大鼠局灶性脑缺血再灌注后缺血核心区NCCa-ATP通道的表达变化

日的了解局灶性脑缺血再灌注后磺酰脲类受体1（SURl）调控的非选择性阳离子通道（nonselectivecationchannel，NCCa—ATP通道）表达的变化与脑缺血损伤的关系，探索脑缺血的治疗时间窗．方法以颈内动脉线栓法建立大鼠大脑左侧中动脉梗塞模型，缺血2h后恢复再灌注．取实验性脑缺血再灌注损伤后3h、6h、8h、12h、24h等不同时间缺血核心区的脑组织，采用RT—PCR及Western—blot技术，测定SURl的mRNA及蛋白表达水平．采用免疫荧光双标法技术，观察SURl在缺血后脑微血管内皮细胞的表达情况．结果缺血再灌注核心区组织在缺血再灌注后3h、6h、8h、12h及24h各时间点SURlmRNA和SURl蛋白的表达量均上调，再灌注后8h达高峰（P〈0．05），缺血再灌注后12h，SURl在脑微血管内皮细胞的表达非常明显．结论局灶性脑缺血再灌注过程中SURl调节的NCCa～ATP通道参与了脑缺血损伤，在脑缺血再灌注后其mRNA和蛋白的表达量均上调．推测应用SURl受体的特异性抑制剂最佳时机在缺血再灌注后8～12h．

激活星形胶质细胞KATP通道对抗MPP＋所致神经元的损伤作用

目的：研究星形胶质细胞上ATP敏感性钾通道（ATP—sensitive potassium channel，KATP）在神经损伤中的重要作用。方法：将源自Kir6．2基因敲除（Kir6．2-/-）小鼠和野生型（Kir6．2＋/＋）小鼠原代培养的中脑神经元和星形胶质细胞共培养，应用神经毒素MPP＋建立离体神经损伤模型，应用免疫荧光、免疫细胞化学和westernblot等方法研究共培养体系中，MPP-对星形胶质细胞通道亚基Kir6．1表达、星形胶质细胞活化、胶质递质D．serine及其合成酶丝氨酸消旋酶（serineracemase，SR）表达，以及神经元数目及形态的影响。

应用Kir6．2基因敲除鼠研究KATP通道与帕金森病的相关性

目的：阐明ATP敏感性钾通道（KATP）与帕金森病（PD）发生的相关性。方法：应用Kir6．2^-/-小鼠，建立MPTP单次毒性模型和慢性PD小鼠模型，并给予KATP开放剂埃塔卡林（IPT）、二氮嗪（Dia）和克罗卡林（Cro）观察其作用效果。通过对小鼠自主活动和爬竿行为的观察评价行为学改变，应用高效液相色谱法测定纹状体单胺类神经递质含量评价神经生化改变，应用免疫组织化学法观察TH阳性DA能神经元、

pHi对急性分离大鼠新皮层神经元KATP通道的影响

目的和方法 :采用膜片钳技术之膜内面向外记录方法 ,在急性分离大鼠皮层神经元上 ,研究胞内酸碱环境改变对神经元ATP敏感钾通道的影响。结果 :Vp =+6 0mV时 ,pH6 .0组开放概率 2 .2 0 %± 0 .5 7% (n =1 0 )较 pH7.3时的开放概率 8.41 %± 1 .2 0 % (n =1 6 )显著降低 (P <0 .0 1 ) ;pH 8.0组开放概率 1 8.2 9%± 4.0 5 % (n =8)较 pH7.3时明显增加 (P <0 .0 1 )。当浴液由 pH 7.3降为pH 6 .0时 ,有 40 %出现多级通道电流并可逆转。当浴液 pH6 .0及 pH 8.0时 ,ATP抑制通道开放概率的量效曲线 ,与pH 7.3时比较无明显改变 (P >0 .0 5 )。 结论 :脑细胞内氢离子可能参与KATP通道的调节 :胞内酸化环境可进一步激活KATP通道多级电流 ,保护脑缺血缺氧损伤 ;而KATP,通道开放 ,膜超极化到一定程度 ,胞内酸化环境又可抑制通道开放。

Bax参与KATP通道对神经元损伤的保护作用

目的探讨ATP敏感性钾通道(KATP)介导对缺氧海马神经元损伤保护作用的分子机制。方法原代培养7d后,对神经元进行缺氧(5%CO2和95%N2),同时分别给予神经元KATP通道的阻断剂甲糖宁(100μmol/L)和KATP通道的激动剂二氮嗪(100μmol/L),MTT法检测细胞活性,RT-PCR检测Bax的mRNA表达水平。结果单纯缺氧组,缺氧+二氮嗪组和缺氧+甲糖宁组的细胞存活率分别是(75.7±2.8)%(n=7)、(55.7±2.5)%(n=6)和(81.1±2.4)%(n=6),各加药组与单纯缺氧组比较有显著性差异(P<0.01)。缺氧+二氮嗪组中Bax的mRNA表达水平与单纯缺氧组相比明显下降(n=5)(P<0.01),在缺氧+甲糖宁组中Bax的mRNA表达水平相对于单纯缺氧组高表达(n=5)(P<0.05);而在常氧时各用药组中细胞存活率以及Bax的mRNA表达水平与对照组相比都均无显著性差异。结论Bax参与KATP通道对神经元损伤的保护作用。

埃他卡林对ET-1诱导的人肺动脉平滑肌细胞KATP通道蛋白表达的影响

目的:研究新型ATP敏感性钾通道(KATP)开放剂埃他卡林对内皮素-1(ET-1)诱导的人肺动脉平滑肌细胞(HPASMCs)上KATP蛋白表达的影响。方法:原代培养人肺动脉平滑肌细胞,随机分成对照组,ET-1组,ET-1+埃他卡林组,ET-1+吡那地尔组,ET-1+埃他卡林+格列本脲组,ET-1+吡那地尔+格列本脲组,用Western-blot方法分析各组KATP蛋白磺酰脲受体亚单位(SUR2B)和内向整流性孔区亚单位(Kir6.1)表达变化情况。结果:与ET-1的作用相反,埃他卡林能使ET-1诱导下的SUR2B亚基表达升高,特异性KATP阻断剂格列本脲可逆转埃他卡林引起的SUR2B亚基表达升高;但各组对Kir6.1亚基表达无明显影响。结论:埃他卡林通过上调KATP的SUR2B亚基表达而发挥其在治疗低氧性肺动脉高压(HPH)中的作用,可望成为治疗低氧性肺动脉高压的新药。

bcl-2在mitoKATP通道开放剂二氮嗪诱导的抗小鼠移植肝脏缺血再灌注损伤中的作用的研究

目的研究bcl-2在线粒体ATP敏感性钾通道(mitoKATP)开放剂二氮嗪(DZ)诱导的抗小鼠移植肝脏缺血再灌注损伤中的作用,探讨应用二氮嗪减轻移植肝缺血再灌注损伤的可行性。方法两袖套法建立小鼠同种异体原位肝移植模型,利用化学合成bcl-2基因的SiRNA,经门静脉高压注射转染供体肝脏。随机分为肝脏移植组、SiRNA-bcl-2转染移植组、DZ灌注移植组、DZ灌注+SiRNA-bcl-2转染移植组、阴性对照组。肝脏移植术后第3天用萤光定量PCR和Western-Blot观察各组肝组织的bcl-2 mRNA和蛋白表达变化;测定受体血清AST、ALT含量。TUN EL法检测肝细胞凋亡。结果二氮嗪灌注组bcl-2 mRNA和蛋白表达水平较肝移植组明显增高(P<0.01),bcl-2mRNA和蛋白表达分别增加(63.2±4.8)%和(83.5±6.4)%;bcl-2 SiRNA转染组bcl-2 mRNA和蛋白表达水平较肝移植组明显降低(P<0.01),bcl-2mRNA和蛋白表达抑制分别为(65.7±5.3)%和(83.4±6.3)%;DZ灌注+SiRNA转染移植组bcl-2mRNA和蛋白表达与肝移植组和阴性对照组比较无显著差异(P>0.05);二氮嗪(DZ)灌注组中肝细胞凋亡指数、血清AST、ALT含量明显低于各组。bcl-2 SiRNA转染移植组中肝细胞凋亡指数、血清AST、ALT含量明显高于各组。结论bcl-2基因表达上调在线粒体ATP敏感性钾通道开放剂二氮嗪诱导的抗小鼠移植肝脏缺血再灌注损伤中起重要作用,二氮嗪能通过诱导bcl-2基因表达减轻移植肝缺血再灌注损伤。

深部电刺激诱导6-OHDA损伤鼠纹状体神经介质和KATP通道亚单位mRNA的改变

目的探索深部电刺激(deep brain stimulation,DBS)对6-OHDA损伤鼠纹状体神经介质的影响及其对纹状体KATP通道亚单位mRNA的改变。方法采用立体定向的方法将电极置于6-OHDA损伤鼠右侧脑丘脑底核(subthalamic nucleus,STN)进行深部电刺激,分离出大鼠脑纹状体后用高效液相法测定DA、Glu、GABA的浓度,并用RT-PCR检测KATP通道亚单位mRNA的改变。结果DBS显著增加6-OHDA损伤鼠纹状体中DA、Glu、GABA的浓度,同时RT-PCR检测也发现,DBS增强Kir6.1,Kir6.2mRNA的表达。结论DBS可能通过增强Kir6.1,Kir6.2 mRNA的表达而影响大鼠脑纹状体中DA、Glu、GABA的浓度。

氯苄基四氢小檗碱对大鼠肥厚心肌中KATP通道表达的影响

观察心梗诱导的大鼠肥厚心肌中三磷酸腺苷(ATP)敏感性钾离子通道(KATP)的表达,并探讨其影响因素.将雄性大鼠随机分为5组,分别是假手术组,手术组,普萘洛尔组,氯苄基四氢小檗碱组及内皮素受体拮抗剂组.手术组及药物组的大鼠结扎冠脉左前降支,术后饲养10 d,药物组于术后第6天开始给药,共给药5d,由反转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)方法确定KATP通道的mRNA表达.实验结果表明,心梗诱导的大鼠肥大心肌中的KATP通道的mRNA表达明显上调,经药物干预后有不同程度的降低.心梗诱导的大鼠肥厚心肌中的KATP通道的mRNA的表达上调,其表达上调除与β受体有关外,Ca2+离子可能参与对KATP通道表达的影响.

线粒体KATP通道介导七氟醚预处理对大鼠的脑保护作用

目的探讨七氟醚预处理对大鼠局灶性脑缺血-再灌注(IR)损伤的保护作用。方法雄性SD大鼠60只随机均分为七氟醚预处理组(S组)、5-HD+七氟醚预处理组(HS组)、5-羟葵酸(5-HD)组(H组)、IR组和假手术组(C组)。采用大脑中动脉线栓法缺血2 h、再灌注24 h制备大鼠局灶性脑IR模型(MCAO)。S组于缺血前1 h经半密闭的吸入箱吸入七氟醚(呼气末浓度维持2.4%,持续30 min)。HS、H组缺血前或七氟醚预处理前经尾静脉注射5-HD(10 mg/kg)。再灌注24 h后用ZeaLonga评分法进行神经功能缺陷评分,TTC染色法测大鼠脑梗死容积,免疫组化法测定大脑皮质Bcl-2和Bax蛋白表达。结果与IR组比较,S组神经功能缺陷评分明显降低,脑梗死容积显著减少(P<0.05);但HS、H、IR组神经功能缺陷评分和脑梗死容积差异无统计学意义。S组Bcl-2、Bax表达明显高于HS、H、IR组。结论七氟醚预处理对局灶性脑IR损伤有一定程度的保护作用。其保护作用与mitoKATP通道的激活有关,并可能是通过调控凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达来实现。

线粒体膜Kir6.1/K-ATP通道对脑缺血预处理大鼠神经功能的修复作用及机制

目的探讨线粒体膜Kir6.1/K-ATP通道对脑缺血预处理大鼠神经功能的修复作用及作用机制。方法将72只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和缺血预处理组,每组各24只。采用Zea Longa线栓法建立大鼠脑缺血预处理模型。于造模后12、24、36和48 h时采用Zea Longa评分评价大鼠神经功能,采用MTT法检测脑梗死体积,采用Western blot法检测大鼠脑组织凋亡蛋白(包括Bax、Caspase-3、Cyt-c、Bcl-2)和Kir6.1蛋白表达,分别采用线粒体通透性转化孔检测试剂盒和线粒体膜电位试剂盒检测大鼠脑组织线粒体膜电势及线粒体膜通透性,采用荧光定量PCR测定脑组织miR-7表达水平。结果假手术组大鼠无神经功能缺损症状,造模24、36、48 h时模型组Zea Longa评分和脑梗死体积均高于缺血预处理组(P<0.05)。造模24、36和48 h时,模型组Bax、Caspase-3及Cyt-c蛋白表达水平均高于假手术组(均P<0.05),而缺血预处理组较模型组低(均P<0.05)。三组不同时间点Bcl-2蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。造模24、36和48 h时,模型组Kir6.1蛋白水平、线粒体膜电位光密度及膜通透性转换孔平均光密度均低于假手术组(均P<0.05),而缺血预处理组其水平均高于模型组(均P<0.05)。造模12、24、36和48h时,模型组miR-7表达水平均低于假手术组(均P<0.05),造模48 h时,缺血预处理组miR-7表达量高于模型组(P<0.05)。结论脑缺血预处理可能通过抑制Kir6.1蛋白和miR-7过表达改善脑缺血所导致的神经功能损伤和神经元凋亡。

KATP通道开放剂对缺血缺氧PC12细胞凋亡及PI3K/AKt/CREB信号通路影响

目的观察KATP通道开放剂对缺血缺氧PC12细胞凋亡影响并探讨其信号转导机制。方法取传代后3d的PC12细胞,分为正常对照组(NC组)、缺血缺氧组,后者根据药物处理方式分为缺血缺氧对照(I/C组)、吡那地尔组(I/P组)、吡那地尔+格列吡嗪共处理组(I/P+G组)。结果各缺血缺氧组细胞凋亡率随时间点增加而增加,24小时达高峰,以后随时间延长,逐渐降低。结论 KATP通道开放剂吡那地尔能明显降低缺血缺氧后PC12细胞凋亡,增加P-akt,p-CREB蛋白及mRNA表达,提示KATP通道开放剂可能通过激活PI3K/Akt/CREB途径来减少缺血缺氧后PC12细胞凋亡。

Syn-1A在抑制弱酸性pH诱导的KATP通道活化过程中的作用

目的:观察Syn-1A在抑制弱酸性pH诱导的KATP通道活化过程中的作用及机制。方法:用稳定表达Kir6.2/SUR2A KATP通道的HEK-293细胞构建细胞膜内面向外的记录方式,并给细胞膜片连续灌流含或不含Syn-1A的pH7.4,7.0,6.8,6.5和6.0的溶液,观察弱酸性pH对通道的活化作用及Syn-1A对上述作用的抑制,并采用体外结合实验分析不同pH对Syn-1A与SUR2A亚单位结合的影响。结果:Syn-1A可抑制pH 6.5,6.8和7.0时诱发的通道活化作用,Syn-1A与SUR2A的结合在pH7.4至6.0范围内,随pH下降逐渐增加。结论:Syn-1A对KATP通道的抑制作用可缓冲pH波动引起的KATP通道开放,从而抑制折返性心律失常的发生。

3例K_(ATP)通道基因突变致新生儿糖尿病的基因及治疗分析

目的提高临床医生对新生儿糖尿病(neonatal diabetes mellitus,NDM)的认识和诊治能力。方法分析3例NDM患儿,对其临床特点、基因及治疗结果进行分析总结并随访预后。结果3例患儿均考虑K_(ATP)通道基因突变,从胰岛素治疗成功过渡到格列本脲口服治疗。2例患儿目前仍在口服格列本脲,考虑为永久性新生儿糖尿病(PNDM),1例患儿治疗半年后停药,考虑为暂时性新生儿糖尿病(TNDM)。3例患儿现均无明显不良反应。结论K_(ATP)通道突变NDM患儿可从胰岛素过渡到格列本脲治疗,尽早完善基因检测,予磺脲类药物治疗可降低治疗成本,增加依从性,改善神经系统预后。

铁死亡介导K_(ATP)通道功能受损致心力衰竭机制的研究进展

心力衰竭是一种以临床预后差、死亡率高为主要特点的心血管疾病。K_(ATP)通道偶联能量代谢与细胞膜兴奋性,在可兴奋细胞中起着关键调控作用。K_(ATP)通道激活使膜电位超极化,减少早期后除极介导心律失常的发生。心肌细胞K_(ATP)通道在生理条件下活性较低,而在严重缺血和长时间缺氧导致腺苷三磷酸/腺苷二磷酸比值降低时激活,降低细胞兴奋性,从而阻止动作电位的产生和细胞收缩。铁死亡是一种新型细胞程序性死亡方式,其特征在于Fe^(2+)和脂质过氧化物代谢异常导致的膜系统中脂质过氧化物的致死性积累,研究发现铁死亡可能对K_(ATP)通道的功能造成损伤,恶化心脏功能。因此,现就铁死亡介导K_(ATP)通道功能受损在心力衰竭中调控机制进行综述。

冠心康对大鼠缺血心肌细胞ATP敏感钾通道的影响

目的观察中药复方冠心康对大鼠缺血心肌细胞ATP敏感钾(ATP-sensitive potassium channel,KATP)通道的影响,进一步探讨冠心康保护心血管、抗心肌缺血可能的作用机制。方法随机选取Wistar大鼠分为正常组、模拟缺血再灌注损伤模型组、模型加格列苯脲组、模型加吡那地尔组、模型加冠心康组、模型加冠心康加格列苯脲组,每组8只。用无钙台式液灌流10 min,停灌30 min再灌注45 min模拟心肌缺血再灌注损伤模型。检测各组心肌细胞钙-镁-ATP(Ca2+-Mg2+-ATP)酶、钠-钾-ATP(Na+-K+-ATP)酶活性及全细胞膜片钳技术的电流电压钳模式记录各组心室肌细胞的ATP敏感钾通道(KATP通道)电流变化。结果在缺血的基础上,中药复方冠心康可使KATP通道进一步开放,通道电流明显增大,与KATP通道开放剂吡那地尔具有同等开放效应(P>0.05)。与模型组比较,冠心康组Ca2+-Mg2+-ATP酶、Na+-K+-ATP酶含量明显增高(P<0.05)。结论中药复方冠心康对于心肌缺血再灌注损伤具有一定的干预作用,促进KATP通道开放,减轻Ca2+内流,抑制Ca2+超载可能是冠心康在心肌缺血过程中发挥干预作用的有效途径。

成年大鼠海马CA1区锥体细胞K_(ATP)通道的特性

为了解成年大鼠海马CA1区锥体细胞KATP 通道的特性 ,实验采用膜片钳技术的内面向外式记录法 ,在急性分离的CA1区锥体神经元上 ,研究了可被胞浆侧ATP所抑制的钾离子单通道的特性。当细胞膜内外两侧的K+浓度均为 14 0mmol/L时 ,通道的电导为 63pS ,翻转电位为 1 71mV ,通道呈弱内向整流性。在负钳制电位时 ,通道开放时常被短时程的关闭所打断 ,而在正钳制电位时 ,这种短时程的关闭状态明显少于负钳制电位时。但通道开放概率未见明显的电压依赖性。ATP对通道活动的抑制作用呈浓度依赖性 ,抑制通道活动 5 0 %的ATP浓度为 0 1mmol/L。KATP 通道的特异性阻断剂tolbutamide (甲糖宁 ,1mmol/L)可完全阻断通道的活动 ,而KATP 通道开放剂diazoxide (二氮嗪 ,1mmol/L)则不增强通道的活动。

豚鼠气道平滑肌ATP敏感钾通道电流的动力学特性

气道平滑肌的主要作用是调节气道的紧张度和口径,而钾通道开放剂可经ATP敏感钾通道（ATP-sensitive potassiumchannel,KATP通道）使气道平滑肌松弛,此作用能被KATP通道特异性阻断剂优降糖阻断[1]。

ATP敏感性钾通道与脑保护研究

ATP敏感性钾通道在脑缺血再灌注损伤的病理生理过程中具有重要作用 ,通过对该通道分子结构、在神经系统分布、以及对神经细胞保护作用和相关机制的研究有利于一些临床用药的重新评估和高选择性KATP 通道开放剂的开发。