ATRA和雄黄对白血病细胞PML基因及蛋白表达的影响

目的探讨PML基因及蛋白在白血病细胞中的表达和细胞内分布定位。 方法经ATRA、雄黄处理后的NB4、HL - 60、K5 62细胞为研究对象 ,细胞形态学观察采用Wright s染色法及荧光染色法 ;PML蛋白细胞内分布定位采用免疫荧光技术 ;PMLmRNA表达采用RT -PCR法。 结果 1 ATRA处理后 ,NB4和HL - 60细胞形态学上出现分化表现 ,K5 62细胞无变化 ;经雄黄处理后 ,各组细胞形态学上均出现凋亡特征性改变。 2 ATRA处理后 ,NB4细胞内融合蛋白降解 ,PML蛋白恢复定位 ,HL - 60、K5 62细胞内PML蛋白定位分布无变化 ;雄黄处理后NB4细胞内融合蛋白降解 ,PML聚积于POD结构 ,随后降解 ;在HL - 60及K5 62细胞 ,PML发生相似改变。3 ATRA、雄黄处理后各组细胞PMLmRNA表达均无显著影响。 结论在不同诱导剂刺激下 ,PML基因在蛋白水平参与细胞终末分化及诱导白血病细胞凋亡机制 ;PML蛋白在POD中发挥诱导凋亡控制细胞生长的作用。

ATRA对A549人肺腺癌细胞株增殖、细胞周期的影响及其机制研究

目的探讨全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)对A549人肺腺癌细胞株增殖、细胞周期的影响及其可能的分子机制。方法ATRA处理人肺腺癌细胞株A549,观察A549细胞生长情况并运用MTT法检测其生长抑制情况,流式细胞仪进行细胞周期分析,Western blot检测CDK4、Rb、p-ERK1/2蛋白的表达,荧光定量PCR法检测CyclinD1mRNA水平。结果ATRA具有抑制A549细胞增殖、使细胞周期阻滞于G0/G1期,并下调p-ERK1/2蛋白表达及CyclinD1mRNA水平的作用。结论ATRA可能通过下调A549细胞p-ERK1/2蛋白表达及CyclinD1mRNA水平,使细胞周期阻滞于G0/G1期,从而影响其DNA的合成,抑制其恶性增殖。

ATRA调节人异位子宫内膜间质细胞GJIC Connexin基因、蛋白的作用及意义

目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)对人异位子宫内膜间质细胞间隙连接细胞间通讯(GJIC)、connexin基因、蛋白的调节作用及意义。方法:取24例子宫内膜异位症患者卵巢处异位内膜标本,分离纯化得到间质细胞,分别用0.1mmol/L、1mmol/L、10mmol/LATRA处理24h、48h、72h、96h、120h,同时设置空白对照组,采用荧光漂白后恢复技术检测异位内膜间质细胞的GJIC功能,并检测与GJIC功能密切相关的Cx43、Cx26、Cx32的基因及蛋白表达。结果:ATRA处理72h内,1mmol/L、10mmol/L组的异位内膜间质细胞荧光恢复功能明显增强;0.1mmol/LATRA组的异位内膜间质细胞荧光恢复功能无明显变化。未经ATRA处理的异位内膜间质细胞中无Cx43、Cx26、Cx32的mRNA及蛋白表达;经1mmol/LATRA处理后,异位内膜间质细胞中检测到Cx43mRNA和蛋白表达,但未见Cx26、Cx32的mRNA及蛋白表达。结论:ATRA能选择性地诱导Cx43基因及蛋白表达,从而有效上调异位内膜间质细胞的GJIC功能;ATRA可能是治疗子宫内膜异位症的潜在药物。

ATRA诱导结肠癌细胞株LoVo分化与凋亡

目的 体外研究维甲类化合物的衍生物ATRA对LoVo 结肠癌细胞株的作用。方法 观察ATRA作用下LoVo 细胞的增殖、细胞周期和凋亡。结果 ATRA使细胞增殖抑制,细胞阻滞于G0 /G1 期,高浓度组出现亚“G0/G1 ”峰。ALP比值增高,高浓度组电镜下见凋亡细胞,TDT法测凋亡细胞比例增高,但传6 代后不增加。结论 提示ATRA可诱导LoVo 细胞分化及凋亡,但有一定限度;实验结果为临床应用ATRA

ATRA联合Genistein对A549人肺腺癌细胞株MUC1表达及转移潜能的影响

目的MUC1是一种跨膜粘蛋白,在肿瘤进展过程中起重要作用,MUC1可作为多种肿瘤预后判断的有用标记,本实验探讨了全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)联合三羟异黄酮(Genistein)对肺腺癌细胞MUC1蛋白、mRNA的表达及转移潜能的影响。方法ATRA、Genistein及两者联合处理人肺腺癌细胞株A549,免疫组化法检测MUC1蛋白的表达情况,荧光定量PCR法检测MUC1 mRNA的表达,根据细胞穿过铺有Matrigel胶多孔膜的数量检测细胞侵袭力。结果ATRA和Genistein联合处理A549肺癌细胞后,具有协同下调细胞MUC1蛋白、mRNA的表达,抑制A549细胞体外侵袭能力的作用。结论ATRA联合Genistein可能通过协同下调MUC1蛋白及mRNA的表达,从而抑制肺癌A549细胞的转移潜能。

ATRA联合Genistein对肺癌细胞凋亡及ICAM-1表达的影响

目的探讨ATRA联合Genistein对A549细胞凋亡及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响。方法采用ATRA、Genistein单药及两者联合处理人肺腺癌细胞株A549,观察A549细胞生长情况并采用MTT法检测A549细胞的增殖抑制率,运用TUNEL法检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞表面ICAM-1的表达。结果A549肺癌细胞经ATRA、Genistein及两者联合处理后,细胞增殖明显受抑制,凋亡指数明显提高,ICAM-1表达明显下调;其中以两者联合用药最为显著。结论ATRA联合Genistein能协同抑制A549细胞的增殖、促进细胞的凋亡,并可能下调ICAM-1的表达,进而降低肺癌细胞转移的潜能。

ATRA对甲状腺鳞癌细胞生长及RARβ和p21mRNA表达的影响

目的观察全反式维甲酸(ATRA)对甲状腺鳞癌SW579细胞株生长增殖及维甲酸受体β(RARβ)和p21表达的影响,进而探讨维甲酸的抗癌作用机制。方法甲状腺鳞癌SW579细胞株经不同浓度ATRA作用48h后,在倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态变化;MTT法测定细胞增殖活性;流式细胞仪检测细胞周期;RT-PCR方法检测细胞RARβ及p21mRNA的表达。结果随着ATRA的升高,SW579细胞的生长呈显著抑制状态,细胞生长滞留在G1期,RARβ和p21mRNA表达水平均显著上调,呈剂量依赖性。结论 ATRA在一定浓度范围内对甲状腺鳞癌SW579细胞株有剂量依赖性的增殖抑制作用,其机制可能与提高细胞RARβ基因的表达、进而再上调p21的表达有关。

ATRA与细胞因子对早幼粒白血病细胞体外增殖的影响

原代早幼粒白血病（ＡＰＬ）细胞在体外增殖试验中，ｒｈＧ－ＣＳＦ或ｒｈＴＮＦ均呈现增殖抑制作用，ｒｈＧＭ－ＣＳＦ或ＩＬ－６无明显抑制其增殖作用，且在一定浓度范围内呈增殖促进作用，本试验浓度条件下，单独ＡＴＲＡ对原代ＡＰＬ细胞表现为对增殖有抑制作用，对正常造血细胞无明显增殖促进或抑制作用，较低浓度ＡＴＲＡ合并上述４种因子对原代ＡＰＬ细胞都表现为增殖抑制作用，其中ｒｈＧＭ－ＣＳＦ或ＩＬ－６合并ＡＴＲＡ比单独ＡＴＲＡ对ＡＰＬ细胞增殖的抑制作用小。

浙江眼镜蛇(Naja naja atra)蛇毒镇痛多肽的分离纯化及其性质的研究

研究浙江眼镜蛇 (Najanajaatra)蛇毒的镇痛活性组分 ,为寻找镇痛效果好 ,而无成瘾性的新型镇痛药奠定基础。采用CM Sephadex离子交换色谱和SephadexG 5 0凝胶过滤色谱对浙江产眼镜蛇蛇毒中的镇痛活性组分进行分离纯化。采用PAGE IEF及HPLC等实验方法对产物纯度进行鉴定。采用SDS PAGE法和HPLC法测定产物的分子质量 ,用IEF法测定产物的等电点 ,用小鼠热板法与醋酸扭体法考察产物的镇痛活性。结果表明眼镜蛇毒经 3次柱色谱后 ,产物AAP经鉴定为单一组分。AAP经SDS PAGE法和HPLC法测定的分子质量分别是 7 2 8Mr 和 7 2 5Mr,等电点是 9 5 8。AAP的痛阈提高百分率和扭体抑制率分别为 91 3% ,77 2 %。眼镜蛇毒经

抗癌药5-FU联合α-IFN与ATRA对SACC-83细胞株作用的研究

目的:探讨诱导分化剂联合抗代谢药物对人涎腺腺样囊性癌(SACC)细胞的作用效能，寻找治疗SACC的新途径。方法：应用全反式维甲酸(ATRA)、α-干扰素(α-IFN)和5-氟尿嘧啶(5-FU)，分别以单用、双用和联用对涎腺腺样囊性癌-83(SACC-83)细胞株作用，用MTT法、软琼脂集落形成、BrdU掺入法和形态学观察的方法观察细胞的形态和功能变化。结果：①随着单用、双用和联用，SACC细胞的抑制率逐渐升高、平板克隆形成率逐渐下降、DNA合成受抑制。②癌细胞异型性逐渐消失，成熟细胞特征逐渐增多。③药物作用后细胞凋亡现象明显，可见大量凋亡小体。结论：3种药物联合使用时可对SACC细胞产生显著的抑制增殖、诱导分化和促凋亡作用。联合抗代谢药物诱导分化对SACC细胞有明显的抗肿瘤作用。

FAM及FAM辅加ATRA方案对胃癌术后患者疗效对比观察

目的对比观察FAM及FAM辅加ATRA方案对胃癌术后患者的疗效。方法将62例胃癌根治性手术(D2、D3)后患者随机分为FAM+ATRA组及FAM组。结果FAM+ATRA组术后第1、2、3年的肿瘤复发转移率分别为16.1%,38.7%和67.7%;FAM组分别为25.8%,54.8%和74.2%。术后FAM+ATRA组1、2、3年生存率分别为93.5%、74.2%和38.7%;FAM组分别为80.7%、61.3%和35.5%。2组术后第1、2年的肿瘤复发转移率和患者1、2年生存率比较均有显著性差异(P<0.05),2组术后第3年肿瘤复发转移率和患者3年生存率比较无显著性差异(P>0.05)。结论FAM辅加ATRA治疗能有效提高胃癌术后患者的近期疗效及1、2年生存率。

比较丹参酮ⅡA、ATRA和As_2O_3对NB_4细胞PML-RARα融合蛋白作用的规律

目的 :比较丹参酮ⅡA、ATRA和As2 O3 对NB4细胞PML -RARα融合蛋白作用的规律 ,探索TanⅡA降低PML -RARα融合蛋白水平的原因。方法 :药物作用 2 4、 72、 12 0h ,用间接免疫荧光方法检测PML -RARα融合蛋白的变化。结果TanⅡA影响NB4细胞PML -RARα荧光染色颗粒的规律与ATRA作用一致 ,与As2 O3 作用不一致。结论 :TanⅡA可能通过激活caspase裂解PML -RARα融合蛋白或通过PML -RARα融合蛋白中RARα的AF - 2部分而降解PML -RARα融合蛋白 ,致PML -RARα融合蛋白水平降低 ,NB4细胞分化。

中药辅助As_2O_3+ATRA双诱导治疗急性早幼粒细胞白血病4周的疗效观察

目的:观察中药辅助As2O3+ATRA双诱导治疗急性早幼粒细胞白血病4周的临床疗效。方法:回顾性分析22例确诊为急性早幼粒细胞白血病患者,其中治疗组12例,对照组10例,对照组行As2O3+ATRA双诱导治疗,治疗组在行双诱导治疗的基础上辅助以中医药治疗,并于治疗前后行血常规、骨髓涂片检查及临床症状评估。结果:经28天治疗后,两组患者的指标均较前改善,指标改善中药参与组更明显;同时考虑患者的症状改善情况,治疗组整体疗效较对照组更为显著,有效率高达91.6%。结论:中药辅助As2O3+ATRA双诱导治疗急性早幼粒细胞白血病4周后,较对照组更能改善患者外周血及骨髓的相关指标,同时改善患者症状,整体疗效满意。

ATO与ATRA联合小剂量HHT治疗急性早幼粒细胞白血病的临床疗效

目的探讨亚砷酸(ATO)、全反式维甲酸(ATRA)联合小剂量高三尖杉酯碱(HHT)治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)的临床疗效。方法按入院先后顺序,将48例APL患者随机分为观察组与对照组各24例。观察组先予ATRA+ATO+小剂量HHT诱导治疗,再以HA方案巩固治疗2个疗程;对照组先予ATRA+ATO+柔红霉素(DNR)诱导治疗,再以DA方案巩固治疗2个疗程。比较两组的完全缓解率(CR)、达CR时间、骨髓PML/RARa融合基因转阴率、不良反应、成分输血及住院费用等情况。结果观察组的CR、达CR时间及PML/RARa融合基因转阴率与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);观察组诱导期间败血症发生率低于对照组,输血小板量和平均住院费用少于对照组,组间差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 ATRA、ATO联合小剂量HHT治疗初诊APL效果确切,并发症发生率低,治疗费用少,具有重要临床应用价值。

ROZ与ATRA联合应用对MCF-7细胞诱导作用

研究PPARγ激动剂罗格列酮(ROZ)与全反式维甲酸(ATRA)联合应用诱导MCF-7细胞发生分化和凋亡的作用,阐述PPARγ激活后的抗肿瘤作用和机制.采用克隆原形成实验测定两化合物对MCF-7细胞存活率的影响;采用诱导分化实验测定两化合物对MCF-7细胞分化的影响;并进一步应用RT-PCR分析两化合物对MCF-7细胞相关基因表达的影响.集落形成实验显示,两化合物联合应用后,能明显抑制MCF-7细胞的生长.诱导分化实验表明,ROZ在低剂量时促进MCF-7细胞的分化,而随着剂量的增加,分化作用减弱,与ATRA联合应用后,同样在低剂量时促进MCF-7细胞分化,并且出现脂滴的细胞数增加,脂滴增大,在高剂量时,分化作用亦有所减弱.RT-PCR结果表明,在两化合物的作用下,MCF-7细胞中PPARγ的表达升高,并使MCF-7细胞中与凋亡相关基因的表达发生变化.ROZ与ATRA联合应用具有协同作用,激活PPARγ,抑制MCF-7细胞增殖,诱导MCF-7细胞发生分化.

HSP90β在ATRA诱导的白血病细胞株HL60耐药中的作用研究

目的:通过检测HSP90β基因在白血病细胞株HL60及其耐药株HL60/ATRA中的表达差异,探讨HSP90β基因在ATRA相关多药耐药性发生中的作用。方法:采用ATRA浓度递增及间歇诱导法建立HL60/ATRA耐药细胞株;用MTT法和流式细胞检测技术(Flow cytometry,FCM),分别检测HL60和HL60/ATRA细胞的增殖及细胞周期;RT-PCR、Western blot法检测HSP90β基因在HL60及HL60/ATRA细胞中的表达;通过MTT法检测HL60和HL60/ATRA细胞对常用化疗药物(VCR、CTX、VP-16、ADM)敏感性。结果:成功构建了白血病细胞耐药株HL60/ATRA;在mRNA和蛋白两个水平,均检测到HSP90β在耐药株HL60/ATRA中的表达较HL60明显增高(P<0.01);药敏结果显示HL60/ATRA细胞对VCR、CTX、ADM、VP-16的耐药倍数分别为10.74、5.51、4.01、3.24。结论:ATRA能够诱导HL60细胞中HSP90β高表达,经ATRA诱导后的HL60/ATRA细胞对抗癌药物的敏感性显著降低、耐药性增高,这提示HSP90β可能在ATRA相关多药耐药性的发生过程中发挥着重要作用。

ATRA对新城疫疫苗的体液免疫增强作用的研究

为了研究全反式维甲酸(ATRA)对新城疫疫苗的体液免疫增强效果,本试验选取1日龄AA肉鸡作为研究对象,低剂量组和高剂量组分别灌服1μmol/kg体重和5μmol/kg体重ATRA,在7日龄和28日龄时对药物对照组、低剂量组、高剂量组通过滴鼻、点眼的方法免疫新城疫疫苗。在7、14、21、28、35、42日龄和49日龄,每组随机取7只鸡,称重,采集胸腺、脾脏、腔上囊和血清,计算胸腺、脾脏和腔上囊免疫器官指数,利用血凝抑制(HI)试验检测血清中新城疫抗体效价。结果表明,ATRA可以促进雏鸡免疫器官生长,提高雏鸡免疫器官指数和新城疫抗体效价,表明ATRA可以增强雏鸡的体液免疫应答,且5μg/kg体重剂量ATRA对新城疫疫苗的体液免疫增强效果更显著。

蟾蜍灵联合ATRA诱导HL-60细胞分化并上调Syk表达

目的:观察低剂量蟾蜍灵、全反式维甲酸(All-trans retinoic acid,ATRA)单药或联合应用对HL-60细胞增殖及分化的影响,同时检测上游通路Syk表达的变化。方法:流式细胞仪技术检测CD11b表达;West-ern Blot检测Syk和Tubulin表达。结果:与对照组相比,低剂量蟾蜍灵、ATRA或联合用药不同程度地抑制HL-60细胞增殖,同时蟾蜍灵联合ATRA以时间依赖性的方式诱导HL-60细胞分化,并伴有Syk表达上调,但是Syk的酪氨酸磷酸化并未受影响。结论:Syk表达上调可能参与调节低剂量蟾蜍灵联合ATRA对HL-60细胞的分化诱导作用。

甲胎蛋白抑制PTEN活性导致肝癌细胞耐受ATRA诱导的凋亡的研究

目的研究分析甲胎蛋白对PTEN活性产生抑制引起肝癌细胞耐受ATRA发生凋亡。方法选取2012年11月一2013年11月期间本院诊治36例肝癌患者，将患者术后肝癌细胞制成标本。结果人体肝癌HepG2与Bel7402细胞均存在PTEN表达，经160μmol／L的ATRA处理24h后可加强这些细胞的PTEN的表达。Co—IP技术实验得知甲胎蛋白可与PTEN相结合，最终对ATRA产生影响。结论肝癌细胞中表达的甲胎蛋白可与PTEN相结合，最终发现AFP为肝癌细胞耐受ATRA的重要因子。

中华眼镜蛇(Naja Naja Atra)毒神经生长因子对PC_(12)细胞κ阿片受体mRNA表达的影响

目的研究眼镜蛇毒神经生长因子(nNGF)对PC12细胞κ阿片受体mRNA表达的影响,探讨nNGF诱导PC12细胞分化的分子机制。方法用RT-PCR方法半定量地考察nNGF及κ阿片受体的一些拮抗剂和激动剂对PC12细胞κ阿片受体mRNA表达的影响。结果(1)在25,50和100 ng/mL 3个nNGF剂量组中,50和100 ng/mL nNGF显著下调PC12细胞κ阿片受体mRNA的表达。(2)50 ng/mL nNGF分别处理PC12细胞1,3,5,7,10 d后,结果显示κ阿片受体mRNA表达随时间有降低的趋势,7 d时显著下调(P<0.05),10 d时特别显著(P<0.01)。(3)10μmol/L吗啡上调PC12细胞κ阿片受体mRNA表达,并能逆转nNGF对该κ阿片受体mRNA表达的下调效应。10μmol/L纳络酮对PC12细胞κ阿片受体的表达无显著影响,也能逆转nNGF对该κ阿片受体mRNA表达的下调效应。但吗啡和纳络酮共存时不能逆转NGF对该κ阿片受体mRNA表达的下调效应。结论nNGF诱导PC12细胞分化时,能下调其κ阿片受体mRNA表达,这种下调能分别被吗啡或纳络酮逆转,但不能被吗啡和纳络酮共存时逆转。