甘蔗ATP结合蛋白基因克隆及其干旱胁迫下的表达特性分析

【目的】克隆甘蔗ATP结合蛋白基因,分析其基本生物学信息及在干旱胁迫下的表达特性,为ATP结合蛋白的功能研究提供理论依据。【方法】从乙烯诱导甘蔗差异表达转录组和水分胁迫下甘蔗cDNA文库中获取ATP结合蛋白基因序列,设计其引物进行RT-PCR扩增,利用生物信息学软件进行序列分析及其蛋白结构和功能预测,并采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测干旱胁迫处理下的甘蔗ATP结合蛋白基因的表达情况。【结果】克隆获得的甘蔗ATP结合蛋白基因全长2145 bp,编码714个氨基酸,其蛋白分子质量为79.430 kD,理论等电点(pI)为9.33,不稳定系数为44.38;甘蔗ATP结合蛋白与玉米ATP结合蛋白的核苷酸序列及其推导氨基酸系列同源性最高,均达93%。甘蔗ATP结合蛋白主要由无规则卷曲(42.02%)、α螺旋(25.63%)和延伸链(22.27%)结构组成,具有蛋白激酶催化结构域、ATP结合位点、核苷酸结合位点(NBS)、糖基化位点、激酶磷酸化结合位点及核定位信号等;甘蔗ATP结合蛋白可能主要定位在细胞核、叶绿体、线粒体和过氧化物酶体中,起中间代谢调控作用,或参与转录调控、免疫应答、胁迫应答及信号转导等生物反应。qPCR检测结果显示,在干旱胁迫7 d后,甘蔗ATP结合蛋白基因的表达量明显下调,约为对照的30%,恢复正常供水(复水)后,表达量回升。【结论】甘蔗ATP结合蛋白基因表达受干旱胁迫诱导,可能参与甘蔗对干旱逆境胁迫响应的代谢调控。

猪多杀性巴氏杆菌重组抗菌肽ABC转运体ATP结合蛋白诱导的免疫保护研究

为研究猪多杀性巴氏杆菌(Pm)重组抗菌肽ABC转运体ATP结合蛋白的免疫保护性,本研究采用PCR方法扩增该蛋白基因,并将其克隆于pET-28a(+)中构建重组质粒pET-ABP,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白表达。分析表明,猪Pm抗菌肽ABC转运体ATP结合蛋白基因为696 bp,编码231 aa,不同血清型的该蛋白基因推导氨基酸序列同源性达99%以上。表达的蛋白分子量约为27 ku。动物实验表明,实验组小鼠三免后第14 d其血清IgG抗体水平显著升高,明显高于对照组。对照组攻毒后3 d存活率为20%,7 d全部死亡;免疫组小鼠攻毒后3 d存活率为80%,7 d存活率为40%。该研究为进一步研制Pm的混合疫苗奠定了基础。

ATP结合盒转运蛋白B1与羧酸酯酶1基因多态性对达比加群酯药物谷浓度的影响

目的探讨ATP结合盒转运蛋白B1(ABCB1)及羧酸酯酶1(CES1)基因多态性与服用达比加群酯的患者药物谷浓度的相关性。方法选取2018年3月-2021年11月在福州某医院诊断为非瓣膜性房颤的69例患者作为研究对象。检测患者ABCB1及CES1的单核苷酸多态性位点以及基因型,采用抗Ⅱa因子显色法测定患者服用达比加群酯后药物的谷浓度,分析ABCB1及CES1基因多态性与谷浓度的相关性,进一步研究相关位点对谷浓度达标的影响。结果本研究共发现11个单核苷酸多态性位点,且ABCB1 rs2235013与ABCB1 rs2235033处于连锁不平衡状态(D’=0.96,r2=0.82)。但ABCB1基因多态性对达比加群谷浓度无显著影响(P>0.05)。CES1 rs2302719突变型(TG,GG)患者的达比加群谷浓度高于野生型(TT)(51.98±8.06 vs 42.44±3.88,57.71±9.06 vs 42.44±3.88),并且CES1 rs2302719突变型(TG,GG)是患者谷浓度达标的保护因素,结果具有统计学意义(P<0.05)。结论ABCB1基因多态性对达比加群谷浓度的影响还需进一步探索。CES1 rs2302719次要等位基因(G)可增加达比加群谷浓度,并且不良反应的发生率可能更低。

泥蚶转录因子c-Myc与下游ATP结合盒转运蛋白基因ABCA3启动子的结合鉴定

为了确定泥蚶转录因子c-Myc(Tgc-Myc)与下游ATP结合盒转运蛋白ABCA3(TgABCA3)基因启动子的结合关系。利用在线生物信息学网站预测以及凝胶电泳迁移(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)和染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation assay,ChIP)技术,对Tgc-Myc与TgABCA3启动子的结合位点进行分析。结果显示,TgABCA3启动子上的E-box顺式作用元件位于-40~-35 bp,Tgc-Myc能够与该序列特异性结合。转录因子Tgc-Myc通过调控TgABCA3基因转录,从而参与泥蚶应对重金属Cd胁迫的响应机制。

ATP/GTP结合蛋白1基因在胃癌及食管癌组织中高表达

目的:应用荧光mRNA差异显示技术(DD-PCR),筛选胃癌及食管癌相关基因的异常表达。方法:收集临床胃癌组织样本,通过荧光差异显示技术(DD-PCR)获得胃癌样品中差异的片段,对这些片段进行克隆和测序。通过在GenBank中同源性检索,查找与差异片段相对应的同源基因。利用半定量PCR及定量PCR方法检验该基因在胃癌及食管癌组织中与其对应正常组织之间表达的差异。结果:通过DD-PCR获得的一个差异表达片段的序列对应于ATP/GTP结合蛋白1基因(A/GT-PBP1)。半定量PCR及荧光定量PCR技术检测结果表明,A/GTPBP1基因在胃癌及食管癌组织中的表达量高于其对应的正常组织(胃癌,P<0.01;食管癌,P<0.01)。该基因包含25个外显子,读码框长3561bp,编码1186个氨基酸,蛋白质相似性分析表明该蛋白为G蛋白家族成员。结论:A/GTPBP1在胃癌组织中异常表达,可能在胃癌发生过程中起调节作用。

内脂素通过过氧化物酶体增殖物激活受体γ信号转导通路下调ATP结合盒转运蛋白A1的表达

目的:观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)信号通路在内脂素(visfatin)调控人单核细胞株(THP-1)源性巨噬细胞ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)表达中的作用,探讨visfatin诱导泡沫细胞形成的机制和途径。方法:THP-1单核细胞诱导分化为巨噬细胞,随机分组,给予不同浓度的visfatin和PPARγ激动剂罗格列酮进行干预,分别运用油红O染色法观察细胞内脂滴形成情况,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和蛋白免疫印迹(Western blot)法检测各组细胞ABCA1及PPARγmR-NA和蛋白表达,酶荧光学法检测细胞内总胆固醇(TC)和游离胆固醇(FC)含量,TC与FC之差为胆固醇酯(CE)含量。结果:与对照组比较,visfatin干预组油红O染色显示细胞内脂滴形成增加,PPARγ及ABCA1 mRNA和蛋白表达水平降低(均P<0.05),细胞内FC含量升高(P<0.05);相关分析显示,visfatin呈浓度依赖性下调PPARγ及ABCA1 mRNA和蛋白的表达。与visfatin干预组比较,罗格列酮组ABCA1 mRNA和蛋白表达水平升高(均P<0.05),细胞内FC含量降低(P<0.05);相关分析显示,罗格列酮呈浓度依赖性上调ABCA1 mRNA和蛋白的表达。结论:visfatin通过PPARγ信号转导通路下调ABCA1表达,减少细胞内FC流出,从而诱导泡沫细胞形成。这可能为visfatin致动脉粥样硬化发病机制的研究提供了一个新的理论依据。

ATP结合盒转运蛋白A1与动脉粥样硬化

对Tangier病病因的研究,发现ATP结合盒转运蛋白A1(ATP binding cassette transport protein A1,ABCA1)在胆固醇逆向转运(reverse cholesterol transport,RCT)中起重要作用。ABCA1主要通过核受体PPARs途径发挥作用。ABCA1基因变异影响其功能。

肿瘤坏死因子-α对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ATP结合盒转运蛋白A1表达的影响

目的:观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)表达的影响,同时探讨核因子-κB(NF-κB)在TNF-α调控ABC A1表达中的作用。方法:THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞随机分为4组:对照组、TNF-α组、甲苯磺酰苯丙氨酰氯甲酮(TPCK,NF-κB的抑制剂)组、TPCK+TNF-α组。运用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和W estern b lot检测各组不同的时间点(0、6、12、24和48 h)ABCA1 mRNA和ABCA1蛋白的表达。结果:对照组和TPCK组ABCA1mRNA和蛋白表达均无明显变化;TNF-α组ABCA1mRNA和蛋白表达呈时间依赖性降低(P<0.05);TPCK+TNF-α组ABCA1mRNA和蛋白表达也呈时间依赖性降低,但同TNF-α组比较,其下降程度有明显减轻(P<0.05)。结论:TNF-α可以通过活化NF-κB抑制THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1的表达。

日本血吸虫ATP合酶脂结合蛋白样蛋白基因结构与功能分析

目的 利用生物信息学技术对已登录的日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,Sj)中国大陆株 (chinesestrain)新基因 -ATP合酶脂结合蛋白样蛋白 (ATPsynthaselipid -bindingprotein -likeprotein)基因结构和功能进行分析。 方法 使用NCBI ,SAPS ,TMHMM 2 .0 ,PsortII ,Protscale和Scanprosite等软件对新基因的结构和功能进行分析。 结果 通过Internet在线分析和生物信息学软件分析 ,对新基因的结构和功能有了进一步的认识 ,日本血吸虫ATP合酶脂结合蛋白样蛋白基因编码 12 2个氨基酸 ,分子量为 12 .7kDa ,等电点为 9.41,为一跨膜蛋白 ,含有磷酸化位点和烷基化位点。 结论 生物信息学技术有利于日本血吸虫新基因的结构和功能研究。

胃癌中高表达ATP/GTP结合蛋白1基因的筛选及验证

目的:探讨胃癌中差异表达的基因在胃癌发生和发展的分子机制中的作用.方法:提取胃癌组织样本的总RNA,通过荧光差异显示技术(DD-PCR)获得胃癌样品中差异的片段,对这些片段进行克隆和测序.通过在GenBank中同源性检索,查找与差异片段相对应的同源基因.利用半定量PCR及定量PCR方法验证该基因表达的差异性.结果:通过DD-PCR得到差异片段中的一个片段对应与人ATP/GTP结合蛋白1基因(A/GTPBP1).半定量PCR及荧光定量PCR技术检测结果表明,A/GTPBP1基因在胃癌组织中的表达量高于其对应的癌旁组织.该基因的读码框长3561bp,编码1186个氨基酸,分子质量为84.4kDa,蛋白质相似性分析表明该蛋白为G蛋白家族成员.结论:A/GTPBP1在胃癌组织中异常高表达,可能在胃癌发生过程中起调节作用。

退行性主动脉瓣ATP结合盒转运蛋白A1表达的特点

目的探讨ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)在退行性主动脉瓣组织中表达的特点。方法收集因退行性主动脉瓣病变行手术切除的主动脉瓣标本30例及因夹层动脉瘤行Bentall手术切除的正常主动脉瓣标本7例。经HE和免疫组化染色,观察退行性主动脉瓣的病理组织学改变,通过其病理特征的改变了解退行性主动脉瓣ABCA1表达的特点。结果退行性主动脉瓣瓣膜增厚,钙化灶形成;钙化灶周围有炎细胞浸润、新生血管、泡沫细胞以及脂肪细胞生成,ABCA1在正常主动脉瓣膜几乎阴性表达,而在病变瓣膜中则显示强阳性表达。结论与正常主动脉瓣相比,在退行性主动脉瓣出现炎症细胞浸润、泡沫细胞和脂肪细胞生成、新生血管和钙化形成,ABCA1表达明显上调。

日本血吸虫ATP合酶脂结合蛋白样基因DNA疫苗的构建及其在真核细胞中的表达

[目的]构建日本血吸虫ATP合酶脂结合蛋白样基因(ATP synthase lipid-binding protein-like protein gene of Schistosoma japonicum,SjAslp)核酸疫苗,并观察其在真核细胞中的表达情况。[方法]根据GenBank中SjAslp cDNA全长设计特异性引物,从实验室已构建好的重组质粒pBCSK+/SjAslp中扩增出SjAslp cDNA全长,将其克隆入pUCm-T.载体,再亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)构建成日本血吸虫组织蛋白酶B肽链内切酶全基因核酸疫苗(pcDNA3.1(+)/SjAslp);经PCR、酶切及测序鉴定后,利用电穿孔将其转染HeLa细胞。采用免疫细胞化学法检测SjAslp在HeLa细胞内的表达情况。[结果]成功构建SjAslp核酸疫苗,免疫细胞化学技术检测其能在HeLa细胞浆内表达。[结论]pcDNA3.1(+)/SjAslp核酸疫苗能在真核细胞内表达,为抗日本血吸虫核酸疫苗的研制打下了必要的基础。

染色质解旋酶/ATP酶的DNA结合蛋白1样基因致瘤机制研究进展

染色质解旋酶/ATP酶的DNA结合蛋白1样基因(CHD1L)是一种新近被证实与在许多实体瘤中表达增多的致癌基因,它定位于第1号染色体q21区。CHD1L在肝细胞癌和其他肿瘤中的功能性研究提示,该基因在肿瘤形成过程中可以引起细胞增殖、调节G1/S过渡期并且可以抑制细胞凋亡。CHD1L活化的潜在机制可能是通过结合凋亡蛋白Nur77,或通过上调CHD1L调控的靶基因(如ARHGEF9、SPOCK1或TCTP)受体以激活蛋白激酶B通路,从而干扰细胞死亡程序。CHD1L目前已经被认为是一种新的可独立评价一些实体性肿瘤进展、预后以及生存率的生物标志物。现有的对CHD1L的认识在将来也许可以激励大家进行对一些特定肿瘤的靶向治疗研究。

翼状胬肉组织中ATP结合盒转运蛋白B5的表达变化及意义

背景角膜缘干细胞（LSCs）缺乏可引起多种眼表疾病，如翼状胬肉等。ATP结合盒转运蛋白B5（ABCB5）是新发现的特异性LSCs标志物，研究ABCB5在翼状胬肉组织中的表达变化对于翼状胬肉的防治具有重要的临床意义。目的研究ABCB5在翼状胬肉组织中的表达变化，探讨其在翼状胬肉发生和发展中的作用。方法收集2015年1-11月在解放军474医院行原发性翼状胬肉切除术的手术标本37例，同期收集年龄匹配的行斜视矫正术和视网膜脱离复位术患者的正常结膜组织22例。采用免疫组织化学法检测ABCB5在翼状胬肉组织标本中的表达和定位，分别采用Westernblot和实时荧光定量PCR法检测翼状胬肉标本中ABCB5蛋白及其mRNA的相对表达量，并与正常结膜标本进行比较。结果ABCB5蛋白表达于所有22例正常结膜复层扁平细胞的细胞质和细胞核中，以基底层细胞中表达更为明显，呈现明显极性。在37例翼状胬肉标本中，可见ABCB5阳性表达者34例，占91．89％，ABCB5表达阴性者3例，占8．11％。正常结膜组和翼状胬肉组ABCB5蛋白相对表达量分别为0．90±0．31和0．59±0．41，ABCB5mRNA表达量分别为1．01±0．26和0．65±0．32，翼状胬肉组ABCB5蛋白和mRNA的相对表达量均明显低于正常结膜组，差异均有统计学意义（t=-0．266，P=0．011；t=-4．560，P=0．000）。结论LSCs标志物ABCB5的表达下调提示LSCs的减少和缺失与翼状胬肉的发生和发展有关，提示ABCB5检测可能作为翼状胬肉发生和发展、术后复发及疗效评估的观察指标之一，也可能成为翼状胬肉的治疗靶点。

ATP结合盒蛋白G超家族成员2在肺癌中的表达及意义

肺癌细胞的干性及耐药性是重要的恶性指标。ATP结合盒蛋白G超家族成员2(ATP-binding cassette superfamily G member 2,ABCG2)是细胞表面的ATP结合盒蛋白家族的成员之一,依赖ATP可将药物排到细胞外。ABCG2定位于人多种肿瘤细胞的膜上,它的表达与肿瘤化学治疗多药耐药性紧密相关,目前被认为是肺癌干细胞鉴定的辅助群体标志物。此外,ABCG2的一些单核苷酸多态性与肺癌多药耐药性存在显著相关性。该文就最新ABCG2相关研究进展进行总结和归纳,重点介绍ABCG2基因的表达调控、ABCG2与肺癌干性的关系以及ABCG2的单核苷酸多态性与肺癌耐药性的相关性研究,以期为肺癌患者的临床治疗提供新的策略。

ATP结合盒B亚家族1转运蛋白基因多态性与癫痫耐药相关性研究进展

ATP结合盒B亚家族1转运蛋白基因(ABCB1)编码产物是P-糖蛋白(P-gp)。目前的诸多研究表明ABCB1基因单核苷酸多态性(SNPs)及其表达产物P-gp与癫痫耐药有关。但也有研究认为,ABCB1_SNPs及P-gp与癫痫耐药之间没有关联。可能是由于ABCB1_SNPs的种族差异性,造成了各项研究结果不相一致。亦有研究认为ABCB1_3435C>T、1236C>T及2677G>T\A\A的多态性或许与癫痫耐药无关,但是其单体型与癫痫耐药有一定关联。因此,应在不同种族中进行ABCB1_SNPs及其单体型的进一步研究,将有助于发现真正的癫痫耐药机制。

ATP结合盒转运蛋白A1研究进展

动脉粥样硬化是心脑血管疾病的重要基础病理改变,而胆固醇在巨噬细胞内聚集和泡沫细胞形成是动脉粥样硬化的始动环节。ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)是一种重要的胆固醇流出调节蛋白,能介导细胞内胆固醇逆向转运到细胞外,使之与载脂蛋白A-Ⅰ结合并包装形成高密度脂蛋白(HDL)的膜转运蛋白。因此,ABCA1是调节血浆HDL及细胞内胆固醇水平的重要膜蛋白,ABCA1的表达水平与动脉粥样硬化的发生关系密切。同时,细胞内脂质、核受体PPAR、LXR、RXR和细胞因子等对ABCA1蛋白表达具有调控作用。本文将ABCA1研究进展作一综述。

同型半胱氨酸对人主动脉平滑肌细胞ATP结合盒转运蛋白A1启动子甲基化水平及表达的影响

目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)对人主动脉平滑肌细胞ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)启动子甲基化水平及表达的影响。方法培养人主动脉平滑肌细胞,将其分为两组:对照组和实验组。对照组不加Hcy,实验组加入不同浓度Hcy(50、100、200、500μmol/L)培养48 h。闪烁计数法检测胆固醇流出率;实时定量PCR检测ABCA1 mRNA表达水平;Western-blotting检测ABCA1蛋白质表达;巢式甲基化PCR检测ABCA1启动子甲基化水平。结果对照组各时间点胆固醇流出率比较差异无统计学意义(P>0.05);各Hcy浓度组不同时间比较显示,24、48 h胆固醇流出率均明显低于0、12 h,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,0、12 h各Hcy浓度组胆固醇流出率差异无统计学意义(P>0.05),24、48 h各Hcy浓度组胆固醇流出率显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,实验组ABCA1 mRNA相对表达水平下降(均P<0.05),ABCA1蛋白质相对表达水平下降(P<0.05),ABCA1启动子甲基化水平显著升高(P<0.05);不同Hcy浓度之间比较,ABCA1mRNA表达、ABCA1蛋白质表达和ABCA1启动子甲基化水平差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 Hcy使人主动脉平滑肌细胞ABCA1启动子甲基化水平升高及表达下降,引起胆固醇流出率降低,可能是其引起动脉粥样硬化的病理机制之一。

ATP结合盒式蛋白转运蛋白在结直肠腺癌中表达及其临床意义

目的探讨多药耐药基因(MDR)1、多药耐药相关蛋白(MRP)1及乳腺癌耐药蛋白(ABCG2)在结直肠腺癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法采用增强型二步法免疫组织化学方法检测MDR1、MRP1及ABCG2三个基因在116例结直肠腺癌组织中的表达,并分析其可能的临床预后价值。结果 MDR1、MRP1及ABCG2在结直肠腺癌的阳性表达率显著高于切端正常组织(P<0.05)。MDR1、MRP1及ABCG2的表达与病理学分级、淋巴结转移及Duke分期密切相关(P<0.05),而与年龄、性别及肿瘤发生部位无关(P>0.05)。在结直肠腺癌中MDR1、MRP1及ABCG2的表达呈显著正相关(P<0.05)。结论结直肠腺癌中存在原发性耐药现象,MDR1、MRP1及ABCG2可能在结直肠癌侵袭转移中存在协同作用。联合检测MDR1、MRP1及ABCG2在结直肠腺癌组织中的表达对化疗药物的选择、化疗方案优化及估计患者预后具有重要指导意义。