人参皂苷Rg_(1)调控SIRT3介导ATP5A1去乙酰化减轻HL-1心肌细胞缺氧/复氧损伤的研究

探讨人参皂苷Rg_(1)通过沉默信息调节因子3(silent information regulator 3,SIRT3)抑制ATP合成酶α-亚基(ATP synthase subunit alpha,ATP5A1)乙酰化减轻HL-1细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤的机制。该研究以HL-1心肌细胞为研究对象,通过缺氧6 h、复氧2 h构建H/R损伤模型。首先采用细胞活力检测试剂盒筛选人参皂苷Rg_(1)的最佳有效浓度,然后通过微量法检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)漏出量,评估人参皂苷Rg_(1)对HL-1心肌细胞H/R损伤的保护作用。进一步采用蛋白免疫印迹法检测心肌细胞中SIRT3表达量和线粒体蛋白乙酰化水平;荧光素酶法测定三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)含量,免疫共沉淀检测ATP5A1乙酰化水平;Seahorse XFp测定细胞耗氧率(oxygen consumption rate,OCR),流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果显示,与正常组比较,模型组LDH漏出量显著增加,SIRT3表达量降低,线粒体蛋白乙酰化水平和ATP5A1乙酰化水平显著升高,OCR降低,ATP含量减少,细胞凋亡率升高;与模型组比较,人参皂苷Rg_(1)组LDH漏出量显著减少,SIRT3表达量升高,线粒体蛋白乙酰化水平和ATP5A1乙酰化水平显著降低,OCR升高,ATP含量增加,细胞凋亡率减少;与人参皂苷Rg_(1)组比较,人参皂苷Rg_(1)+si SIRT3组LDH漏出量显著增加,SIRT3表达量降低,线粒体蛋白乙酰化水平和ATP5A1乙酰化水平显著升高,OCR降低,ATP含量减少,细胞凋亡率升高。综上所述,人参皂苷Rg_(1)可以通过SIRT3抑制ATP5A1乙酰化改善线粒体呼吸功能减轻HL-1细胞H/R损伤。