脂多糖通过核因子-κB途径下调泡沫细胞ATP结合盒转运体A1的表达

脂多糖(LPS)介导的免疫炎症反应与动脉粥样硬化(As)的发生密切相关,ATP结合盒转运体A1(ABCA1)促进细胞内胆固醇流出,具有抗As作用.观察了LPS对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1表达及胆固醇流出的影响,并探讨TLR4/NF-κB信号途径和LXRs在此过程中的作用.THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞经不同浓度LPS处理或者用LPS作用不同时间,以LPS单独或用NF-κB抑制剂对甲苯磺酰-L-苯丙氨酸氯甲基甲酮(TPCK)预处理细胞后再加入LPS处理.RT-PCR检测ABCA1、TLR4和LXRα mRNA的表达,Western blot检测ABCA1、LXRα及核内NF-κBp65蛋白的表达,液体闪烁计数器检测细胞内胆固醇流出,高效液相色谱分析细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯含量.结果表明,LPS呈浓度和时间依赖性抑制ABCA1的表达,而增加TLR4 mRNA和核内NF-κBp65蛋白的表达,LPS使泡沫细胞内胆固醇流出减少,细胞总胆固醇、游离胆固醇与胆固醇酯增加,TPCK预处理后,LPS的这种作用被部分抑制,LXRα的表达不受LPS和TPCK的影响.这一结果提示,TLR4/NF-κB信号途径介导LPS对ABCA1表达及细胞内胆固醇流出的抑制作用,而LPS对ABCA1表达的调控不通过LXRα途径.

ATP结合盒转运体G1与动脉粥样硬化的研究进展

ATP结合盒转运体G1(ABCG1)是人类ATP结合盒转运体超家族的成员之一,可促进细胞内的胆固醇和磷脂外流,维持细胞脂质稳态平衡。ABCG1缺乏可参与泡沫细胞形成、内皮细胞功能紊乱和炎症反应等,进而影响动脉粥样硬化的形成和发展。但是无论在动物实验还是人体研究,ABCG1在动脉粥样硬化中的作用都有争议,本文针对ABCG1在动脉粥样硬化疾病中的研究进展进行综述。

普罗布考下调氧化型低密度脂蛋白诱导THP-1巨噬细胞ATP结合盒转运体A1的表达

目的观察普罗布考对氧化型低密度脂蛋白诱导THP-1巨噬细胞ATP结合盒转运体A1表达的影响。方法用逆转录聚合酶链反应、免疫荧光分别检测ATP结合盒转运体A1mRNA水平和蛋白的表达。结果用氧化型低密度脂蛋白(100mg/L)分别孵育细胞0、12、24及48h,实验结果发现ATP结合盒转运体A1mRNA水平呈时序上调;用50μmol/L普罗布考预处理细胞4h,再用氧化型低密度脂蛋白孵育48h,普罗布考加氧化型低密度脂蛋白(100mg/L)处理组与氧化型低密度脂蛋白(100mg/L)处理组ATP结合盒转运体A1mRNA水平无明显差异,但免疫荧光检测发现普罗布考加氧化型低密度脂蛋白(100mg/L)处理组ATP结合盒转运体A1蛋白表达下调。结论普罗布考下调氧化型低密度脂蛋白诱导THP-1巨噬细胞ATP结合盒转运体A1蛋白的表达。

ATP结合盒转运体A1基因G596A变异对血脂的影响

目的探讨ATP结合盒转运体A1(ATP-bindingcassettetransporter1,ABCA1)基因G596A变异是否影响人群的血脂水平。方法对象选自中国西北地区汉族人267名,年龄(62±9)岁。以蛋白酶K消化、苯酚及氯仿抽提以及异丙醇沉淀的方法提取全基因组DNA。应用聚合酶链反应、限制性内切酶片段长度多态性结合测序的方法检测ABCA1基因单核苷酸多态性。结果该研究群体等位基因ABCA1-A和G的基因频率分别为51.6%和48.4%,符合Hardy-Weinberg平衡定律(χ2=0.66,P>0.50)。在ABCA1G596A的GG、GA和AA的3种基因型中,高密度脂蛋白水平依次呈上升趋势,GG型(1.15±0.38)mmol/L与AA型(1.28±0.48)mmol/L差异无统计学意义(P<0.05);甘油三酯水平依次呈下降趋势,GG型(2.0±1.1)mmol/L与AA型(1.7±1.1)mmol/L差异有统计学意义(P<0.05)。结论ABCA1G596A变异可影响西北地区人群的血脂水平,GG型携带者可产生有益的临床血脂谱。

ATP结合盒转运体A1介导细胞胆固醇流出及新生盘状高密度脂蛋白形成机制研究进展

ATP结合盒转运体A1介导细胞胆固醇流出,在新生高密度脂蛋白形成中起重要作用,具有抗动脉粥样硬化功能已被普遍接受,但其机制尚未很好阐明。近来研究显示ABCA1活性可使细胞表面产生两种高亲和力载脂蛋白AI结合部位:载脂蛋白AI/ABCA1直接相互作用的低容量结合部位和载脂蛋白AI/脂质相互作用的高容量结合部位。一个关于ABCA1介导细胞胆固醇流出到载脂蛋白AI及新生高密度脂蛋白形成机制的三步学说已提出。第一步:载脂蛋白AI与ABCA1结合引起细胞膜磷脂转位,导致膜磷脂不对称分布。第二步:膜磷脂不对称分布产生膜张力,导致突出膜外囊泡突起状载脂蛋白AI高容量结合部位形成。第三步:载脂蛋白AI与高容量结合部位脂质结合,导致高容量结合部位脂质自发溶解和载脂蛋白AI脂质化,形成新生高密度脂蛋白。此步反应是整个过程的限速步骤。细胞内也存在载脂蛋白AI脂质化部位,这一过程也是由ABCA1介导的。

miR-20a与ATP结合盒转运体A1的靶向结合作用

目的探讨miR-20a是否可与ATP结合盒转运体A1（ABCAl）靶向结合。方法利用生物信息学预测网站TargetScan、miRan—da、PieTar、RNAhybrid和miRNAviewerTargetScan进行靶基因预测和保守性及自由能分析；利用荧光素酶报告基因实验分析miR-20a是否对ABCAl3’UTR中靶点有直接靶向抑制作用。

ATP结合盒转运体A1基因变异与冠心病的研究进展

脂质代谢异常是冠心病的发病机制之一,ATP结合盒转运子A1(ABCA1)在胆固醇的逆向转运及高密度脂蛋白生成中起重要作用。ABCA1基因变异可引起脂质代谢紊乱,促进动脉粥样硬化及冠心病的发生发展。本文就近年来对ABCA1基因变异与冠心病关联性及其参与冠心病发病机制方面的研究做一综述。

小檗碱调节肝X受体α去乙酰化促进THP-1巨噬细胞ATP结合盒转运体A1表达及其胆固醇流出

目的观察小檗碱对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ATP结合盒转运体A1(ABCA1)表达及其细胞内胆固醇流出的影响,并探讨肝X受体α(LXR-α)去乙酰化在此过程中的作用。方法用不同浓度的小檗碱(0、5、10、20μmol/L)处理THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞24 h,或以20μmol/L小檗碱处理THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞不同的时间(0、6、12、24 h)。采用Western Blot检测ABCA1、LXR-α和乙酰化LXR-α的蛋白表达,液体闪烁计数法观察细胞内胆固醇的流出,高效液相色谱法测定细胞内胆固醇浓度。结果与对照组比较,小檗碱呈浓度(0～20μmol/L)和时间依赖性(0～24 h)上调巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1的表达和下调乙酰化LXR-α的表达,增加THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇的流出,减少细胞内胆固醇的含量。上述效应在20μmol/L小檗碱处理THP-1巨噬细胞24 h后达到最大值。结论小檗碱能上调THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1的表达,并促进细胞内胆固醇流出,这种效应与调节LXR-α乙酰化有关。

ATP结合盒转运体G1与动脉粥样硬化的关系

ATP结合盒转运体G1(ATP binding cassette transporter G1,ABCG1)是ABC转运蛋白超家族的成员,主要负责促进胆固醇流出到成熟的高密度脂蛋白,对于防止胆固醇在巨噬细胞中的积聚起着至关重要的作用。ABCG1缺乏可导致泡沫细胞形成、内皮细胞功能紊乱和炎症反应等,进而影响动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的形成与发展。本文主要对ABCG1参与AS发生发展的相关机制进行综述,以期为AS治疗提供新的理论依据和药物靶点。

树鼠句膜转运蛋白ATP结合盒转运体A1cDNA和蛋白质结构分析及其组织表达

目的获得不易感动脉粥样硬化动物树鼠句的膜转运蛋白ATP结合盒转运体A1的cDNA和蛋白质序列,鉴定其组织分布,探讨其是否参与树鼠句独特的高密度脂蛋白代谢。方法以树鼠句肝脏mRNA反转录获得的cDNA一链为模板,应用SMART-RACE技术,获得树鼠句ATP结合盒转运体A1 cDNA序列并推导出其氨基酸序列,应用实时聚合酶链反应技术分析树鼠句ATP结合盒转运体A1 mRNA在各组织中的分布情况。结果获得的树鼠句ATP结合盒转运体A1 cDNA序列全长为7 762 bp,其中开放阅读框架6 786 bp,编码2 261个氨基酸的蛋白。该蛋白与人ATP结合盒转运体A1的长度相同,二者在氨基酸水平上高度同源(95%)。多组织表达谱显示树鼠句ATP结合盒转运体A1在多种组织中广泛表达,其中表达量最高的依次为肺脏、肝脏、肾脏和脾脏,这与人和小鼠ATP结合盒转运体A1在肝中高表达而在肺和脾中低表达的分布有很大差异。结论树鼠句ATP结合盒转运体A1组织表达谱的特点有可能增加其在体内的浓度和数量,从而可能间接增加高密度脂蛋白的合成。

抑制ATP结合盒转运体亚家族C成员8表达促进大鼠脊髓损伤后神经组织修复和神经功能恢复

目的探究大鼠脊髓损伤发生后,损伤脊髓组织内ATP结合盒转运体亚家族C成员8（Abcc8）基因表达量变化及抑制Abcc8表达对脊髓损伤大鼠神经组织和神经功能恢复的影响。方法采用改良的Allen重物坠落打击法造成成年雌性Wistar大鼠（6月龄,200-220 g）中度脊髓损伤5 d后,通过苏木精-伊红（HE）染色检测脊髓损伤程度,通过免疫组织化学染色检测损伤脊髓组织内Abcc8基因表达产物磺脲受体1（SUR1）的表达量变化。大鼠脊髓损伤后立即通过经静脉给予反义核苷酸（ASO）抑制损伤脊髓内Abcc8基因表达,大鼠脊髓损伤28 d后通过Basso Beattie Bresnahan（BBB）评分评价大鼠运动功能,通过HE染色检测脊髓组织损伤区域面积。结果大鼠脊髓损伤5 d后,HE染色显示,损伤脊髓组织出现明显空洞和组织缺损,伴有多量炎细胞浸润和残存组织变形移位。免疫组织化学染色（荧光法）显示,大鼠脊髓损伤中心区域邻近坏死组织的半暗区内SUR1抗原荧光强度显著增加。大鼠脊髓损伤28 d后的HE染色-损伤区域面积测定显示,脊髓损伤后立即接受Abcc8-ASO治疗的大鼠脊髓损伤节段病灶面积明显减少。BBB运动功能评分显示,脊髓损伤发生后即进行Abcc8-ASO静脉注射治疗的大鼠的后肢运动功能恢复显著增强。结论大鼠脊髓损伤后,损伤脊髓组织内Abcc8基因表达量上升,抑制Abcc8表达对脊髓损伤大鼠神经组织和神经功能的恢复具有显著促进作用。

内脂素对THP-1源性巨噬细胞ATP结合盒转运蛋白A1表达的影响

目的:观察内脂素(visfatin)对人单核细胞株THP-1源性巨噬细胞ATP结合盒转运蛋白A1(AB-CA1)表达的影响,探讨visfatin诱导THP-1源性泡沫细胞形成的机制。方法:THP-1单核细胞诱导分化为巨噬细胞,予不同浓度和时间的visfatin进行干预,分别运用油红O染色观察细胞浆脂滴变化,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和蛋白免疫印迹(Western blotting)法检测各组细胞ABCA1 mRNA和蛋白表达,酶荧光学法检测细胞内总胆固醇(TC)和游离胆固醇(FC)含量,TC与FC之差为胆固醇酯(CE)含量。结果:与对照组比较,visfatin干预组细胞浆脂滴明显增多,细胞内FC和CE含量增加(均P<0.05)。Visfatin呈浓度和时间依赖性地下调ABCA1mRNA和蛋白表达(P<0.05)。结论:Visfatin下调THP-1源性巨噬细胞ABCA1的表达,使细胞内FC流出减少,CE合成增加,从而诱导泡沫细胞的形成。

冠心病与三磷酸腺苷结合盒转运子A1基因R219K多态性关联的研究

目的探讨三磷酸腺苷结合盒转运子A1(ABCA1)基因R219K多态性与冠心病发病的相关性。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术,对227例冠心病患者(冠心病组)和162例非冠心病患者(对照组)的ABCA1基因R219K位点G→A(Arg219Lys)进行检测,分析基因型和等位基因频率分布特点以及与血脂、冠心病发病的相关性。结果冠心病组RR基因型频率(42.3%)明显高于对照组(31.5%),差异有统计学意义(P<0.05);而KK型频率(10.6%)显著低于对照组(20.4%),差异有统计学意义(P<0.05)。突变纯合基因(KK)携带率在急性冠状动脉综合征(ACS)组为10.1%,稳定型心绞痛(SAP)组为11.6%,对照组为20.4%,其中ACS组与对照组间差异有统计学意义(P<0.05),而SAP组与ACS组间差异无统计学意义(P>0.05)。冠心病组中KK基因型携带者的三酰甘油(TG)水平为(1.43±0.59)mmol/L,低于RR基因型携带者的(1.87±1.34)mmol/L,差异有统计学意义(P<0.05),KK型基因携带者高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平为(1.34±0.35)mmol/L,高于RR基因型携带者的(1.09±0.18)mmol/L,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ABCA1基因R219K多态性不仅与血脂水平有关,与冠心病发病也相关。

葛花提取物通过激活PPARγ上调ABCA1的表达而抑制THP-1源性泡沫细胞形成

[目的]探寻葛花提取物(PFE)对巨噬细胞源性泡沫细胞脂质蓄积的影响。[方法]通过MTT法筛选PFE对THP-1源性泡沫细胞的作用浓度,采用油红O染色和胆固醇检测试剂盒检测细胞内脂质蓄积情况,采用胆固醇流出试剂盒检测细胞的胆固醇流出水平,使用RT-qPCR和Western blot检测mRNA和蛋白表达。[结果]PFE显著降低THP-1源性泡沫细胞内的脂质蓄积。PFE不影响CD36、清道夫受体AⅠ(SR-AⅠ)、固醇调节元件结合蛋白2(SREBP2)及3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR)的mRNA表达,但能上调ATP结合盒转运体A1(ABCA1)的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05),促进巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出(P<0.01)。PFE可以激活过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的活性(P<0.01)及上调其mRNA和蛋白表达水平(P<0.05)。与PFE对照组相比,加入GW9662处理后PPARγ和ABCA1的蛋白表达水平均下降(P<0.01),胆固醇流出水平降低(P<0.01)。[结论]PFE可显著改善THP-1源性泡沫细胞内的脂质蓄积,通过PPARγ上调ABCA1表达及其介导的胆固醇流出抑制泡沫细胞形成。

微小RNA-519靶向ATP结合盒转运体G1调控乳腺癌细胞化疗耐药性的机制

目的探讨微小RNA(miRNA,miR)-519靶向ATP结合盒转运体G1(ABCG1)对乳腺癌细胞吉西他滨耐药性的影响。方法选取2015年6月到2018年6月来焦作市人民医院接受治疗的乳腺癌患者148例。根据患者对吉西他滨化疗敏感性分为敏感组和耐药组。荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析两组乳腺癌组织中miR-519表达水平。构建miR-519或对照miRNA过表达慢病毒载体,包装慢病毒,感染MCF-7乳腺癌细胞,构建miR-519(miR-519组)和对照组细胞株(miRNA对照组)。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法分析miR-519组和miRNA对照组细胞对吉西他滨的敏感性。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-519的靶基因;采用蛋白质印迹法(Western blot)分析miR-519对靶基因表达的影响。组间数据比较采用t检验,以P<0.05为差异有统计学意义。结果与吉西他滨敏感组(1.21±0.23)比较,耐药组患者肿瘤组织中miR-519 mRNA表达水平(0.30±0.12)明显下降,差异有统计学意义(t=3.091,P<0.05)。CCK-8结果显示,miR-519组和miRNA对照组细胞增殖能力(1.76±0.23比1.65±0.26)比较差异无统计学意义(t=0.691,P>0.05)。经吉西他滨处理后,miR-519组细胞增殖能力(0.68±0.19)较miRNA对照组细胞(1.12±0.22)明显下降,差异有统计学意义(t=2.819,P<0.05)。生物信息学和双荧光素酶报告基因显示ABCG1是miR-519靶基因。耐药组肿瘤组织中ABCG1蛋白表达水平(1.65±0.25)明显高于敏感组肿瘤组织(0.84±0.19),差异有统计学意义(t=2.619,P<0.05)。miR-519组细胞ABCG1蛋白表达水平(0.34±0.11)较miRNA对照组细胞(1.43±0.24)明显增加,差异有统计学意义(t=3.014,P<0.05)。结论 miR-519可能通过ABCG1调控乳腺癌对吉西他滨的敏感性。

ABCA1和ABCG1在胆固醇逆转运中作用的研究进展

胆固醇逆转运是机体排除过多胆固醇的唯一途径,对维持生物体胆固醇代谢稳态有着重大意义。ATP结合盒转运体A1(ABCA1)和ATP结合盒转运体G1(ABCG1)是ATP结合盒转运体家族中的一员,它们通过不同的机制在胆固醇逆转运中起着重要作用。关于ABCA1和ABCG1研究很多,而对于两者在胆固醇逆转运中的联合作用的文献较少。本文就国外ABCA1和ABCG1在胆固醇逆转运中的研究进展进行综述。

胶原酶诱导脑出血模型小鼠血肿周围组织ATP结合盒转运体A1表达的动态变化

目的 探讨胶原酶诱导脑出血模型小鼠血肿周围组织ATP结合盒转运体A1（ATP binding cassette transporter A1,ABCA1）表达.方法 立体定向注射Ⅳ型胶原酶建立小鼠尾状壳核脑出血模型,在模型制作后24 h、48 h和72 h利用行为学评分评估神经功能缺损,尼氏染色检测血肿周围神经元形态,免疫组化染色及蛋白质印迹分析检测血肿周围ABCA1表达.结果 血肿周围神经元尼氏小体减少、萎缩、坏死,且随着时间推移而加重.免疫组化染色和蛋白质印迹分析均显示血肿周围组织ABCA1表达水平显著高于假手术组（P均〈0.05）,且表达水平随着时间的推移显著增高（P均〈0.05）.结论 ABCA1在脑出血后表达上调,提示其可能参与脑出血的病理学过程.

三磷酸腺苷结合盒转运体A1与A7在胆固醇逆转运中的作用

三磷酸腺苷(ATP)结合盒转运体A1(ABCA1)是ATP结合盒转运体家族中和ATP结合盒转运体A7(ABCA7)最高同源性蛋白之一,分别通过影响胆固醇和磷脂的流出参与胆固醇逆转运。肝孤儿受体和视黄酸X受体是ABCA1的主要转录调控因子,而ABCA7受到固醇调节元件结合蛋白系统和固醇的调节,并参与吞噬作用。ABCA1和ABCA7在细胞脂质内稳态的调节中起到重要作用。