丁酸钠部分依赖CREB上调急性白血病细胞CD86分子

目的:观察丁酸钠(SB)对急性白血病细胞CD86分子表达的影响,并探讨其作用机制。方法:流式细胞术检测NB4、HL-60、U937细胞经SB处理前后的CD86分子表达变化,半定量RT-PCR检测SB对各组细胞CD86 mRNA表达变化,AUT凝胶电泳检测核心组蛋白乙酰化程度,pCREB试剂盒检测细胞核内pCREB含量变化。结果:SB处理各组细胞CD86分子表达与对照组比较均出现显著升高;CD86 mRNA水平表达也明显增高;AUT电泳显示经SB作用后,各组细胞组蛋白乙酰化程度明显增加;SB处理后细胞核内pCREB含量增多。结论:SB使NB4、HL-60、U937细胞核心组蛋白乙酰化程度增加,染色质重塑,有利于CREB等转录因子的活化并与DNA结合,促进CD86转录增强,表达增多。

AUT凝胶电泳在牛胰核糖核酸酶折叠研究中的应用

目的:牛胰核糖核酸酶是一种用于蛋白折叠研究的经典模式蛋白,在折叠研究过程中主要使用高效液相色谱用于分离检测不同阶段的蛋白折叠中间体。高效液相色谱具有自动化、分离效果好、样品可回收等优点,同时也存在检测通量较低、仪器设备较为昂贵等不足。AUT凝胶电泳简便、快捷、检测通量较高,本文尝试将其应用于牛胰核糖核酸酶的折叠研究。方法:使用AUT凝胶电泳、酶活性检测、质谱对牛胰核糖核酸酶还原变性过程及产生的折叠中间体进行检测;通过高效液相色谱和质谱对折叠中间单体进行分离检测,并分别进行AUT凝胶电泳检测以解析各折叠中间单体在电泳中的条带位置;通过AUT凝胶电泳和酶切后质谱鉴定各折叠中间单体的二硫键配对方式。结果:AUT凝胶电泳可以有效区分不同条件下的牛胰核糖核酸酶还原变性过程,检测结果与酶活性、质谱结果相符,并可以很好地区分牛胰核糖核酸酶还原变性过程折叠中间体。高效液相色谱将牛胰核糖核酸酶还原变性过程折叠中间体分离为13个色谱峰,并与AUT凝胶电泳中的11个条带位置进行匹配。确认牛胰核糖核酸酶还原变性过程折叠中间单体的二硫键配对方式,并与AUT凝胶电泳条带进行匹配,Cys58-Cys110和Cys26-Cys84构象熵减作用强于Cys40-Cys95和Cys65-Cys72。结论:AUT凝胶电泳适用于检测牛胰核糖核酸酶折叠中间体,可以与高效液相色谱、质谱等检测技术相互补充,共同应用于牛胰核糖核酸酶的折叠研究。