿病合并冠心病的相关性研究

目的探讨ATP结合盒转运子A1(ABCA1)R219K基因多态性与2型糖尿病(T2DM)合并冠心病(CHD)的关系。方法采用多聚酶链反应-限制性片段长度多态性法检测83例健康对照者(NC组)、72例单纯T2DM患者(CHD-组)、71例T2DM合并CHD患者(CHD+组)ABCA1219位点的多态基因型。结果在NC组、CHD-组、CHD+组中,KK基因型分布为19.3%、16.7%、4.2%;CHD+组与NC组、CHD-组KK基因型频率差异有统计学意义(P<0.05)。K等位基因频率分别为42.2%、38.9%、31.7%,三组间差异无统计学意义。在糖尿病患者中,KK基因型携带者的血浆HDL-C水平显著高于RR型,其差异有统计学意义(P<0.05)。结论ABCA1R219K基因多态性可能相关于T2DM并发的CHD。

中国汉族人群ATP结合盒转运子A1基因R219K多态性与冠心病关联研究的荟瘁分析

目的综合评价ATP结合盒转运子A1(ABCA1)基因R219K多态性在中国汉族人群冠心病发病中的作用。方法通过文献检索收集2012年5月以前完成或发表的中国汉族人群ABCAl基因R219K多态性与冠心病相关性的病例对照研究,剔除不符合要求的文献,Egger’s检验定量评价入选文献的偏倚,并根据各入选文献结果的同质性检验结果进行数据合并,计算总OR值,Meta分析采用Stata11.0统计软件。结果共12篇文献符合条件纳入研究,包括2257例患者和2356例对照人群,入选文献无明显偏倚。Meta分析结果显示ABCA1基因R219K位点(KK+RK)/RR基因型频率的合并OR值为0.66(95%CI为0.55～0.80,P<0.0001);KK/(RK+RR)基因型频率的合并OR值为0.63(95%CI为0.53～0.75,P<0.0001)。结论 ABCAl基因R219K多态性与中国汉族人群冠心病易感性相关,K等位基因减低了冠心病发病风险。

新疆维吾尔族ATP结合盒转运子A1基因R219K多态性与冠心病的关系

目的:探讨ATP结合盒转运子A1基因(ATP binding cassette transporter 1,ABCA1)R219K多态性在新疆维吾尔族人群中的分布及其与冠心病(CHD)的关系。方法:采用病例对照研究。用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法测定ABCA1基因多态性。结果:新疆维吾尔族ABCA1基因的多态性位点存在RR、RK、KK型三种基因型。冠心病组KK型基因频率、K等位基因频率低于对照组(P<0.05～<0.01)。K等位基因与冠心病的患病风险呈负相关,OR值为0.640(95%CI 0.459～0.893),该等位基因可能为冠心病的保护因素。K等位基因携带者的高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)水平高于RR基因型(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,性别、血清总胆固醇、吸烟、高血压、糖尿病为研究对象发生冠心病的独立危险因素。结论:研究显示K等位基因可能通过作用于血脂间接影响新疆维吾尔族冠心病的患病风险,但不是其免于发生冠心病的独立保护因素。

ATP结合盒转运子A1基因R219K的多态性与心房颤动相关性研究

目的探讨ATP结合盒转运子A1基因(ABCA1)R219K的多态性与心房颤动(房颤)相关性。方法选择250例房颤患者(房颤组)和250例非房颤者(对照组)为研究对象。采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性测定ABCA1基因的多态性,并检测所有研究对象的C反应蛋白(CRP)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)血清浓度;比较两组不同基因型、不同等位基因的分布及CRP、HDL-C的血清浓度。结果房颤组与对照组ABCA1R219KRR型、RK型、KK型基因型频率分别为42.0%、42.8%、15.2%和34.0%、43.2%、22.8%,房颤组KK型明显低于对照组(P=0.03);房颤组与对照组R等位基因、K等位基因分布频率为63.4%、36.6%和55.6%、44.4%,K等位基因分布频率在房颤组中较对照组明显降低(P=0.012);房颤组CRP浓度明显高于对照组(P=0.004),HDL-C浓度无明显差异;在不同基因型之间CRP、HDL-C浓度比较中发现,RR基因型CRP浓度显著高于KK型(P=0.013);而HDL-C浓度RR基因型低于RK型和KK型(P分别为0.009、0.027)。结论房颤的炎性指标CRP显著升高;ABCA1R219K位点K等位基因可能是房颤发生的一种保护因素。

ATP结合盒转运子A1基因R219K多态性在不同饮食结构人群中的分布特征及其与血脂水平的关系

目的探讨腺苷三磷酸(ATP)结合盒转运子A1基因(ATP binding cassette transporter 1,ABCA1)R219K多态性在不同饮食结构人群中的分布及其与血脂的关系。方法用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法测定ABCA1基因多态性。分析不同基因的频率在不同饮食结构人群的分布特点及其与血脂的关系。结果不同饮食结构的人群的ABCA1基因R219K的多态性位点存在RR、RK、KK型3种基因型,基因频率在不同饮食结构人群中的分布无差异性。K等位基因携带者的高密度脂蛋白胆固醇(High-density lipoprotein,HDL-C)水平高于RR基因型(P<0.05),KK型总胆固醇(Total Cholesterol,TC)水平低于RR型(P<0.05)。结论K等位基因可能产生有益的临床血脂谱。

阿托伐他汀抑制THP-1经PMA诱导后变成巨噬细胞ATP结合盒转运子A1mRNA和蛋白的表达

目的探讨阿托伐他汀对THP-1巨噬细胞ATP结合盒转运子A1(ABCA1)mRNA和蛋白及LXRαmRNA表达的影响。方法体外培养的人THP-1单核细胞,经氟波酯(PMA)诱导48 h,使形成巨噬细胞,将分化良好的巨噬细胞分别加入含不同浓度或不含阿托伐他汀的无血清RPMI 1640培养基,培养24 h或48 h,收集细胞。用多聚酶链反应(RT-PCR)和免疫组化法检测THP-1巨噬细胞ABCA1 mRNA和蛋白及LXRαmRNA的表达。结果含阿托伐他汀(10μmol/L)的培养基体外培养人THP-1巨噬细胞24 h,ABCA1(相对表达量IA值1.21,对照组1.48)和LXRαmRNA(A值0.87,对照组1.12)表达比对照组明显减少(P<0.05),延长培养时间,ABCA1和LXRαmRNA表达有进一步减少趋势。结论阿托伐他汀抑制体外培养的人THP-1巨噬细胞ABCA1 mRNA和蛋白及LXRαmRNA的表达。

蒙古族ATP结合盒转运子A1基因R219K多态性与冠心病的相关性

目的探讨ATP结合盒转运子A1基因（ATP binding cassette transporter 1,ABCA1）R219K多态性在内蒙古地区蒙古族人群中的分布及其与冠心病的关系。方法采用聚合酶链反应-限制片段长度多态性方法检测115名蒙古族冠心病患者和对照组ABCA1基因相应片段的多态性。结果两组基因型频率均符合Hardy-Weinberg平衡。内蒙古地区蒙古族人群中ABCA1基因R219K多态性位点存在RR、RK、KK三种基因型,对照组的KK基因型的频率显著高于CHD组（32.7% vs 16.7%,P〈0.05）。KK基因型的OR值为0.411（95% CI0.17~0.99）。结论 ABCA1基因R219K多态性与内蒙古地区蒙古族人群冠心病的遗传易感性相关,其中基因型KK可能是冠心病的保护因子。

肿瘤坏死因子-α对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ATP结合盒转运蛋白A1表达的影响

目的:观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)表达的影响,同时探讨核因子-κB(NF-κB)在TNF-α调控ABC A1表达中的作用。方法:THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞随机分为4组:对照组、TNF-α组、甲苯磺酰苯丙氨酰氯甲酮(TPCK,NF-κB的抑制剂)组、TPCK+TNF-α组。运用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和W estern b lot检测各组不同的时间点(0、6、12、24和48 h)ABCA1 mRNA和ABCA1蛋白的表达。结果:对照组和TPCK组ABCA1mRNA和蛋白表达均无明显变化;TNF-α组ABCA1mRNA和蛋白表达呈时间依赖性降低(P<0.05);TPCK+TNF-α组ABCA1mRNA和蛋白表达也呈时间依赖性降低,但同TNF-α组比较,其下降程度有明显减轻(P<0.05)。结论:TNF-α可以通过活化NF-κB抑制THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1的表达。

槲皮素对非酒精性脂肪肝细胞ATP结合框转运子A1 mRNA表达的影响

目的:探讨植物化学物质槲皮素(quercetin)对非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver,NAFL)细胞三磷腺苷结合框转运子A1(ABCA1)表达的影响。方法:建立人肝L-02细胞脂肪变性模型,以不同浓度的槲皮素处理细胞后,用RT-PCR检测ABCA1 mRNA的表达。结果:槲皮素可以增加NAFL细胞ABCA1 mRNA的表达,且呈剂量依赖性。结论:槲皮素能上调胆固醇转运中的重要蛋白ABCA1的表达。

ATP结合盒转运子A1对巨噬细胞载脂蛋白E分泌的调节作用

目的 :研究ABC转运子 (ABC)A1对巨噬细胞载脂蛋白E(apoE)的分泌是否具有调节作用。方法 :利用佛波酯刺激人单核细胞系THP - 1细胞分化 ;分别将ABCA1表达的激动剂 8-Br -cAMP、抑制剂格列苯脲和针对ABCA1mRNA的特异性反义寡核苷酸与分化后的THP - 1巨噬细胞或巨噬细胞泡沫细胞一起孵育 ,通过酶联免疫吸附试验和Northernblot检测其对细胞apoE的产生、分泌以及apoE基因表达的影响。结果 :在孵育 8h时 ,8-Br-cAMP可使THP - 1巨噬细胞apoE分泌增加 (P <0 0 5 ) ,而格列苯脲和针对ABCA1mRNA的反义寡核苷酸则明显减少THP - 1巨噬细胞和巨噬细胞泡沫细胞的apoE分泌 (P <0 0 1)。同时这些调节剂均不改变THP1巨噬细胞内apoE含量和apoEmRNA表达水平。结论 :ABCA1促进巨噬细胞和巨噬细胞泡沫细胞apoE的分泌 。

ATP结合盒转运子A1与动脉粥样硬化(1)

ATP结合盒转运子A1(ABCA1)蛋白是一个由2 261个氨基酸组成的蛋白,含有2个核酸结合区,2个细胞外攀和含有6个螺旋的跨膜区。其功能是直接或间接介导胆固醇和磷脂通过细胞膜,再由载脂蛋白运走。人体50种组织中存在ABCA1 mR-NA,其转录受细胞多余胆固醇的调节,这种调节又受肝脏核受体(LXR)和视黄素受体(RXR)的调节。ABCA1不同部位的基因突变对其功能影响不同。在普通人群中ABCA1常见基因变异可能与高密度脂蛋白胆固醇水平,动脉粥样硬化发生有关。

血管紧张素Ⅱ对THP-1源性泡沫细胞ATP结合盒转运子A1表达的调控作用

目的观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对THP-1源性泡沫细胞ATP结合盒转运子A1(ABCA1)表达的调控作用。方法以50mg/L的氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)温育人巨噬细胞系THP-1源性巨噬细胞48h为对照,同时分别加入10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L的AngⅡ,采用RT-PCR和Westernblotting法分别检测THP-1源性泡沫细胞中ABCA1mRNA与蛋白的表达,采用酶法检测细胞内胆固醇含量,应用液体闪烁计数仪检测胆固醇流出的变化。结果与对照组比较,10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/LAngⅡ组ABCA1mRNA和蛋白表达均下降(P<0.05),胞内胆固醇含量增加(P<0.05),胆固醇流出率减少(P<0.05)。结论AngⅡ可下调THP-1源性泡沫细胞ABCA1的表达,促进泡沫细胞形成。

Ghrelin对THP-1源性泡沫细胞ATP结合盒转运子G1的调控作用及途径

目的探讨Ghrelin对人单核细胞系(THP-1)源性泡沫细胞ATP结合盒转运子G1(ABCG1)表达的调控作用及其可能途径。方法体外培养THP-1,由佛波酯(PMA)作用使其分化为巨噬细胞,继而在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)存在条件下进一步转变为泡沫细胞,油红O染色法鉴定泡沫细胞形成。运用RT-PCR法和Western印迹法分别检测Ghrelin干预后及封闭过氧化物酶体增生物激活受体γ(PPARγ)后ABCG1 mRNA与蛋白表达。采用酶法,通过荧光分光光度计检测胆固醇含量及胆固醇流出率。结果 Ghrelin可明显减少细胞内脂滴的形成,增加胆固醇流出,并能显著增加单核/巨噬细胞泡沫化过程中ABCG1 mRNA水平和蛋白表达,此作用呈浓度依赖性。封闭PPARγ后,Ghrelin抑制泡沫细胞形成的效应被阻断,且PPARγ拮抗剂浓度越高,该阻断作用越明显。结论 Ghrelin可能通过上调ABCG1转录翻译水平延缓动脉粥样硬化的发生,且该效应可能通过PPARγ途径发挥作用。

高压力及曲格列酮对THP-1源泡沫细胞ATP结合盒转运子A1表达的影响

目的观察高压力及曲格列酮干预对THP-1源泡沫细胞ABCA1 mRNA及蛋白表达的影响。方法将THP-1源泡沫细胞分为9组:对照组、120组、140组、160组、180组、120T组、140T组、160T组和180T组。对照组、120组、140组、160组和180组分别在0～180mmHg压力下培养48h;其余4组则先给予曲格列酮干预后,再分别在相应压力下继续培养48h,终止实验。结果120组、140组、160组和180组ABCA1 mRNA表达较对照组明显减少,120T组、140T组、160T组和180T组与相应组比较,mRNA表达明显增加,差异有显著性(P<0.05或P<0.01),120T组和140T组mRNA表达与对照组相当(P>0.05),ABCA1蛋白表达与mRNA类似。结论高压力下调了THP-1源泡沫细胞ABCA1 mRNA和蛋白表达。曲格列酮能阻断或减弱这种作用,提示高压力减少ABCA1 mRNA和蛋白表达的作用与PPARγ有关。

ATP结合盒转运子E1基因与人肾小球系膜细胞增殖的相关性

目的探讨ATP结合盒转运子E1基因(ABCE1)在人肾小球系膜细胞中的表达及与系膜细胞增殖的关系。方法应用细胞免疫荧光法检测ABCE1在人肾小球系膜细胞中的表达,应用脂质体介导法将ABCE1-siRNA载体转染人肾系膜细胞,观察转染ABCE1-siRNA前后细胞增殖能力的变化。结果 ABCE1在系膜细胞浆和细胞核均有表达,在浆内表达多于核的表达,转染ABCE1-siRNA后细胞的增殖明显减慢。结论 ABCE1在人肾小球系膜细胞中有表达,且其与细胞增殖能力有关。