Zeste基因增强子同源物2抑制剂减轻氧糖剥夺/再灌注诱导的神经元氧化应激和铁死亡

目的探讨Zeste基因增强子同源物2(EZH2)抑制剂GSK126在神经元缺血-再灌注损伤中的作用及机制。方法采用海马神经元HT22细胞制备氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)模型。细胞分为正常对照组(Control组)、OGD/R模型组(OGD/R组)和OGD/R模型+低、中、高浓度EZH2抑制剂组(OGD/R+GSK1260.5、1、5μmol/L组)。采用CCK-8法、流式细胞术检测各组HT22细胞损伤,相应试剂盒检测细胞氧化应激指标活性氧(ROS)水平、丙二醛(MDA)含量和谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽(GSH/GSSG)比值。通过荧光探针C11 BODIPY 581/591和FerroOrange检测细胞内铁死亡指标脂质过氧化物(Lipid ROS)和Fe^(2+)含量。实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白免疫印记法(Western blot)实验检测细胞EZH2、NRF2、HO-1、SLC7A11和GPX4的mRNA和蛋白表达。结果与Control组比较,OGD/R组HT22细胞活力降低,细胞死亡率升高,细胞内ROS水平升高,MDA含量增加,GSH/GSSG比值减少,Lipid ROS、Fe^(2+)含量增加,EZH2的mRNA和蛋白表达升高,NRF2、HO-1、SLC7A11和GPX4的mRNA和蛋白表达均降低(P值均<0.05)。与OGD/R组比较,OGD/R+GSK1260.5、1、5μmol/L组HT22细胞活力均升高,细胞死亡率均下降,细胞内ROS水平均下降,MDA含量均减少,GSH/GSSG比值均增加,Lipid ROS、Fe^(2+)含量均减少,EZH2的mRNA和蛋白表达均降低,NRF2、HO-1、SLC7A11和GPX4的mRNA和蛋白表达均升高(P值均<0.05)。结论EZH2抑制剂GSK126可减轻OGD/R诱导的神经元细胞损伤,其机制可能与NRF2/HO-1通路抑制氧化应激和SLC7A11/GPX4通路抑制铁死亡有关。

DDR1抑制剂与IGF-1R抑制剂联合应用及机制

【目的】研究盘状结构域受体(DDR1)的抑制剂3-(2-(吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙炔基)苯甲酰胺7RH对鼻咽癌细胞的体外抗肿瘤作用及相关机制,为该药用于鼻咽癌的临床治疗提供实验依据。【方法】采用MTT法绘制细胞生长曲线,计算7RH对鼻咽癌细胞的半数抑制浓度(IC50值);Western Blot检测7RH引起鼻咽癌细胞中信号通路的改变,并检测Si RNA瞬时转染方法干扰DDR1后phospho-IGF-1R的改变。【结果】7RH在体外明显抑制鼻咽癌细胞的增殖并且呈浓度依赖性;7RH作用鼻咽癌细胞株CNE2和HK1的IC50值分别为2.60μmol/L与6.33μmol/L;应用7RH处理或者使用SiRNA瞬时转染方法干扰DDR1后,CNE2的IGF-1R的磷酸化水平明显增强;联用DDR1抑制剂和IGF-IR抑制剂能更有效地抑制肿瘤细胞的增殖,两者联用能更显著地抑制AKT活性。【结论】DDR1的抑制剂3-(2-(吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙炔基)苯甲酰胺7RH能在体外有效地抑制鼻咽癌细胞的增殖。联用7RH和IGF-IR抑制剂能通过抑制PI3K/AKT通路更有效抑制鼻咽癌细胞的增殖。

免疫抑制剂对原发性肾病综合征患儿白介素2、血清可溶性白介素2受体的作用研究

原发性肾病综合征(INS)的发生、发展与细胞免疫密切相关，许多研究结果认为T淋巴细胞功 能紊乱与淋巴因子的异常，在NS发病中起重要作用，采用免疫抑制剂治疗，临床取得较好的 效果。但免疫抑制剂对白介素2(IL-2)及血清可溶性白介素2受体(SIL-2R)的影响变化报道 甚少 。我们通过INS患儿血清IL-2、SIL-2R在不同免疫抑制剂作用下的变化，探讨IL-2及SIL -2R在INS发病中的作用，及免疫抑制剂的应用价值。资 料 和 方 法 一、 对象 观察组20例，男14例，女6例，平均年龄7岁2个月，全部病例诊断 均符合全国小儿肾脏病协作组拟定的诊断标准，为初发活动期，均未用激素及其它免疫抑制 剂。对照组为健康儿童15例，男10例，女5例，平均年龄8岁4个月。 二、 方法 3H-Tdr掺入法测定IL-2浓度［1］，双抗体夹心ELISA法 测定SIL-2R的浓度［2］。免疫抑制剂：环磷酰胺(CTX)、长春新碱(VCR)、氢化考的 松(H)。同一患儿标本分为加免疫抑制剂组及对照组，分别检测IL-2及SIL-2R浓度。

新型EGFR/IGF-1R双靶点抑制剂的设计、合成与抗肿瘤活性研究

目的发现结构新颖的表皮生长因子受体/胰岛素样生长因子-1受体(epidermal growth factor receptor/insulin-like growth factor 1 receptor,EGFR/IGF-1R)双靶点抑制剂。方法以IGF-1R抑制剂BMS-754807的结构为基础,参照前期合成的EGFR酪氨酸激酶抑制剂ET-1的结构和激酶结合模式,设计、合成一类4位连有2-氨基苯并咪唑片段的喹唑啉类化合物,通过氨基咪唑片段与EGFR和IGF-1R铰链区的关键氨基酸残基形成氢键结合,从而获得新型EGFR/IGF-1R双靶点抑制剂。结果合成了10个4-(苯并咪唑-2-氨基)喹唑啉类化合物,通过^(1)H-NMR和ESI-HRMS表征了目标化合物的结构;激酶活性实验表明目标化合物对EGFR和IGF-1R均具有一定的抑制活性;分子模拟对接结果表明目标化合物结构中的氨基咪唑片段是其产生EGFR/IGF-1R双靶点抑制活性的关键药效团。结论合成的目标化合物为EGFR/IGF-1R双靶点抑制剂,后续通过结构优化有望发现新型抗肿瘤药物。

GLP-1受体激动剂与DPP-4抑制剂在2型糖尿病患者中的应用比较

本文旨在观察2型糖尿病患者(英文简称T2DM),治疗中采取GLP-1受体激动剂、DPP-4抑制剂,对患者血脂、血糖等情况产生的影响,助力T2DM患者病情改善。方法:202例(2型糖尿病患者),研究对象,患者收治时间,开始于2019年4月10日/结束于2021年8月30日。组别情况(随机抽签法):GLP-1组,纳入101例,治疗方法GLP-1受体激动剂;DPP-4组,纳入101例,治疗方法DPP-4抑制剂。观察指标:血糖水平[依次包括餐后2小时血糖、糖化血红蛋白、空腹血糖(英文简称:依次为2hPBG、HbAlc、FBG)、血脂指标[依次包括总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇,依次为(TC、TG、LDL-C、HDL-C)]、经济性(治疗费用)、不良反应情况。结果 (1)血糖水平。治疗前,GLP-1组(VS)DPP-4组,2hPBG水平比对、HbAlc水平比对、FBG水平比对,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,GLP-1组(VS)DPP-4组,2hPBG水平比对、HbAlc水平比对、FBG水平比对,前者<后者,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)血脂指标。治疗前,GLP-1组(VS)DPP-4组,TC比对、TG比对、LDL-C比对、HDL-C比对,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,GLP-1组(VS)DPP-4组,TC比对、TG比对、LDL-C比对、HDL-C比对,除HDL-C外,前者<后者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 T2DM治疗,GLP-1受体激动剂治疗后,患者血糖、血脂控制上效果较为理想,血糖控制上可以根据情况适当新选择。

利用噬菌体肽库筛选IL-2Rα模拟表位肽的研究

目的筛选IL-2Rα模拟表位肽,为研制高效、特异性强的小分子肽类免疫抑制剂奠定基础。方法应用离子交换层析法从小鼠腹水中纯化抗人IL-2Rα单克隆抗体5G1,细胞ELISA方法检测其特异性。用5G1单抗筛选噬菌体环七肽库,并对噬菌体克隆进行抗原性鉴定。根据阳性克隆的DNA序列合成环肽并鉴定其生物活性。结果经5轮筛选、鉴定,获得5个与5G1有较强结合特性的噬菌体阳性克隆。DNA测序并推导氨基酸序列,得到Lys-X-{X}-Lys-Gly保守序列。依此序列合成环七肽CP,小鼠淋巴细胞增殖试验证实其有免疫抑制活性。结论环肽CP为IL-2Rα模拟表位肽,可作为IL-2Rα的拮抗剂发挥免疫抑制效应。

(R)-2-羟基-4-苯基丁酸乙酯的合成

综述了血管紧张素转化酶抑制剂类治疗高血压和充血性心力衰竭药物的关键中间体 ( R) -2 -羟基 -4 -苯基丁酸乙酯的合成方法。参考文献 2

不对称催化合成(R)-2-羟基-4-苯基丁酸乙酯

用 Pt-Cinchona 生物碱体系催化加氢合成(R)-2-羟基-4-苯基丁酸乙酯。进行了催化剂的制备和比较研究,并考察了修饰剂用量、2-氧代-4-苯基丁酸乙酯的初始浓度、反应氢压和温度对转化率和(R)-2-羟基-4-苯基丁酸乙酯得率的影响,得到了适宜的反应条件,在此条件下产物中(R)-2-羟基-4-苯基丁酸乙酯得率可达70%以上。实验结果表明,本研究中不对称加氢速率与光学收率呈良好线性关系,对研究不对称合成反应的规律有一定的意义。

舒莱联合免疫抑制剂对移植肾功能恢复的临床分析

目的:探讨白细胞介素-2受体(IL-2R)单克隆抗体(商品名舒莱)联合其他免疫抑制剂对移植肾功能恢复的影响。方法:44例肾移植受者随机分成舒莱诱导治疗组(22例)和对照组(22例),两组患者均采用三联免疫抑制剂骁悉(MMF)+环孢素A(CsA)或普乐可复(FK506)+醋酸泼尼松龙治疗。结果:肾移植术后患者移植肾功能延迟恢复发生率两组无明显区别(P>0.05),诱导治疗组急性排斥反应发生率(4.5%)明显低于对照组(27.3%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:舒莱的临床应用有效降低了急性排斥反应发生率,但对移植肾功能延迟恢复疗效不显著;舒莱+MMF+FK506的联合应用对移植肾功能恢复有很好疗效。

(2R,4R)-4-甲基-2-哌啶甲酸乙酯的合成工艺改进

目的优化(2R,4R)-4-甲基-2-哌啶甲酸乙酯的合成工艺。方法以S-(-)-α-甲基苄胺为原料,与乙醛酸乙酯反应得到[(S)-1-苯乙基亚胺基]乙酸乙酯,与异戊二烯进行环合后,再经不对称氢化和脱保护反应制得(2R,4R)-4-甲基-2-哌啶甲酸乙酯。结果总收率从17.0%提高至47.6%。结论本工艺可有效地降低生产成本。

利用噬菌体肽库确定IL-2Rα表位序列

目的：确定ＩＬ－2Ｒα表位，为研制高效特异性强的小分子肽类免疫抑制剂奠定基础。方法：用抗ＩＬ－２Ｒα单克隆抗体５Ｇ１对噬菌体六肽库进行筛选，选择出与５Ｇ１结合较强的克隆，经ＤＮＡ序列分析，获得保守序列。对合保守序列的克隆进行生物学活性鉴定。结果：选择出３１个与５Ｇ１结合较强的克隆。获得Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｐｈｅ和Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｒｇ两种保守序列。生物学活性鉴定表明：含Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｒｇ序列克隆较含Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｐｈｅ被抑制效果好。结论：Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｒｇ是ＩＬ－２Ｒα表位的关键序列。以此表位序列合成的小分子肽可作为ＩＬ－２Ｒα的拮抗剂而成为免疫抑制剂。

(2S,3R)-2-羟基-3-氨基-4-苯基丁酸的合成方法进展

(2S,3R)-2羟基-3-氨基-4-苯基丁酸(AHPBA)是制备Bestatin、Phebestin和Probestin等氨肽酶N(Aminopeptide N)抑制剂的关键中间体。本文从氨基酸法(D-苯丙氨酸、L-天门冬氨酸、苹果酸二酯)、有机金属催化法(双功能铝配合物)、酶催化法(脂肪酶和全细胞酶)以及其它方法对此中间体的合成方法及路线进行综述和分析。经比较,有机催化法、酶法以及苯乙酮法因其具有经济有利、条件温和或路线简单特点,具有潜在的工业化应用前景。同时,未来人们对AHPBA的合成开发将集中在对已有工艺路线的改进与优化。

抗HIV蛋白酶抑制剂安普那韦的合成

建立了一条合成抗HIV蛋白酶抑制剂Amprenavir(安普那韦)的路线。以(2S,3R)-N-苄氧羰基-3-氨基-1-氯-4-苯基-2-丁醇为起始原料,经过环氧化、开环取代、胺的酰化、催化氢解还原、胺解等五步反应生成最终产物安普那韦。主要特点在于采用催化氢解还原法,将脱除苄氧羰基保护基和硝基还原成氨基一步完成,使工艺更简单。

IDH2/R140Q突变体的天然产物抑制剂的虚拟筛选

近期研究发现,IDH2突变体R140Q与多种肿瘤的发生发展密切相关,是治疗白血病等相关疾病的有效靶点,别构调节抑制剂能有效抑制IDH2/R140Q的活性。因此,为了寻找IDH2/R140Q的新型别构调节抑制剂,该研究基于分子对接方法利用Schrodinger 2015-3软件(Glide模块)的逐级筛选模式对天然产物及其衍生物数据库(约1.5万个分子)进行虚拟筛选。用AGI-6780与IDH2/R140Q结合的晶体结构(PDB ID:4JA8)定义活性位点。然后利用Amber 14进行分子动力学模拟研究抑制剂与靶点结合的稳定性。经过3轮筛选,发现5个具有潜在抑制活性的天然产物衍生物,从结构上可归为生物碱类、多酚类和皂苷类。结合模式分析发现,抑制剂与IDH2/R140Q主要以氢键作用和疏水作用相结合,其中形成氢键作用的关键氨基酸为Gln316和Asp312,形成疏水作用的氨基酸主要有Val315、Ile319和Val297等。经过80 ns的分子动力学模拟发现,与初始结构相比,分子动力学模拟之后的抑制剂与靶蛋白的结合模式几乎没变,说明筛选得到的抑制剂可与靶蛋白稳定结合。计算机辅助虚拟筛选为寻找活性好、毒副作用低的IDH2/R140Q天然产物或其衍生物抑制剂提供了参考,精确度依次提高的多级虚拟筛选模式可以提高筛选的准确率,有效减少假阳性的产生。

IL-2受体α单克隆抗体的研究进展

白介素-2(IL-2)和白介素-2受体(IL-2R)的相互作用在T细胞活化、增殖中起关键作用。IL-2Rα单克隆抗体能选择性地产生免疫抑制作用。随着单克隆抗体技术的发展,IL-2Rα单克隆抗体由抗-Tac发展为嵌合体和人源化抗体。研究证明,IL-2Rα单克隆抗体Daclizumab和Basil-iximab有显著降低器官移植急性排斥反应发生率、毒副作用小的优点。

R406对人RASFs炎性因子分泌及生物学功能调节、关节炎小鼠关节炎症缓解作用观察

目的探讨R406(free base)对人类风湿关节炎关节滑膜成纤维细胞(RASFs)炎性因子分泌的抑制及生物学功能(侵袭、迁移和凋亡)的调节作用,观察R406对关节炎小鼠关节炎症的缓解作用。方法取3~7代生长的RASFs,分为实验组、阴性对照组和阳性对照组。实验组分别用1、10、50、100 ng/mL R406和10 ng/mL IL-1β干预,阴性对照组加入DMSO,阳性对照组加入DMSO和10 ng/mL IL-1β干预。干预24 h,采用qRT-PCR法检测各组炎性因子IL-6、IL-8、CCL2 mRNA。选择最适浓度(50 ng/mL)的R406作用于RASFs(实验组)不同时间(6、12、24、48 h),阴性对照组及阳性对照组处理方法同上,采用qRT-PCR检测各组IL-6、IL-8、CCL2 mRNA,ELISA法检测各组IL-6、IL-8、CCL2蛋白,Trans Well检测各组RASFs的侵袭能力;划痕法检测细胞迁移能力;流式细胞术检测细胞凋亡率。建立Ⅱ型胶原诱导型关节炎(CIA)模型鼠,将18只8周龄的DBA 1/J小鼠平均分为实验组、阴性对照组和阳性对照组。实验组诱发CIA后腹腔注射R406,200 mg/kg,每两天注射1次;阴性对照组不诱发CIA;阳性对照组诱发CIA后腹腔注射等量DMSO,每两天注射1次。R406治疗30 d后,ELISA法检测各组小鼠血清中炎性因子IL-6、IL-8、IL-1α、COMP。结果与阳性对照组比较,实验组中不同剂量R406作用后RASFs中炎性因子IL-6、IL-8、CCL2 mRNA表达被抑制,且在50 ng/mL时抑制效果最为显著(P均<0.01)。与阳性对照组比较,实验组中50 ng/mL R406作用于RASFs不同时间,细胞中炎性因子IL-6、IL-8、CCL2蛋白的表达均被抑制,且在24 h抑制效果最显著(P均<0.01);与阳性对照组比较,实验组RASFs上清液中炎性因子IL-6、IL-8、CCL2水平降低(P均<0.01)。与阳性对照组比较,实验组RASFs侵袭和迁移数均降低,凋亡率增加(P均<0.05)。与阳性对照组比较,实验组小鼠血清中炎性因子IL-6、IL-8、IL-1α、COMP水平降低(P均<0.01)。结论R406可以抑制RASFs中炎性因子的分泌,调节RASFs侵袭、迁移、凋亡能力,对CIA模型鼠关节炎症具有抑制作用。

温肾醒脾化浊方对慢性肾功能衰竭模型肾损伤干预机制的研究

目的探索温肾醒脾化浊方治疗慢性肾衰竭的效应机制,为温肾醒脾化浊法临床应用于治疗慢性肾炎提供科学基础。方法通过阿霉素(6 mg/kg)尾静脉注射构建肾功能衰竭模型大鼠,随机分为正常组、模型组、温肾醒脾化浊方低、中、高剂量组(1.49 g/kg、2.98 g/kg和5.95 g/kg),灌胃给药27 d后,考马斯亮蓝法检测24 h蛋白尿含量;全自动生化分析仪测定各组大鼠血清肾功能肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)和尿酸(UA)含量;苏木精-伊红(H&E)染色观察大鼠肾脏病理损伤程度;荧光定量PCR法检测肾组织MMP-9基因、金属蛋白酶抑制剂(TIMP-1)、Col4a2R、转化生长因子-β1(TGF-β1)、纤维连接蛋白1(Fn1)mRNA的表达水平。结果温肾醒脾化浊方显著减少24 h蛋白尿和肾体质量的异常增加,有效降低慢性肾功能衰竭大鼠尿素氮、肌酐、尿酸水平(P<0.05或P<0.01),改善肾组织的炎性细胞浸润、纤维化增生以及肾小球变形萎缩等病变。温肾醒脾化浊方干预显著下调TIMP-1、TGF-β1、Col4a2R和Fn1 mRNA表达,上调MMP-9转录表达(P<0.05),调节MMP-9/TIMP-1失衡(P<0.05)。结论温肾醒脾化浊方可能通过调控MMP9/TIMP-1失衡,下调TGF-β1及Fn1的表达,减少细胞外基质的积聚,从而保护肾功能和延缓肾纤维化。

庆大霉素(瑞贝克)抗幽门螺杆菌作用的实验研究

现已公认,幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,简称Hp)与上消化道疾病的关系密切,对其根除主要采用质子泵抑制剂(PPI)或H2受体拮抗剂(H2R)加二种抗生素的三联疗法或再加铋剂的四联疗法.在临床上根除Hp效果较好的抗菌药物主要有克拉霉素、阿莫西林、甲硝唑、呋喃唑酮、四环素和庆大霉素等.目前,因Hp对某些抗生素(如甲硝唑、克拉霉素等)出现耐药性致使其根除率有下降趋势,对根除失败者作Hp药敏试验有一定的实用价值.为此我们对这些常用抗生素用不同临床分离株进行了药敏试验并对庆大霉素(瑞贝克,庆大霉素漂浮缓释片的主要有效成份)进行评价.