白纹伊蚊唾液三磷酸腺苷二磷酸酶在毕赤酵母中的分泌表达

采用RT-PCR技术克隆编码白纹伊蚊(Aedes albopictus)唾液三磷酸腺苷二磷酸酶(apyrase)的成熟肽cDNA序列,并克隆至毕赤酵母(Pichia pastoris)组成型分泌表达载体pGAPZα-A的α-factor信号肽序列的下游,构建pGAPZα-A-apyrase重组分泌表达载体。表达载体经BlnⅠ线性化处理后电击转化毕赤酵母GS115感受态细胞,转化子经Zeocin抗性筛选和菌落PCR,成功构建了pGAPZα-A-apyrase/GS115工程菌。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)结果显示,pGAPZα-A-apyrase/GS115的工程菌分泌表达了相对分子质量(M_r)约为60000的重组apyrase蛋白。