川芎嗪对人非小细胞肺癌耐药细胞株A549/DDP的相关ATP结合盒转运体表达水平的影响

目的:观察川芎嗪(四甲基吡嗪)对耐药相关ATP结合盒转运体B1(ABCB1)、C1(ABCC1)和G2(ABCG2)表达水平的影响,揭示其逆转人非小细胞肺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP耐药的机制。方法:采用细胞增殖(CCK8)实验,分析人肺腺癌细胞株A549及顺铂耐药株A549/DDP对顺铂的耐受性,计算耐药指数。分析A549/DDP对川芎嗪的耐受性,遴选逆转耐药所需的工作浓度并检测逆转效果。设置空白组接种A549细胞,模型组、实验组和阳性对照组均接种A549/DDP细胞;空白组和模型组均用1640完全培养基孵育,实验组用含工作浓度川芎嗪的1640完全培养基孵育,阳性对照组用含Tariquidar的1640完全培养基孵育。提取各组全部蛋白及mRNA,用免疫印迹法(Western Blot)和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分析川芎嗪对ABCB1、ABCC1和ABCG2及其m RNA表达水平的影响。结果:A549细胞对顺铂的半数抑制浓度(IC50)为(28.33±3.19)μM,A549/DDP对顺铂的IC50为(983.43±101.67)μM,A549/DDP的耐药指数为34.71。当川芎嗪浓度不高于150μM时,A549/DDP细胞活性无影响,遴选100μM为川芎嗪逆转耐药的工作浓度,1μM作为阳性对照药Tariquidar的工作浓度。川芎嗪逆转耐药指数为7.68,Tariquidar为5.74。Western Blot实验发现,模型组ABCB1、ABCC1和ABCG2的表达水平均高于空白组,在实验组和阳性对照组中均不同程度下调,差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCT实验显示,实验组和阳性对照组ABCB1和ABCC1 mRNA的表达水平与模型组比较均有不同程度的下调(P<0.05),但ABCG2 mRNA的表达水未见明显变化(P>0.05)。结论:川芎嗪可下调ABCB1、ABCC1和ABCG2的表达水平,此可能为逆转A549/DDP细胞对顺铂耐受性的机制之一。

ATP结合盒转运体G5/8(ABCG5/8)在胆囊胆固醇结石形成及治疗中的作用

胆固醇结石是胆囊结石患者的常见类型,且受多种因素影响。近年来,遗传学因素在胆囊结石中研究广泛,尤其在胆固醇结石形成机制中的作用成为当前研究的热点。ATP结合盒转运体(ABC)是人体内最大的膜转运蛋白家族,在维持脂质和甾醇平衡中发挥着关键功能。ABCG5/8是胆固醇转运蛋白,参与调节体内胆固醇水平,被认为是人体胆固醇结石的主要遗传易感因素。本文讨论了ABCG5/8在胆囊胆固醇结石形成中作用的相关研究进展,并介绍了靶向ABCG5/8治疗胆固醇结石的可能性,为胆固醇结石的病因探究及临床治疗提供一定的理论依据。

脂多糖通过核因子-κB途径下调泡沫细胞ATP结合盒转运体A1的表达

脂多糖(LPS)介导的免疫炎症反应与动脉粥样硬化(As)的发生密切相关,ATP结合盒转运体A1(ABCA1)促进细胞内胆固醇流出,具有抗As作用.观察了LPS对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1表达及胆固醇流出的影响,并探讨TLR4/NF-κB信号途径和LXRs在此过程中的作用.THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞经不同浓度LPS处理或者用LPS作用不同时间,以LPS单独或用NF-κB抑制剂对甲苯磺酰-L-苯丙氨酸氯甲基甲酮(TPCK)预处理细胞后再加入LPS处理.RT-PCR检测ABCA1、TLR4和LXRα mRNA的表达,Western blot检测ABCA1、LXRα及核内NF-κBp65蛋白的表达,液体闪烁计数器检测细胞内胆固醇流出,高效液相色谱分析细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯含量.结果表明,LPS呈浓度和时间依赖性抑制ABCA1的表达,而增加TLR4 mRNA和核内NF-κBp65蛋白的表达,LPS使泡沫细胞内胆固醇流出减少,细胞总胆固醇、游离胆固醇与胆固醇酯增加,TPCK预处理后,LPS的这种作用被部分抑制,LXRα的表达不受LPS和TPCK的影响.这一结果提示,TLR4/NF-κB信号途径介导LPS对ABCA1表达及细胞内胆固醇流出的抑制作用,而LPS对ABCA1表达的调控不通过LXRα途径.

ATP结合盒转运体G1与动脉粥样硬化的研究进展

ATP结合盒转运体G1(ABCG1)是人类ATP结合盒转运体超家族的成员之一,可促进细胞内的胆固醇和磷脂外流,维持细胞脂质稳态平衡。ABCG1缺乏可参与泡沫细胞形成、内皮细胞功能紊乱和炎症反应等,进而影响动脉粥样硬化的形成和发展。但是无论在动物实验还是人体研究,ABCG1在动脉粥样硬化中的作用都有争议,本文针对ABCG1在动脉粥样硬化疾病中的研究进展进行综述。

普罗布考下调氧化型低密度脂蛋白诱导THP-1巨噬细胞ATP结合盒转运体A1的表达

目的观察普罗布考对氧化型低密度脂蛋白诱导THP-1巨噬细胞ATP结合盒转运体A1表达的影响。方法用逆转录聚合酶链反应、免疫荧光分别检测ATP结合盒转运体A1mRNA水平和蛋白的表达。结果用氧化型低密度脂蛋白(100mg/L)分别孵育细胞0、12、24及48h,实验结果发现ATP结合盒转运体A1mRNA水平呈时序上调;用50μmol/L普罗布考预处理细胞4h,再用氧化型低密度脂蛋白孵育48h,普罗布考加氧化型低密度脂蛋白(100mg/L)处理组与氧化型低密度脂蛋白(100mg/L)处理组ATP结合盒转运体A1mRNA水平无明显差异,但免疫荧光检测发现普罗布考加氧化型低密度脂蛋白(100mg/L)处理组ATP结合盒转运体A1蛋白表达下调。结论普罗布考下调氧化型低密度脂蛋白诱导THP-1巨噬细胞ATP结合盒转运体A1蛋白的表达。

ATP结合盒转运体基因在鼻咽癌紫杉醇耐药细胞中的表达

目的分析ATP结合盒转运体基因在鼻咽癌细胞对紫杉醇产生耐药过程中的作用。方法采用大剂量紫杉醇冲击和逐渐增加剂量相结合的方法建立鼻咽癌紫杉醇耐药细胞系CNE-1/Taxol,运用包含49个ATP结合盒转运体家族成员的AffymetrixHuman Genome U133Plus2.0芯片分析鼻咽癌紫杉醇耐药细胞系CNE-1/Taxol及其亲本细胞系CNE-1之间的基因表达差异。结果发现了ABCA7、ABCB10、ABCC1、ABCC4、ABCC5、ABCC6、ABCD4和ABCG2八个在耐药细胞中表达上调2倍以上的ATP结合盒转运体基因,这些基因在CNE-1/Taxol的表达随半数抑制剂量的紫杉醇处理后均表现不同程度的下降。结论ATP结合盒转运体家族成员的上述8个基因可能与鼻咽癌细胞的紫杉醇耐药产生有关。

ATP结合盒转运体A1基因G596A变异对血脂的影响

目的探讨ATP结合盒转运体A1(ATP-bindingcassettetransporter1,ABCA1)基因G596A变异是否影响人群的血脂水平。方法对象选自中国西北地区汉族人267名,年龄(62±9)岁。以蛋白酶K消化、苯酚及氯仿抽提以及异丙醇沉淀的方法提取全基因组DNA。应用聚合酶链反应、限制性内切酶片段长度多态性结合测序的方法检测ABCA1基因单核苷酸多态性。结果该研究群体等位基因ABCA1-A和G的基因频率分别为51.6%和48.4%,符合Hardy-Weinberg平衡定律(χ2=0.66,P>0.50)。在ABCA1G596A的GG、GA和AA的3种基因型中,高密度脂蛋白水平依次呈上升趋势,GG型(1.15±0.38)mmol/L与AA型(1.28±0.48)mmol/L差异无统计学意义(P<0.05);甘油三酯水平依次呈下降趋势,GG型(2.0±1.1)mmol/L与AA型(1.7±1.1)mmol/L差异有统计学意义(P<0.05)。结论ABCA1G596A变异可影响西北地区人群的血脂水平,GG型携带者可产生有益的临床血脂谱。

ATP结合盒转运体A1介导细胞胆固醇流出及新生盘状高密度脂蛋白形成机制研究进展

ATP结合盒转运体A1介导细胞胆固醇流出,在新生高密度脂蛋白形成中起重要作用,具有抗动脉粥样硬化功能已被普遍接受,但其机制尚未很好阐明。近来研究显示ABCA1活性可使细胞表面产生两种高亲和力载脂蛋白AI结合部位:载脂蛋白AI/ABCA1直接相互作用的低容量结合部位和载脂蛋白AI/脂质相互作用的高容量结合部位。一个关于ABCA1介导细胞胆固醇流出到载脂蛋白AI及新生高密度脂蛋白形成机制的三步学说已提出。第一步:载脂蛋白AI与ABCA1结合引起细胞膜磷脂转位,导致膜磷脂不对称分布。第二步:膜磷脂不对称分布产生膜张力,导致突出膜外囊泡突起状载脂蛋白AI高容量结合部位形成。第三步:载脂蛋白AI与高容量结合部位脂质结合,导致高容量结合部位脂质自发溶解和载脂蛋白AI脂质化,形成新生高密度脂蛋白。此步反应是整个过程的限速步骤。细胞内也存在载脂蛋白AI脂质化部位,这一过程也是由ABCA1介导的。

miR-20a与ATP结合盒转运体A1的靶向结合作用

目的探讨miR-20a是否可与ATP结合盒转运体A1（ABCAl）靶向结合。方法利用生物信息学预测网站TargetScan、miRan—da、PieTar、RNAhybrid和miRNAviewerTargetScan进行靶基因预测和保守性及自由能分析；利用荧光素酶报告基因实验分析miR-20a是否对ABCAl3’UTR中靶点有直接靶向抑制作用。

ATP结合盒转运体A1基因变异与冠心病的研究进展

脂质代谢异常是冠心病的发病机制之一,ATP结合盒转运子A1(ABCA1)在胆固醇的逆向转运及高密度脂蛋白生成中起重要作用。ABCA1基因变异可引起脂质代谢紊乱,促进动脉粥样硬化及冠心病的发生发展。本文就近年来对ABCA1基因变异与冠心病关联性及其参与冠心病发病机制方面的研究做一综述。

小檗碱调节肝X受体α去乙酰化促进THP-1巨噬细胞ATP结合盒转运体A1表达及其胆固醇流出

目的观察小檗碱对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ATP结合盒转运体A1(ABCA1)表达及其细胞内胆固醇流出的影响,并探讨肝X受体α(LXR-α)去乙酰化在此过程中的作用。方法用不同浓度的小檗碱(0、5、10、20μmol/L)处理THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞24 h,或以20μmol/L小檗碱处理THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞不同的时间(0、6、12、24 h)。采用Western Blot检测ABCA1、LXR-α和乙酰化LXR-α的蛋白表达,液体闪烁计数法观察细胞内胆固醇的流出,高效液相色谱法测定细胞内胆固醇浓度。结果与对照组比较,小檗碱呈浓度(0～20μmol/L)和时间依赖性(0～24 h)上调巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1的表达和下调乙酰化LXR-α的表达,增加THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇的流出,减少细胞内胆固醇的含量。上述效应在20μmol/L小檗碱处理THP-1巨噬细胞24 h后达到最大值。结论小檗碱能上调THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1的表达,并促进细胞内胆固醇流出,这种效应与调节LXR-α乙酰化有关。

抑制ATP结合盒转运体亚家族C成员8表达促进大鼠脊髓损伤后神经组织修复和神经功能恢复

目的探究大鼠脊髓损伤发生后,损伤脊髓组织内ATP结合盒转运体亚家族C成员8（Abcc8）基因表达量变化及抑制Abcc8表达对脊髓损伤大鼠神经组织和神经功能恢复的影响。方法采用改良的Allen重物坠落打击法造成成年雌性Wistar大鼠（6月龄,200-220 g）中度脊髓损伤5 d后,通过苏木精-伊红（HE）染色检测脊髓损伤程度,通过免疫组织化学染色检测损伤脊髓组织内Abcc8基因表达产物磺脲受体1（SUR1）的表达量变化。大鼠脊髓损伤后立即通过经静脉给予反义核苷酸（ASO）抑制损伤脊髓内Abcc8基因表达,大鼠脊髓损伤28 d后通过Basso Beattie Bresnahan（BBB）评分评价大鼠运动功能,通过HE染色检测脊髓组织损伤区域面积。结果大鼠脊髓损伤5 d后,HE染色显示,损伤脊髓组织出现明显空洞和组织缺损,伴有多量炎细胞浸润和残存组织变形移位。免疫组织化学染色（荧光法）显示,大鼠脊髓损伤中心区域邻近坏死组织的半暗区内SUR1抗原荧光强度显著增加。大鼠脊髓损伤28 d后的HE染色-损伤区域面积测定显示,脊髓损伤后立即接受Abcc8-ASO治疗的大鼠脊髓损伤节段病灶面积明显减少。BBB运动功能评分显示,脊髓损伤发生后即进行Abcc8-ASO静脉注射治疗的大鼠的后肢运动功能恢复显著增强。结论大鼠脊髓损伤后,损伤脊髓组织内Abcc8基因表达量上升,抑制Abcc8表达对脊髓损伤大鼠神经组织和神经功能的恢复具有显著促进作用。

ATP结合盒转运体在肝癌多药耐药中的研究进展

肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一,手术切除率低,术后复发率高,故对于进展期肝癌患者来说,化疗显得迫切需要。然而,多药耐药性(MDR)是化疗的最大障碍。ATP结合盒转运体介导的多药耐药是肝癌化疗失败的主要原因,因此针对ATP结合盒转运体(ABC)的肿瘤MDR逆转策略,对于提高肝癌化疗效果具有十分重要的意义。该文针对ABC介导的耐药机制及目前克服MDR的一些新策略予以综述。

ATP结合盒转运体G1与动脉粥样硬化的关系

ATP结合盒转运体G1(ATP binding cassette transporter G1,ABCG1)是ABC转运蛋白超家族的成员,主要负责促进胆固醇流出到成熟的高密度脂蛋白,对于防止胆固醇在巨噬细胞中的积聚起着至关重要的作用。ABCG1缺乏可导致泡沫细胞形成、内皮细胞功能紊乱和炎症反应等,进而影响动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的形成与发展。本文主要对ABCG1参与AS发生发展的相关机制进行综述,以期为AS治疗提供新的理论依据和药物靶点。

ATP结合盒转运体A1基因多态性与2型糖尿病及肥胖的相关性

目的研究上海地区汉族人群中,ATP结合盒转运体A1(ABCA1)基因位点rs2020927的单核苷酸多态性与2型糖尿病(T2DM)及肥胖发病的相关性。方法选取上海地区无亲缘关系的T2DM患者440例,根据体质量指数(BM I)分为肥胖组(n=252,BM I>25 kg/m2)和正常体质量组(n=188,BM I<25 kg/m2);另选取正常对照者315例。采用等位基因特异的实时PCR,对ABCA1基因位点rs2020927进行基因分型,并通过相关和Logistic回归分析,研究该位点与T2DM及肥胖的相关性。结果ABCA1基因rs2020927位点基因型频率在不同组间有显著性差异(P=0.001),其中AA、AG、GG基因型频率在对照组人群中分别为43.8%、35.9%和20.3%;在正常体质量的T2DM组中分别为33%、53.2%和13.8%;在肥胖的T2DM组中分别为40.9%、47.2%和11.9%。基因型GG在T2DM肥胖组和对照组中有显著性差异(P=0.009),而T2DM正常体质量组和对照组之间无显著性差异(P>0.05)。结论中国上海汉族人群中,ABCA1基因多态性位点rs2020927可能与T2DM及肥胖的发病相关。

树鼠句膜转运蛋白ATP结合盒转运体A1cDNA和蛋白质结构分析及其组织表达

目的获得不易感动脉粥样硬化动物树鼠句的膜转运蛋白ATP结合盒转运体A1的cDNA和蛋白质序列,鉴定其组织分布,探讨其是否参与树鼠句独特的高密度脂蛋白代谢。方法以树鼠句肝脏mRNA反转录获得的cDNA一链为模板,应用SMART-RACE技术,获得树鼠句ATP结合盒转运体A1 cDNA序列并推导出其氨基酸序列,应用实时聚合酶链反应技术分析树鼠句ATP结合盒转运体A1 mRNA在各组织中的分布情况。结果获得的树鼠句ATP结合盒转运体A1 cDNA序列全长为7 762 bp,其中开放阅读框架6 786 bp,编码2 261个氨基酸的蛋白。该蛋白与人ATP结合盒转运体A1的长度相同,二者在氨基酸水平上高度同源(95%)。多组织表达谱显示树鼠句ATP结合盒转运体A1在多种组织中广泛表达,其中表达量最高的依次为肺脏、肝脏、肾脏和脾脏,这与人和小鼠ATP结合盒转运体A1在肝中高表达而在肺和脾中低表达的分布有很大差异。结论树鼠句ATP结合盒转运体A1组织表达谱的特点有可能增加其在体内的浓度和数量,从而可能间接增加高密度脂蛋白的合成。

三磷酸腺苷结合盒转运体A7的结构、功能和调控的研究进展

三磷酸腺苷结合盒转运体A7是三磷酸腺苷结合盒转运体家族中新发现的一个和三磷酸腺苷结合盒转运体A1最高同源性的蛋白,体内生理作用尚不清楚。许多研究表明,同三磷酸腺苷结合盒转运体A1对载脂蛋白介导生成高密度脂蛋白作用相似,三磷酸腺苷结合盒转运体A7主要通过影响磷脂或胆固醇的流出参与胆固醇的逆转运过程。但在组织分布和调控等方面又异于三磷酸腺苷结合盒转运体A1,可能具有其他特殊作用。深入研究三磷酸腺苷结合盒转运体A7的功能及其表达的调控机制,对于脂代谢、动脉粥样硬化、冠心病的治疗具有十分重要的意义。

内脂素对THP-1源性巨噬细胞ATP结合盒转运蛋白A1表达的影响

目的:观察内脂素(visfatin)对人单核细胞株THP-1源性巨噬细胞ATP结合盒转运蛋白A1(AB-CA1)表达的影响,探讨visfatin诱导THP-1源性泡沫细胞形成的机制。方法:THP-1单核细胞诱导分化为巨噬细胞,予不同浓度和时间的visfatin进行干预,分别运用油红O染色观察细胞浆脂滴变化,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和蛋白免疫印迹(Western blotting)法检测各组细胞ABCA1 mRNA和蛋白表达,酶荧光学法检测细胞内总胆固醇(TC)和游离胆固醇(FC)含量,TC与FC之差为胆固醇酯(CE)含量。结果:与对照组比较,visfatin干预组细胞浆脂滴明显增多,细胞内FC和CE含量增加(均P<0.05)。Visfatin呈浓度和时间依赖性地下调ABCA1mRNA和蛋白表达(P<0.05)。结论:Visfatin下调THP-1源性巨噬细胞ABCA1的表达,使细胞内FC流出减少,CE合成增加,从而诱导泡沫细胞的形成。