11名少牙畸形病人Pax 9、Msx 1、Axin 2基因突变的检测

目的:对少牙畸形病人血样标本中提取的DNA进行Pax 9、Msx 1和Axin 2核苷酸单链构象多态性和突变的检测,探讨少牙畸形的发病机制。方法:收集11名少牙畸形病人外周血标本,提取DNA,采用聚合酶链反应(PCR)、聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)技术结合DNA直接双向测序对病人DNA进行检测。结果:在11名病人中发现1个Msx 1单核苷酸多态位点,但没有发现有关Pax 9、Msx 1、Axin 2突变。结论:结合少牙畸形的高发病率及Pax 9、Msx 1、Axin 2基因突变的较低报告数值间的偏差,遗传因素在少牙畸形形成中的作用比原先预想的更加具有异质性。

Axin1和Axin2基因在急性白血病中的表达及临床意义

目的:探讨Axin1和Axin2基因的表达与急性白血病发生发展的关系及其临床意义。方法:通过实时定量PCR技术检测36例急性白血病患者及15例对照组骨髓单个核细胞中Axin1和Axin2 mRNA的表达情况。结果:Axin1在初诊组、缓解组和未缓解组中的表达量均低于对照组(P<0.05),初诊组与缓解组、初诊组与未缓解组的表达量均无明显差异(P>0.05),缓解组与未缓解组初诊时Axin1的表达无明显差异(P>0.05);Axin2在缓解组中的表达量比对照组明显减低(P<0.05),未缓解组比缓解组初诊时Axin2的表达明显增高(P<0.05),初诊组与对照组、初诊组与未缓解组的表达均无明显差异(P>0.05)。结论:Axin1与急性白血病的发生诊断相关,Axin2则可以作为急性白血病的一个预后指标。

AXIN2基因的3个SNP位点与新疆维吾尔族先天缺牙的相关性

目的:探讨维吾尔族单纯型先天缺牙患者标本中AXIN2基因的突变位点。方法:收集维吾尔族非单纯型先天缺牙家系3个,采集家系患者颊黏膜拭子提取DNA,采用聚合酶链反应技术,对分段纯化的PCR产物进行DNA双向测序检测患者的DNA。结果:3个家系的单纯型先天缺牙临床表型符合常染色体显性遗传规律,患者出现不同数量的缺失牙或伴发锥形牙。测序后检测出AXIN2的3个可能的SNP位点。结论:AXIN2基因片段中某些编码基因的改变可能与维吾尔族单纯型先天缺牙有关。

APC、MYH及AXIN2基因突变检测在家族性腺瘤性息肉病胚系突变筛查中的应用

目的:通过对本实验室中已收集的云南省遗传性大肠癌标本库中的家族性腺瘤性息肉病(familial adenomatous polyposis,F A P)家系标本进行F A P常见致突变基因APC(adenomatous polyposis coli)基因的筛查,对APC基因筛查为阴性的标本则进一步行MYH(Mut Y Homologue)基因及轴抑制蛋白(axis inhibition protein 2,AXIN2)基因检测,探讨FAP家系患者的致病基因及其突变位点.方法:利用已建立的云南省遗传性大肠癌标本库中家系标本进行DNA的提取,PCR特异性扩增APC基因所有外显子和启动子区域,分析APC基因及其启动子是否存在点突变;对于APC基因筛查未见突变者,继续行MYH和AXIN2基因全外显子检测.结果:在所选的5个FAP家系成员的DNA中,1个家系中的1例患者检测出A P C基因新的突变(100025_100028het_dup AGAA),其余4个家系患者未检测到APC基因致病性突变;而对于APC基因突变阴性者进行的MYH基因突变筛查中,其中一个家系中的1例患者发现了新的突变(11198_11200het_del TGT);而在AXIN2基因检测中,检出4个同义突变,其中,同义突变c.2062C>T(p.L688L)为已报道的致病性突变.结论:相较于国内外同类研究报道,云南省FAP家系成员APC基因突变检出率较低,针对MYH及AXIN2基因检测同时也应作为FAP致病基因筛查的靶点.

AXIN2基因单核苷酸多态性与多数牙缺失的相关性研究

目的:寻找AXIN2基因的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)与中国人群多数牙缺失的关系。方法:收集97例单纯型多数牙缺失先天牙齿缺失患者和200例正常对照者。从静脉血或者颊黏膜拭子提取DNA,利用PCR技术对AXIN2基因上3个SNP位点(rs2240308,rs145353986和rs139209450)进行基因分型检测。结果:发现AXIN2基因的rs145353986位点的基因型和等位基因型的出现频率在患者和正常对照组中的分布,差异有统计学意义(P=0.011),等位基因"C"在患者组中出现频率更高(P=0.002)。结论:AXIN2基因的rs145353986位点的多态性与中国人群的先天牙齿缺失存在明显相关性,AXIN2基因可以作为先天牙齿缺失研究的重点关注基因之一。

人和非洲象AXIN1基因的鉴定与生物信息学分析

隐睾是男性生殖器最常见的先天性异常之一.正常状态下,人(Homo sapiens)在出生时睾丸就已经下降到阴囊,而非洲象(Loxodonta africana)的睾丸始终位于腹腔内却能维持正常的生殖.本文通过克隆测序鉴定了隐睾症相关的基因AXIN1在人和非洲象两个物种中的差异,并对其结构和理化性质进行生物信息学分析.结果表明,与人相比,AXIN1基因在非洲象中缺失第9个外显子(108 bp);二者在理化性质、信号肽、跨膜区域、磷酸化位点、亚定位信息和结构域等方面没有显著性差异,但是在核心启动子、蛋白互作、二级结构和三维结构等方面存在差异.本研究初步证明非洲象AXIN1基因第9个外显子的缺失引起蛋白质性质发生了一些重要变化,为今后探讨这些改变是否和睾丸位置相关奠定了基础.

单纯性多数牙缺失家系的AXIN2基因突变分析

目的通过对AXIN2基因多态性与单纯性多数牙先天缺失关系的探讨,寻找该病发病的可能基因因素。方法对单纯性多数牙先天缺失家系中患者进行临床和实验室相关检查;而后提取基因组DNA,通过RT-PCR方法对AXIN2基因的外显子进行扩增、测序,同时分析基因突变类型。结果 DNA测序显示,在AXIN2基因的3号外显子及附近的内含子区2例患者出现3个相同类型的基因突变,分别是:c.1365A>G(p.Pro455=),c.956+16A>G(Ⅱ-1:纯合型;Ⅲ-1:杂合型),c.1200+71A>G(纯合型),同时先证者的母亲(Ⅱ-2)出现c.1365A>G和c.1200+71A>G的杂合突变类型。经生物信息软件分析认为均是多态性位点。结论 AXIN2基因的c.956+16A>G,c.1365A>G和c.1200+71A>G突变可能与该家系的单纯性多数牙齿缺失密切相关,但AXIN2在多数牙缺失发生发展各阶段的确切作用还需要进一步的研究。

Barx2和Axin2在ALS转基因小鼠脊髓中表达变化

目的探讨Bar家族同源域因子(Barx)2和轴向抑制蛋白(Axin)2在肌萎缩侧索硬化症(ALS)转基因小鼠脊髓中的表达变化及其在ALS发病中的作用和意义。方法选用ALS转基因小鼠和同窝野生型(WT)小鼠,将33只成年ALS小鼠按照不同发病时期分为早(95 d)、中(108 d)、晚(122 d)期ALS组各11只,并且每组配以同窝WT小鼠作为对比参照,分别为早(95 d)、中(108 d)、晚(122 d)期WT组各11只。应用免疫荧光技术检测Barx2和Axin2在ALS转基因小鼠脊髓内的表达变化规律及其与神经元的共定位关系。应用反转录(RT)-聚合酶链反应(PCR)检测Barx2和Axin2 mRNA表达水平,应用Western印迹检测Barx2和Axin2蛋白表达。结果与早、中、晚期WT组相比,早、中、晚期ALS组脊髓内Barx2和Axin2 mRNA及蛋白表达均明显下降(P<0.05)。免疫荧光检测结果显示,晚期ALS及WT组脊髓中都能检测到Barx2和Axin2阳性细胞,且与神经元共表达,与晚期WT组相比,ALS组Barx2和Axin2免疫阳性反应均减弱。结论ALS转基因小鼠脊髓中Barx2和Axin2表达随病程的进展而降低,提示Barx2和Axin2与ALS密切相关。

3个新疆维吾尔族先天缺牙家系AXIN2基因突变的检测

目的探讨新疆维吾尔族非综合征型先天缺牙患者标本中轴抑制基因-2(AXIN2)的突变位点,为研究维吾尔族人群中先天缺牙疾病的发病机制提供基因学参考和依据。方法通过临床先证者找到3个新疆维吾尔族非综合征型先天缺牙家系9例患者,在患者及其家属知情同意的情况下,采集家系成员颊黏膜拭子,提取目的基因组DNA,采用聚合酶链反应技术,对分段纯化的PCR产物进行DNA双向测序检测患者的DNA。结果 3个维吾尔族家系的非综合型先天缺牙临床表型符合常染色体显性遗传规律,患者出现不同数量的缺失牙或同时伴发锥形牙。测序后检测出病例Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ的AXIN2基因在外显子2的第264位和第547位、外显子6的第162位与外显子11的第922位和第1 141位有突变。结论 AXIN2基因片段中某些编码基因的改变可能与维吾尔族单纯型先天缺牙存在相关性。

Axin2在肾母细胞瘤中的表达及其临床意义

目的分析Axin2在正常肾组织和肾母细胞瘤组织中的表达，探讨Axin2在肾母细胞瘤发病机制中的作用。方法采用免疫组化sP法检测20例肾母细胞瘤组织、10例正常。肾组织中Axin2蛋白的表达情况，对相关数据进行统计学分析。结果Axin2在正常肾组织和。肾母细胞瘤组织中均有阳性表达。在肾母细胞瘤组织中：2—12岁患者瘤组织中Axin2阳性表达率为62．5％（5／8），13～51岁患者瘤组织中Axin2阳性表达率为100％（12／12），二者比较差异有统计学意义（P〈0．05）；Ⅰ-Ⅱ期13例，Axin2阳性表达率为100％（13／13），Ⅲ-Ⅳ期7例，Axin2阳性表达率为57．1％（4／7），二者比较差异有统计学意义（P〈0，05）。结论Axin2在正常肾组织和肾母细胞瘤组织中均有明显表达，其表达与患者的年龄、TNM分期、恶性程度有关，与性别无关。Axin2可能与肾母细胞瘤的发生发展有一定的关系。

DIXDC1和AXIN2基因在先天性巨结肠症中的表达及意义

目的分析DIXDC1和AXIN2基因在先天性巨结肠症（hirschsprung disease，HSCR）中的表达，探讨其在HSCR中的意义。方法采用蛋白印迹（Western blot）、免疫组化和荧光实时定量PCR（quantitative rea1-timePCR，qRT-PCR）方法检测60例HSCR患儿正常段（有神经节段肠管）和狭窄段（无神经节段肠管）中DIXDC1和AXIN2的表达，并对其表达进行定量与比较分析。结果DIⅪ）C1和AxIN2在HSCR狭窄段肠管中蛋白相对表达量为27．16±2．04和29．63±4．72，高于正常段肠管中的13．27±3．15和14．99±2．82，差异有统计学意义（DIⅪ）C1P〈O．041；AXIN2P〈0．035）。DIXDC1和AXIN2在HSCR狭窄段肠壁的肌间和黏膜下细胞胞质内呈强阳性反应，而在HSCR正常段肠壁的肌间和黏膜下细胞胞质内呈弱阳性或阴性。DIⅪ）C1和Ax1N2在HSCR狭窄段肠管中mRNA相对含量为22．34±1．23和25．77±2．06，高于正常段肠管中的12．53±1．47和13．98±1．62，差异有统计学意义（DIXDC1P〈O．033；AXIN2P〈O．029）。结论DIXDC1和AXIN2mR—NA与蛋白在HSCR肠管组织中的异常表达，可能与HSCR的发生关系密切，并可能在先天性消化道畸形的肠道发育中起一定作用。

一个单纯性先天缺牙家系的临床表现及PAX9、MSX1、AXIN2基因突变分析

目的对一个单纯性先天缺牙家系进行缺牙临床表型的分析及PAX9、MSX1及AXIN2基因突变检测,探讨单纯性先天缺牙的可能发病机制。方法收集一个单纯性先天缺牙家系的临床资料(包括口腔检查和影像学资料)和静脉血标本,提取DNA,采用PCR分段扩增PAX9基因的1-4号外显子,MSX1基因的1、2外显子及AXIN2基因的1-10号外显子,通过基因测序,分析该家系PAX9、MSX1及AXIN2基因是否存在突变、突变方式及位点,并进行可疑致病突变的验证分析。结果该家系中单纯性先天缺牙患者的缺失牙位数目最多为第二前磨牙和尖牙,均占该家系缺牙数目的41.2%。基因检测发现PAX9基因2个SNP位点:c.717C>T、c.718G>C;MSX1基因未检测到突变;AXIN2基因发现3个SNP:c.432.T>C、c.1365.A>G、c.2062.C>T。结论该家系的单纯性先天缺牙可能是由AXIN2基因c.2062.C>T改变和PAX9基因c.717C>T、c.718G>C改变共同作用下形成的。

结直肠腺瘤组织Axin2和Cyclin D1表达及其生物学意义的研究

目的:探讨结直肠隆起型腺瘤和平坦型腺瘤组织Axin 2和Cyclin D1的表达情况。方法:收集64例结直肠隆起型腺瘤和47例结直肠平坦型腺瘤的活检组织标本,统计其临床病理资料,采用免疫组化检测各标本中Axin 2和Cyclin D1蛋白的表达情况。结果:在平坦型腺瘤中Axin 2的表达明显弱于隆起型腺瘤中的表达,而平坦型腺瘤组织Cy-clin D1的表达强于隆起型腺瘤组织CyclinD1的表达(Axin 2:z=-2.390,P=0.017;Cyclin D1:z=-3.103,P=0.002)。结论:结直肠平坦型腺瘤组织Axin 2和Cyclin D1的表达情况与隆起型腺瘤比较差异有统计学意义,提示结直肠平坦型腺瘤发生发展的机制不同于隆起型腺瘤。

一非综合征型多数牙齿先天缺失家系的AXIN2基因检测研究

目的检测一非综合征型多数牙齿先天缺失家系的AXIN2基因,探讨其与该家系成员多数牙齿先天缺失的关系。方法本研究于2011年3月至2013年3月在中国医科大学口腔医学院中心实验室完成。对一非综合征型多数牙齿先天缺失家系3代成员共17人,在患者和家属知情同意及中国医科大学口腔医学院伦理委员会批准的前提下,提取其外周静脉全血基因组DNA,用Primer Premier 5.0软件设计引物,聚合酶链式反应(PCR)方法扩增AXIN2基因全部外显子后,纯化PCR产物,应用3730 DNA序列分析仪双向测序,结合系谱图进行分析。结果该非综合征型多数牙齿先天缺失家系的临床表现符合常染色体显性遗传规律;AXIN2基因测序结果显示:存在1个与牙齿先天缺失相关的错义突变位点c.148C>T(rs2240308),以及3个单核苷酸多态(SNP)位点c.1201+71(rs8078753)、c.1201+82、c.1201+100(rs56248738),其中c.1201+82为新发现的SNP位点。结论该家系多数牙齿先天缺失可能与AXIN2基因的多个SNP位点有关。

AXIN2基因在肝细胞癌中的表达及甲基化研究

目的观察肝细胞癌（HCC）中AXIN2mRNA表达水平，分析AXIN2基因甲基化水平对mRNA表达的影响及在HCC发生、发展中的意义。方法收集手术切除的53例HCC和配对癌旁组织标本、7例正常肝组织标本和5种人肝癌细胞系。应用荧光定量PCR方法检测AXIN2mRNA水平的表达和AXIN2基因启动子区甲基化状态。结果AXIN2在癌组织中的mRNA表达水平（0．1629±0．0679）低于癌旁组织（0．4155±0．2330），差异有统计学意义（Z=-2．567，P=0．010）。HCC和癌旁组织中AXIN2基因甲基化水平（39．77％±3．89％和36．92％±2．81％）均高于正常肝组织（7．38％±2．40%，t值分别=-3．663和-4．591，P值分别=0．009和0．007）。5种人肝癌细胞系中AXIN2基因均呈高甲基化状态。AXIN2mRNA表达水平与甲基化程度呈负相关（r=-0．458，P=0．032）。TNMIII期HCC患者的AXIN2甲基化水平高于TNMI和Ⅱ期患者（P=0．008）。结论AXIN2mRNA表达水平下降与其高甲基化状态相关，AXIN2mRNA低表达和启动子区异常甲基化可能是HCC发生、发展的重要机制之一。

AXIN2基因三个位点与先天性巨结肠的关联研究

目的探讨AX／N2基因单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphisms，SNPs）rs2240308、rs8081536和rs99136213个位点与先天性巨结肠（Hirsehsprtmgdisease，HSCR）的关联性。方法对120例HSCR患者和120名正常人群外周血进行基因组DNA抽提，用PCR技术对AXIN2基因3个位点（rs2240308、rs8081536和rs9913621）进行PCR扩增，PCR产物用内切酶cWI、DdeI和凰洲I消化，将SNPs位点进行分型与分析，应用．X2检验统计分析病例组和对照组等位基因频率、等位基因型频率及其患病风险；同时将PCR产物进行测序，以进一步确定基因突变位点。结果HSCR组与对照组AXIN2 rs8081536CC和CT基因型频率差异无统计学意义（P〉0．05）；而HSCR组与对照组AXIN2rs2240308GG、AG和AA基因型频率及A和G等位基因频率差异有统计学意义（P〈0．05），GG和AA基因型及G等位基因的患病风险分别为2．091、0．846和1．703；HSCR组与对照组AXIN2rs9913621CC、CT和1Tr基因型频率及C和T等位基因频率差异有统计学意义（P〈0．05），CC和TT基因型及T等位基因的患病风险分别为0．535、1．113和1．569。测序rs2240308第301位密码子核苷酸GCA→CCA杂合突变；rs9913621第199位密码子核苷酸CAC→CAG杂合突变。结论AXIN2rs8081536等位基因变异与HSCR的易感性无关；AXIN2rs2240308和rs9913621与HSCR的发生可能有关联，具有GG基因型与cc基因型患HSCR的危险性相对较高。

结直肠癌的Wnt信号通路相关基因突变的研究

目的 探究AXIN1、AXIN2基因多态性与结直肠癌遗传易感性的相关性。 方法 以临床确诊结直肠癌患者288例作为病例样本,健康对照者320例作为健康对照,使用激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOFMS)技术进行单核苷酸多态性(SNP)分型。SNP选择按照标签SNPs(tagSNPs)方法进行挑选,单体型的构建则应用SHESIS软件。 结果 等位基因模型下,AXIN1基因rs1805105等位基因增加结直肠癌的风险,OR值=1.53(1.351~1.732),P值<0.001。其他相关SNP位点等位基因未发现相关性。逻辑回归分析显示AXIN1基因rs1805105TT基因型相比,CT基因型与CC基因型与结直肠癌相关,P值均<0.001。CT基因型联合CC基因型与TT基因型相比,结直肠癌的易感性风险比为3.212(2.466~4.184),P值<0.001。单倍型分析显示AXIN1基因C-C-A单倍型与结直肠癌发病风险相关,OR=1.124(1.084~1.453),P值<0.001。 结论 AXIN1基因rs1805105基因多态性可能与结直肠癌的易感性相关。

3例非综合征多数牙先天缺失家系的基因筛查

目的:探讨非综合征型多数牙先天缺失患者的基因突变位点,为此类疾病的诊断提供基因学参考。方法:提取患者及其家庭成员静脉全血基因组DNA,用PCR方法扩增PAX9、MSX1及AXIN2三个基因全部外显子后,进行纯化测序,结合系谱图进行分析。结果:3个家系的临床表现符合常染色体显性遗传规律,测序结果均显示存在两个与先天缺牙密切相关的错译或同义突变SNP位点(PAX9 G718C,AXIN2C2062T);其中一个家系PAX9基因中发现一已知与多数牙缺失相关的错译突变位点C139T(R47W)。结论:多数牙先天缺失可能与PAX9、AXIN2基因片段中某些核苷酸的改变,包括某些高危SNP位点相关。

Axin2基因对肝癌细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关分子表达的调控及机制

目的探讨Axin2基因对肝癌细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关分子表达的调控及其机制。方法通过TOPflash试验检测Axin2基因对Wnt/β-catenin信号通路的影响;荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,QPCR)法检测Axin2基因在正常肝细胞LO2及3种肝癌细胞HepG2、HHCC、HB611中的表达水平;对肝癌细胞HepG2中Axin2的表达进行干扰,并检测Wnt/β-catenin信号通路相关基因(β-catenin、Cyclin A、CDK2、Wnt5a、STAT3、EGFR、APC)mRNA转录水平及相关蛋白(β-catenin、Cyclin A、CDK2、APC)的表达量。结果 Axin2对Wnt/β-catenin信号通路有显著抑制作用,且呈剂量依赖性(P <0. 05);3种肝癌细胞Axin2的表达水平显著低于正常肝细胞LO2(P <0. 05);干扰HepG2细胞中Axin2基因表达后,Axin2基因m RNA转录及蛋白表达水平降低,Wnt信号通路下游基因β-catenin、Cyclin A、CDK2、Wnt5a、STAT3和EGFR基因mRNA转录水平及β-catenin、Cyclin A、CDK2蛋白表达量均上升,而APC基因mRNA转录水平及蛋白表达量降低。结论 Axin2基因通过调控Wnt/β-catenin信号通路相关基因的表达抑制肝癌细胞的生成,本研究为寻找新的肝癌治疗靶点及防治药物提供了实验依据。

1例非综合征型先天缺牙家系的基因筛查

目的:探讨非综合征型先天缺牙患者的基因突变位点,为此类疾病的诊断提供基因学参考。方法:通过临床先证者寻找非综合征型先天缺牙家系,根据各成员的临床表型和发病特点,绘制系谱图。在患者及其家属知情同意的情况下,抽取家系成员外周血、提取基因组DNA,运用候选基因筛查法检测与缺牙密切相关的PAX 9、AXIN 2、MSX 1基因片段。结果:此家系的单纯性先天缺牙临床表型符合常染色体显性遗传规律,患病者出现不同数量的缺牙并伴发锥形牙。对PAX 9基因测序后,在Paired Domain的上游109位碱基(1号内含子内)发现一个碱基差异位点G/T。对MSX 1基因片段测序后未发现突变。在AXIN 2的7号外显子内有同义突变的多态位点C/T。结论:PAX 9和AXIN 2基因片段中某些编码基因的改变与该家系缺牙存在相关性。