AZIN1慢病毒的制备及EC109稳定感染细胞株的建立

目的:制备野生型和编辑型AZIN1的慢病毒并建立稳定感染的食管癌EC109细胞株。方法:用RT-PCR法从人食管鳞状细胞癌组织中扩增出AZIN1基因的c DNA序列,选取测序结果中目标位点的A峰与G峰均高且与NCBI公布的基因编码序列一致的PCR产物,克隆至慢病毒表达载体p Lenti6/V5-D-TOPO,构建野生型和编辑型AZIN1的重组慢病毒表达载体,经酶切和测序鉴定后,经293FT细胞包装,制备相应的慢病毒,然后感染EC109细胞株,行RT-PCR、测序和Western blot鉴定稳定感染的EC109细胞株。结果:双酶切重组慢病毒表达载体后产生了1 347 bp和6 915 bp的片段,经测序证实1 347 bp片段为正确的AZIN1基因编码序列;RT-PCR、测序和Western blot结果证实成功建立了稳定感染的EC109细胞株。结论:成功制备了野生型和编辑型AZIN1的慢病毒并建立了稳定感染的EC109细胞株。

ADAR1和AZIN1在胃癌患者癌组织与癌旁组织中的表达及临床意义

目的探究ADAR1和AZIN1在胃癌患者癌组织与癌旁组织中的表达及其临床意义研究。方法选取2020年1月至2021年1月在济宁医学院附属医院消化内科和肿瘤科治疗的116例I~III期胃癌患者为研究对象。所有患者均经手术切除治疗,并经组织病理学分析确诊。分析患者胃癌组织中ADAR1、AZIN1表达与临床病理特征的关系。通过qPCR分析胃癌及癌旁组织中ADAR1和AZIN1 mRNA表达。通过免疫组化分析胃癌及癌旁组织中ADAR1和AZIN1表达。分析ADAR1和AZIN1与患者术后3年生存率的关系。通过多变量Logistic回归分析影响胃癌患者预后不良的影响因素。使用ROC曲线分析ADAR1和AZIN1表达水平在胃癌患者预后中的诊断效能。结果ADAR1和AZIN1在未分化胃癌组织、有淋巴结转移和较高TNM分期的患者中表达水平较高,表明这两个基因的高表达与胃癌的恶性程度密切相关。qPCR分析显示,胃癌组织和癌旁组织中ADAR1 mRNA表达分别为1.96±0.18、1.12±0.03,胃癌组织和癌旁组织中AZIN1 mRNA表达分别为1.85±0.16、1.04±0.02,胃癌组织较癌旁组织升高(P<0.05)。ADAR1和AZIN1阳性患者与更低的3年生存率相关(P<0.05)。预后不良多因素Logistic回归分析中发现,胃癌低分化程度、浸润程度加深、淋巴结转移、较高的TNM分期、ADAR1阳性表达及AZIN1阳性表达均显著增加了胃癌不良预后的风险(P<0.05)。联合检测的敏感性和AUC值都高于ADAR1、AZIN1单独检测(P<0.05)。结论ADAR1和AZIN1在胃癌组织中的表达显著高于癌旁组织,特别是在未分化的肿瘤、有淋巴结转移和高TNM分期的患者中。这两个基因的高表达与胃癌患者的不良预后密切相关,联合检测显示出更高的诊断效能。ADAR1和AZIN1作为胃癌发展和预后的关键生物标志物,为胃癌治疗提供了新的靶点。

腐胺对小鼠成纤维细胞中Atp8a1基因表达的影响

目的:研究腐胺对小鼠成纤维细胞中Atp8a1基因表达的影响,初步探讨其作用机制。方法:用基因芯片和Real-timePCR检测正常小鼠和Azin1(Antizyme inhibitor 1)基因敲除小鼠肝脏组织中Atp8a1基因的在mRNA水平上的表达;构建Atp8a1基因启动子的虫荧光素酶报告质粒pGL3-Atp8a1-P;将重组质粒转染NTH3T3成纤维细胞中,分别在含有4μg/ml腐胺和不含腐胺的条件下,用双荧光素酶检测系统检测虫荧光素酶活性。结果:在含有腐胺的培养条件下,转染Atp8a1基因启动子虫荧光素酶报告质粒的细胞虫荧光素酶的活性明显改变。结论:腐胺能够抑制Atp8a1基因启动子活性而降低其在NIH3T3成纤维细胞中的表达。

精胺对Nup98基因的调控研究

利用基因芯片比较鸟氨酸脱羧酶抑制子基因敲除小鼠和正常小鼠肝组织的表达差异;高效液相色谱法测定鸟氨酸脱羧酶抑制子基因敲除小鼠和正常小鼠肝组织中的精胺含量;构建Nup98的启动子-虫荧光素酶报告基因质粒;脂质体Lipofectamine 2000TM转染小鼠细胞(NIH3T3),在含有精胺或正常培养条件下,测定虫荧光素酶活性。结果显示,Nup98基因在鸟氨酸脱羧酶抑制子基因敲除小鼠肝组织表达增强;鸟氨酸脱羧酶抑制子基因敲除小鼠肝组织中,精胺含量增高;成功构建Nup98的启动子-虫荧光素酶报告基因质粒pGL3-Nup98-P;精胺能在体外培养的条件下,增强虫荧光素酶的活性。这些结果证明精胺能激活Nup98基因的启动子活性,增强其在NIH3T3细胞中的表达。