流体剪切促进人胚胎干细胞的启动

目的人胚胎干细胞(human embryonic stem cells,hESCs)具有无限增殖、自我更新和多向分化的特性,因此在组织器官移植、再生医学和药物研发等方面均具有重要作用。除生物化学因素对hESCs的调控外,生物力学因素也能通过调节力学敏感蛋白、激活胞内信号通路、从而影响hESCs干性或分化等生物学特性。然而,流体剪切作用下hESCs的响应及其分子机制尚不十分清楚。方法基于平行平板流动腔装置对hESCs施加模拟生理参数的流体剪切力,研究其对细胞形态、凋亡、干性维持等的影响。基于前期力学组学的功能富集分析筛选特定力学敏感蛋白,并采用蛋白质免疫印迹等技术检测流体剪切作用下丝切蛋白2(Cofilin2)在胞质、胞核内的分布与总量变化,以及胞内总组蛋白(H2B)与乙酰化组蛋白(AcH2B)的变化特征。结果施加流体剪切后,细胞存活和干性维持能力与静止培养条件相比没有显著差异,形态学上细胞核铺展面积增加且集落背向来流方向的伪足收起;在分子层面,流体剪切作用下AcH2B与H2B的相对表达量均升高,全细胞及细胞质内Cofilin2的表达量升高,细胞核内Cofilin2的表达量不发生改变。结论流体剪切通过增加胞内骨架蛋白Cofilin2的表达增加细胞核的铺展面积,导致AcH2B表达增加,促使hESCs处于更易于接受诱导因子及转录因子而发生分化的启动状态。

朝医三神散改善血管性痴呆模型大鼠认知功能障碍的机制研究

目的探讨朝医三神散对血管性痴呆模型大鼠认知功能障碍的作用机制。方法雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、朝医三神散高、低剂量组和西药盐酸多奈哌齐组,除假手术组外均采用“两血管阻断+硝普钠降压法”建立血管性痴呆(VD)模型。分别给药4周后,通过Morris水迷宫测试大鼠的学习记忆能力,HE染色法观察大鼠海马病理形态变化,用ELISA法检测大鼠血清中的AchE,Bax,Bcl-2的含量和炎性因子TNF-α、IL-6、IL-1β的分泌水平,Western blot法检测大鼠脑组织中TLR4的蛋白表达量、检测NF-κB信号通路关键蛋白NF-κBp65的表达水平。结果朝医三神散高剂量组在第3天开始明显比西药组上台潜伏期缩短;HE染色结果发现朝医三神散的高、低剂量组与模型组相比,细胞数量增多,细胞紧密结构完整;ELISA结果表明,朝医三神散高、低剂量组与模型组相比Bcl-2的含量则显著升高;West-ern blot法显示,朝医三神散可抑制VD大鼠脑组织TLR4及NF-κB p65的过度表达。结论朝医三神散可以提高痴呆模型大鼠的学习记忆能力,降低AchE、Bax表达含量,提高Bcl-2的表达含量,从而抑制神经细胞凋亡,通过调控TLR4/NF-κB信号转导通路抑制VD大鼠血清中TNF-α、IL-6和IL-1β的分泌,发挥其抗炎作用,起到提高血管性痴呆大鼠认知能力的作用。