玉米Ac双因子转座标签系统的构建及其转化烟草后代的遗传分析

用使质粒pKU3所携带的玉米Ac因子的5'末端和中间编码转座酶的基因片段分别发生缺失的方法构建成质粒pKU3（△B）和pKU3（△H）。质粒所携带缺失的Ac因子单独存在时都无自主转座能力，但当Ac（△H）和Ac（△B）共存于一个细胞时，由于Ac（△B）产生转座酶的互补作用促使Ac（△H）恢复转座能力，而当Ac（△B）和Ac（△H）因子被分离后即获得Ac（△H）因子的稳定插入突变株，它可克服因突变不稳定而给用转座因子标签法分离基因所造成的困难。将双因子系统导入烟草原生质体并获得再生植株，从而选得卡那霉素抗性植株，显示Ac（△H）因子已经从原质粒上的NPTⅡ前导顺序中切离。Sortharnblot和PCR分析表明：Ac（△H）和Ac（△B）因子已经整合在转化烟草的基因组并能遗传至F1和F2代植株中；有些植株后代中已检测不到Ac（△B）因子的存在，说明它们的Ac（△B）因子已与Ac（△H）因子相分离；各转化植株中Ac（△H）因子在基因组中的插入拷贝数从一个到几个不等；初步显示Ac（△H）因子多数插入或转座在基因组的结构基因中。

Ac/Ds(GUS)结构介导的水稻启动子捕获系统的建立

构建了基于Activator/Dissociation(β-glucuronidase)[简称Ac/Ds(GUS)]结构的捕获质粒p13B,用于分离水稻基因启动子。以此质粒用农杆菌介导的方法转化粳稻品种中花11的胚性愈伤组织,对获得的18个独立转化株的T2代植株进行了抗除草剂筛选,从141个抗除草剂转基因植株中用PCR方法检测到其中37株是Ds因子发生了转座的植株,而且这种转座到新位置上的Ds因子是遗传的。初步观察到其中5株的GUS染色呈阳性。