PolyQ重复变异对ATXN1基因转录的影响

目的探讨ATXN1基因内PolyQ重复变异对ATXN1基因自身转录的影响。方法通过分子克隆构建正常ATXN1基因(PolyQ重复数为29)和突变ATXN1基因(PolyQ重复数为61),将其分别插入慢病毒载体pLVX-Puro-3xflag-C中构建表达载体,然后将携带正常和突变ATXN1基因的慢病毒表达载体分别感染人胚肾细胞(293T细胞),通过实时荧光定量PCR检测正常和突变ATXN1 mRNA的表达水平。结果293T细胞内正常和突变ATXN1 mRNA的相对表达量分别为(661.9±17.7)和(381.0±20.5),正常ATXN1 mRNA的相对表达量高于突变ATXN1 mRNA的相对表达量(P<0.05)。结论ATXN1基因内PolyQ重复变异可抑制ATXN1基因自身转录,对基因转录影响可能是PolyQ重复变异引起Ⅰ型脊髓小脑型共济失调的病理机制之一。

ATXN1基因内CAG重复序列拷贝数增加对神经母细胞瘤细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨ATXN1基因内CAG重复序列拷贝数增加对神经母细胞瘤细胞增殖与凋亡的影响。方法首先构建正常ATXN1基因(CAG重复序列拷贝数为29)和突变ATXN1基因(CAG重复序列拷贝数为61),将其插入pLVX-Puro-3xflag-C载体中构建表达载体,表达载体再与pMD2.G及psPAX2共转染人胚肾细胞(293T细胞)产生慢病毒表达载体,分别感染293T细胞,筛选稳定表达的细胞株。通过CCK8实验检测稳定表达细胞株的增殖能力,通过流式细胞仪检测稳定表达细胞株的凋亡率。结果表达突变ATXN1基因的细胞在培养3~5 d时细胞的OD450值均低于表达正常ATXN1基因的细胞(P<0.01)和只转染pLVX-Puro-3xflag-C载体的阴性对照细胞(P<0.01);5 d后表达突变ATXN1基因、正常ATXN1基因、阴性对照细胞凋亡率分别为12.56%、9.06%、8.17%,表达突变ATXN1基因的细胞凋亡率高于表达正常ATXN1基因细胞和阴性对照细胞的凋亡率(P均<0.01)。结论 ATXN1基因内CAG重复序列拷贝数增加可抑制神经母细胞瘤细胞的增殖,促进细胞凋亡。

脊髓小脑性共济失调1型一哈萨克族家系遗传学特征分析

目的探讨脊髓小脑性共济失调1型(spinocerebellar ataxia type 1,SCA1)一哈萨克族家系遗传学特征。方法应用聚合酶链反应、琼脂糖凝胶电泳、T载体连接克隆测序等技术对42例家系成员进行ATXN1基因CAG三核苷酸重复数目测定。对检测结果进行分析并与表型正常的家系成员和健康人对照。结果42例家系成员中SCA1基因突变者19例,5例已发病SCA1患者异常等位基因CAG重复数目为41~47次。家系内表型正常的23例成员SCA1等位基因CAG重复数目为17~30次。60名健康对照者SCA1等位基因CAG重复数目为12~30次。在正常等位基因中发现CAT结构的插入。结论哈萨克族SCA1家系是国内首次报告少数民族SCA1家系,CAG异常扩增数目在不同民族中存在差异。等位基因中CAT结构的插入更有利于基因的稳定性。