AZD8055抑制肝癌huh7细胞增殖和促细胞凋亡

目的探讨AZD8055对肝癌细胞增殖和克隆形成能力的影响及其分子机制。方法肝癌细胞系huh7随机分为对照组(DMSO)和加药组(AZD8055),MTT法检测huh7细胞增殖,平板克隆实验检测肝癌细胞克隆形成能力,Anexin V/FITC双染法检测细胞凋亡率,免疫印迹法检测AMPK蛋白表达和磷酸化水平。结果 AZD8055抑制肝癌细胞的增殖呈浓度和时间依赖性(P<0.05)。AZD8055处理导致肝癌细胞克隆数目减少以及诱导细胞发生凋亡(P<0.05)。AZD8055处理引起AMPK蛋白磷酸化水平上升,但对总蛋白表达水平影响不大。AMPK蛋白抑制剂Dorsomorphin通过抑制AMPK蛋白磷酸化水平而降低AZD8055对肝癌细胞的抑制作用。结论 AZD8055可以抑制肝癌细胞的增殖和克隆形成能力,并且主要通过调节AMPK蛋白的磷酸化水平实现其对增殖的抑制作用。

AZD8055对宫颈癌细胞增殖和糖酵解的抑制作用

目的探讨AZD8055对人宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡和糖酵解的影响,并探索其潜在分子机制。方法Hela细胞在10 nm AZD8055的作用下培养24、48或者72 h,MTT检测细胞增殖;Annexin-V/PI染色法检测细胞凋亡;糖酵解活性由乳酸脱氢酶(LDH)活性及乳酸生成量来确定;qRT-PCR和western blotting法检测mRNA和蛋白质表达水平。结果随着作用时间的延长,AZD8055能有效抑制Hela细胞的增殖和糖酵解,并诱导细胞发生凋亡;mTORC1底物p70S6K和mTORC2底物Akt的磷酸化水平显著下调,提示mTOR的激酶活性被抑制。结论 AZD8055能抑制人宫颈癌Hela细胞增殖并诱导其凋亡,Hela细胞中miR-143的表达水平与AZD8055的处理时间呈正相关。

抑制自噬可以增加mTOR抑制剂AZD8055引起的喉癌细胞株Hep-2的凋亡

目的探讨抑制自噬是否可以增加哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)抑制剂(AZD8055)引起的喉癌细胞株Hep-2的凋亡。方法选用人喉癌细胞株Hep-2细胞系,应用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测m TOR抑制剂AZD8055和(或)自噬抑制剂3-甲基嘌呤(3-MA)对Hep-2细胞活性的影响。Western印迹检测AZD8055和(或)3-MA对Hep-2细胞凋亡通路相关蛋白〔Cleaved多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP)、Cleaved Caspase-3、细胞色素C〕的作用。结果 AZD8055作用Hep-2细胞24 h后,细胞生存率显著下降,具有浓度依赖性。AZD8055浓度依赖性地增加Hep-2细胞凋亡相关蛋白Cleaved PARP、Cleaved Caspase-3及细胞色素C表达。当3-MA与AZD8055联用时,二者联用与单用AZD8055组相比,细胞活性显著降低,显著下调凋亡通路相关蛋白Cleaved PARP、Cleaved Caspase-3、细胞色素C表达。结论抑制自噬可以增加m TOR抑制剂AZD8055引起的喉癌细胞株Hep-2的凋亡。

mTOR抑制剂AZD8055的抗肝癌机制探讨

目的雷帕霉素靶蛋白(mTOR)抑制剂AZD8055抗肝癌活性及其作用机制。方法分别采用MTT法和流式细胞术测定AZD8055对HepG2肝癌细胞生长和细胞周期的影响;用TUNEL染色检测细胞凋亡;通过免疫印迹法检测信号通路中关键激酶下游靶蛋白磷酸化水平变化。结果 AZD8055对HepG2细胞有明显的生长抑制作用,且随着作用时间的延长,细胞增值率逐渐降低,细胞凋亡率逐渐增加;其生长抑制主要是阻滞G0/G1期。AZD8055下调蛋白激酶B(AKt)和核糖蛋白S6激酶(S6K)的磷酸化水平。结论 AZD8055对人肝癌细胞HepG2的生长具有显著的抑制作用。

AZD8055对胆管癌细胞自噬和凋亡的影响

目的:探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)双重抑制剂AZD8055对人胆管癌HuCCT1细胞自噬和凋亡的影响。方法:采用MTT法检测不同浓度的AZD8055对HuCCT1细胞活力的抑制作用;吖啶橙染色检测AZD8055处理胆管癌细胞后,细胞自噬小体形成情况;Western blot法观察细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和cleaved caspase-3以及自噬相关标志蛋白beclin 1、LC3和p62的表达;AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡。结果:AZD8055显著抑制胆管癌细胞的活力(P<0.05)。吖啶橙染色后,AZD8055用药组橙红色颗粒增多。Western blot实验显示,AZD8055处理后,与对照组相比自噬标志蛋白beclin 1表达上调,LC3-II/LC3-I比例上调,p62表达下调;cleaved caspase-3表达降低,促凋亡蛋白Bax表达降低,抑凋亡蛋白Bcl-2表达升高(P<0.05)。流式细胞术显示,AZD8055可抑制细胞凋亡。结论:AZD8055可抑制胆管癌细胞的生长,其机制可能与诱导细胞自噬相关。

AZD8055抑制胆管癌细胞HuCCT1的迁移及EMT进程的机制研究

目的探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)双重抑制剂AZD8055在抑制人胆管癌细胞HuCCT1的迁移及EMT进程中的作用及分子机制。方法MTT法与平板克隆形成实验检测AZD8055对胆管癌细胞增殖的影响;划痕愈合实验和Transwell小室迁移实验检测AZD8055对HuCCT1细胞迁移能力的影响;Western blot法检测EMT标志相关蛋白、Akt/mTOR信号通路蛋白及DEK蛋白的表达;利用STITCH、GeneMANIA数据库,分析AZD8055、DEK、Akt信号通路相互作用关系;在DEK基因沉默后,检测胆管癌细胞增殖活力、迁移能力及Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达水平的变化。结果AZD8055可抑制胆管癌细胞的增殖及迁移能力,同时抑制Akt/mTOR信号通路相关蛋白、DEK蛋白表达及EMT的进程;沉默DEK基因可明显抑制胆管癌细胞增殖及迁移能力,并降低Akt、S6、4EBP1蛋白的磷酸化水平。结论AZD8055抑制HuCCT1细胞的迁移及EMT进程,其机制与下调DEK,抑制Akt/mTOR信号通路有关。

mTOR高选择性抑制剂AZD8055对乳腺癌多西紫杉醇耐药细胞株化疗敏感度的作用

目的探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)高选择性抑制剂AZD8055对乳腺癌多西紫杉醇耐药细胞株化疗敏感度的作用。方法体外培养MCF-7细胞株、MCF-7/Doc细胞株。噻唑蓝比色法检测AZD8055作用后MCF-7/Doc细胞对多西紫杉醇的半数抑制浓度(IC_(50)),实验分2组:MCF-7/Doc组和MCF-7/Doc+AZD8055组。实时荧光定量PCR和蛋白印迹法检测AZD8055作用后,细胞MDR1基因和P-gp蛋白的表达,实验分4组:MCF-7组、MCF-7+AZD8055组、MCF-7/Doc组、MCF-7/Doc+AZD8055组。裸鼠体内荷瘤实验检测AZD8055的体内抑瘤率,实验分3组:空白对照组、阴性对照组和AZD8055组。为排除MCF-7和MCF-7/Doc细胞特异性对实验结果的影响,研究采用乳腺癌MDA-MB-231和MDA-MB-231/Doc细胞株重复了上述实验。结果噻唑蓝比色法检测显示,MCF-7/Doc+AZD8055组细胞对多西紫杉醇的IC_(50)为5. 1±0. 6μmol/L,明显低于MCF-7/Doc组(P <0. 05),AZD8055对多西紫杉醇的耐药逆转倍速为5. 4。实时荧光定量PCR检测显示,MCF-7/Doc组细胞MDR1基因表达量为1. 84±0. 35,明显高于MCF-7组(P <0. 05);而MCF-7/Doc+AZD8055组细胞MDR1基因表达量为1. 21±0. 29,明显低于MCF-7/Doc组(P <0. 05)。蛋白印迹法检测显示,MCF-7/Doc组细胞P-gp蛋白表达量分别为0. 93±0. 15,明显高于MCF-7组(P <0. 05);而MCF-7/Doc+AZD8055组细胞P-gp蛋白表达量0. 54±0. 10,明显低于MCF-7/Doc组(P <0. 05)。AZD8055组肿瘤生长速度明显低于空白对照组和阴性对照组(P <0. 05),AZD8055对移植瘤具有显著的抑制作用,抑瘤率为48. 95%,差异有统计学意义(P <0. 05)。MDA-MB-231和MDA-MB-231/Doc细胞株重复实验得到了相似结果。结论 m TOR高选择性抑制剂AZD8055可显著提高乳腺癌细胞株对多西紫杉醇的化疗敏感度,其作用机制可能与抑制MDR1和P-gp表达有关。

AZD8055对耐照射胰腺癌细胞逆转作用的研究

目的：将 AZD8055作用于耐照射胰腺癌细胞，研究其对耐照射胰腺癌细胞的逆转作用。方法通过梯度照射方法培养耐照射 Panc-1胰腺癌细胞株，检测其亲本细胞株及耐照射细胞株的哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR 蛋白）和 S6K1蛋白的表达情况。经过 AZD8055作用，再次行 X 线照射检测其被杀伤情况。结果成功建立耐照射胰腺癌细胞株，其 mTOR 蛋白和 S6K1蛋白表达均较亲本细胞株增强，经过 AZD8055处理的细胞株，其mTOR 蛋白和 S6K1蛋白表达降低，表现出对 X 线照射敏感性恢复。细胞凋亡增加，其细胞凋亡率与 mTOR 蛋白和S6K1蛋白表达呈现负相关，与 AZD8055作用时间呈正相关，而 mTOR 蛋白和 S6K1蛋白表达呈正相关。结论 AZD8055处理可逆转耐照射胰腺癌细胞的耐照射性，与 AZD8055抑制 mTOR 蛋白表达相关联，考虑作为mTOR 下游基因，S6K1与其协同参与胰腺癌照射抵抗的发生。