红细胞内ATP释放的机制、效应及其与疾病关系的研究进展

成熟红细胞(erythrocyte)由于无细胞核及含膜细胞器,主要通过糖酵解和磷酸戊糖途径进行能量代谢。糖酵解产生的三磷酸腺苷(adenosine triphos-phate,ATP)作为红细胞内主要能源物质,以往认为主要用于维持红细胞正常功能。早在1997年Mc-Cullough等就观察到缺氧或红细胞变形时,ATP可以被红细胞释放到细胞外。

微生物细胞ATP释放条件研究

在ATP生物发光法微生物细胞ATP释放剂的筛选研究中，发现采用环糊精等环状化合物可以解除表面活性剂类细胞ATP释放剂对发光反应系统的抑制作用，其中，7．5g／L环糊精CD（a）能中和1．5g／L的表面活性剂Ec和Es、Et，可以完全排除Ec、Es、Et对发光反应的抑制作用。通过比较各种细胞ATP释放剂释放ATP效果，筛选、组合出以表面活性剂Ec为代表的微生物细胞ATP释放剂；通过优化实验，发现用0．25～0．50g／L的Ec处理菌液1～2min时，细胞ATP的释放效果最好，从而建立了室温条件下简便、快速的微生物细胞ATP释放方法和ATP释放剂对发光反应系统抑制的消除方法。

2型糖尿病患者血小板聚集、粘附、ATP释放及血小板平均体积变化的研究

目的 评价 2型糖尿病患者血小板功能变化。方法 用血小板功能分析仪测定血小板聚集、ATP释放 ,用胶原珠法测定血小板粘附。结果 糖尿病患者血小板聚集率、ATP释放均较健康人增高 (P<0 .0 5) ;糖尿病患者血小板体积明显增大 ,与健康人比较有明显差异 (P<0 .0 0 5) ;血小板粘附率两者之间无明显差异。结论 糖尿病患者血小板功能亢进表现为血小板聚集、ATP释放反应增强 ,平均体积变大 ,但没有见到血小板粘附功能的亢进。这些指标可作为糖尿病患者并发血栓性疾病的检测指标。

脾切除后血小板聚集及ATP释放增高机制的探讨

测定了32例脾切除患者血小板聚集(PAg),其中包括16例同步测定PAg及ATP释放(ATP-R)的结果。脾切除组由ADP、Coll及ADR所致5分钟内最大聚集率(M^1)及ATP-R的均值较脾切除前组及正常对照组均有一定程度升高,其中以肝硬化代偿期脾切除组升高最明显(P<0.05～0.001)。其发生机制与血小板数增多、凝血因子增加、抗凝活性减低、继发性纤溶活性增加及血小板代谢活性指标TXB_2增高等因素有关,提示脾切除患者PAg及ATP-R升高与临床存在的高凝状态有关。

糖尿病患者血小板聚集、释放试验及血小板活化分子标志物测定的临床意义

目的探讨糖尿病患者血小板聚集、释放试验及血小板α-颗粒膜蛋白(GMP-140)的测定及临床意义。方法应用阻抗法与荧光法同步测定血小板聚集及ATP释放反应;应用ELISA法测定血浆中血小板α-颗粒膜蛋白(GMP-140)。结果糖尿病患者血小板聚集功能、ATP释放量及血浆GMP-140含量较正常对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);糖尿病有并发症组与无并发症组比较,血小板聚集功能、血浆GMP-140含量差异亦有统计学意义(P<0.05或P<0.01),且病情越重增高越明显;而ATP释放量则无明显差异。糖尿病有并发症组与无并发症组血小板聚集功能及血浆GMP-140含量水平呈直线正相关关系(r2=0.653,P<0.05;r2=0.471,P<0.05)。结论糖尿病患者血小板处于过度活化状态,引起凝血功能亢进,可能是导致糖尿病发病和引起并发症的原因之一。测定血小板聚集试验和血浆中GMP-140含量的水平,及时发现血小板功能状态的改变,对于指导糖尿病的临床诊断及治疗具有重要意义。

妊娠高血压综合征患者血小板功能的研究

目的探讨妊娠高血压综合征(妊高征)患者血小板聚集(PAgT)、释放试验及血小板α-颗粒膜蛋白(GMP- 140)的测定及其临床意义。方法应用阻抗法与荧光法同步测定 PAgT 及 ATP 释放反应；应用 ELISA 法测定血浆中血小板 GMP-140。结果妊高征患者 PAgT、ATP 释放量及血浆 GMP-140含量较正常非孕组明显升高,差异有统计学意义(P＜ 0.05或 P＜0.01)；与正常晚孕组比较,妊高征各组患者 PAgT、血浆 GMP-140含量活性显著增高(P＜0.05或 P＜0.01),且病情越重增高越明显；而 ATP 释放量在晚孕组及妊高征各组则无明显差异。轻、中、重度妊高征 PAgT 与血浆 GMP-140含量水平呈直线正相关关系(r=0.653,P＜0.05；r=0.737,P＜0.05；r=0.778,P＜0.01)。结论妊高征患者由于血小板处于过度活化状态,引起凝血功能亢进,可能是导致妊高征发病和引起临床症状的原因之一。

一种同时测量血小板聚集和分泌的新仪器

聚集和分泌（ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ）是血小板的二个最重要的功能。本文介绍能同时连续测量聚集和分泌的带单片微机的新仪器。分泌是用光电倍增管通过测量荧光－荧光素酶系统（ｆｉｒｅｆｌｙｌｕｃｉｆｅｒａｓｅｓｙｓｔｅｍ）的发光度实现的。测量聚集采用通常的比浊法。

MRP1与耐药性癫痫及耐药性癫痫的治疗研究进展

目前,癫痫仍以药物治疗为主。尽管不断有新型抗癫痫药物出现,但由于个体化差异及对药物敏感性不同,仍有约30%的患者会发展成为耐药性癫痫[1,2]。本文将从耐药性癫痫的概念及治疗、多药耐药基因1(multidrug resistance gene1,MDR1)表达等方面来阐述癫痫的耐药机制。1 耐药性癫痫的概念在合理应用几种抗癫痫药物之后,近一年内癫痫发作次数比之前减少<50%者可称之为耐药性癫痫。在颞叶内侧癫痫(MTLE)中约有80%发生耐药。目前关于耐药性癫痫的定义尚未得到统一。癫痫患者在使用足够疗程及剂量的抗癫痫药物(antiepileptic drugs,AEDs)后的一段时间内,症状如果没有得到很好的控制,国际抗癫痫联盟将这种癫痫称为耐药性癫痫[3]。2 耐药性癫痫的病因及与MRP1基因表达相关发病机制癫痫耐药的发生与遗传、环境及颅内结构异常等密切相关,其机制涉及多种学说,其中多药转药蛋白学说认为药物转运体的过多表达与癫痫的耐药机制密切相关。有研究表明,海马硬化相关的癫痫涉及多药耐药相关蛋白-1(MRP1)在海马几个区域的过度表达。ABC转运体即依赖于ATP来转运物质的一种介质,MRP1是其中的一种,它包括MSD1-MSD2-NBD1-MSD3-NBD2结构。3个跨膜区域MSD1-3由17个跨膜单环(TM)构成,NBD1-2中的每个核苷酸结合区域都包含3段保守序列,WalkerA、B、C,其中WalkerA、B与ATP结合并将其水解后,利用ATP释放的能量将底物转运至细胞内。

心脏直视手术后血小板的变化的初步观察

检测５２例体外循环心内直视手术病人，术前及术后第１、３、７、１０天，血小板的聚集、凝集，ＡＴＰ释放和计数。结果显示，术后第１、３天，血小板聚集，凝集功能显著下降，计数明显减少，术后第７、１０天血小板上述功能显著增强，计数明显增加，均有显著统计学差异。血小板ＡＴＰ释放，术后开始轻微增加，且逐渐增高，术后第１０天较术前增加４６％。提示心脏手术后７天血小板数量和功能不仅恢复且较术前有明显改善，有益于病人的康复。但瓣膜替换病人，虽然术后２４小时服用华法令，仍不能抑制血小板数量增加和功能的增强。为预防血栓栓塞，机械瓣替换的病人，最好加用血小板抑制剂。

钙稳态调节蛋白2 Q87A突变增加抑郁易感性

钙稳态调节蛋白2(calcium homeostasis modulator 2,Calhm2)参与钙离子活动和ATP释放的调控.本实验室的前期工作已经证实,Calhm2可以介导星形胶质细胞ATP的释放,在抑郁症的发生发展中起到重要作用.为了进一步探究Calhm2在抑郁症发生发展中的分子机制,本文首先预测了Calhm2的ATP结合位点,即位于第87位点的谷氨酰胺(Q87),并将其突变为丙氨酸(A),建立了一个携带calhm2突变(Q87A)的小鼠品系.随后,通过对原代星形胶质细胞的胞内和胞外ATP检测,发现Calhm2 Q87A突变导致星形胶质细胞ATP的释放下降;此外,通过对小鼠大脑海马切片的ATP检测,发现Calhm2 Q87A突变小鼠海马组织的ATP释放较正常小鼠下降;最后,通过给予慢性温和不可预知应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)来诱发小鼠抑郁样行为,发现Calhm2 Q87A突变小鼠抑郁样行为相对野生型小鼠表现得更为严重.综上所述,本文发现Q87位点对Calhm2介导的星形胶质细胞ATP释放发挥重要作用,该位点的突变增加了外界压力刺激诱导抑郁样行为的易感性,进一步明确了Calhm2蛋白在抑郁症发生发展中的分子机制,为抑郁症相关疾病的诊断和治疗提供了新的理论基础.

技术

中国揭示抑郁症发生新机制 目前，南方医科大学副校长高天明和朱心红教授领衔的团队采用基因敲除／转基因等技术手段，发现星形胶质细胞ATP释放减少可导致动物出现抑郁样行为，外源性给予ATP或内源性激活星形胶质细胞促进ATP释放，可在一周内快速逆转动物的抑郁样行为。

胸腺基质淋巴细胞生成素对血小板功能的影响

目的:观察胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)对血小板功能的影响。方法:采用血小板荧光-聚集分析仪检测TSLP刺激对血小板聚集功能及血小板ATP释放反应的影响;用流式细胞术(FCM)检测血小板表面TSLP受体(TSLPR)的表达,检测TSLP、胶原刺激和TSLP受体阻断下血小板膜蛋白的表达。结果:20位健康志愿者TSLPR-PE荧光标记阳性的血小板百分率为(7.30±3.58)%。TSLP刺激组血小板聚集及ATP释放分别为(0.6±0.8)%及(0.06±0.08)%;TSLP加胶原共刺激组血小板聚集及ATP释放明显高于胶原刺激组(P<0.01);TSLPR抗体组血小板聚集及ATP释放明显低于TSLP加胶原共刺激组(P<0.05)。TSLP刺激组及TSLP加胶原共刺激组血小板膜糖蛋白CD63、CD62p及PAC-1表达与对照组相比均增加(均P<0.05)。TSLP加胶原共刺激组与对照组相比CD42b表达明显下降(P<0.01);TSLP加胶原刺激组与胶原刺激组相比,CD62、CD63、PAC-1表达明显上升,CD42b的表达明显下降(均P<0.05);TSLPR抗体组与TSLP加胶原刺激组相比,CD62、CD63、PAC-1表达明显下降(均P<0.05),CD42b的表达变化不明显。结论:正常人血小板表面存在TSLPR。TSLP可增强胶原诱导血小板聚集及释放,并可通过TSLPR促进血小板活化。

问：蛋白质泛素化修饰及意义是什么？

答：蛋白质泛素化系统主要由3个组分构成，其中包括泛素活化酶E1、泛素结合酶E2和靶蛋白泛素连接酶E3。泛素化修饰主要包括以下三步反应：第一步，在ATP供能的情况下，E1激活泛素分子，利用水解ATP释放的能量以其胱氨酸残基（Cys）的巯基与泛素C端的甘氨酸残基（Gly）的羧基形成高能硫酯键；