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狂犬病病毒核蛋白在Bac-To-Bac/AcMNPV杆状病毒系统的表达 被引量:6
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作者 尹伟 徐洁萍 +2 位作者 张金阳 颜焰 周继勇 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期86-89,115,共5页
为真核表达狂犬病病毒的核蛋白,本研究通过RT-PCR克隆狂犬病病毒ERA株核蛋白基因,将其克隆于杆状病毒转移载体pFastBacHTB中,构建重组质粒pFastBacHTB-NP并将其转化DH10Bac细胞,得到重组穿梭质粒reBacmid-NP;通过转染昆虫细胞sf9包装重... 为真核表达狂犬病病毒的核蛋白,本研究通过RT-PCR克隆狂犬病病毒ERA株核蛋白基因,将其克隆于杆状病毒转移载体pFastBacHTB中,构建重组质粒pFastBacHTB-NP并将其转化DH10Bac细胞,得到重组穿梭质粒reBacmid-NP;通过转染昆虫细胞sf9包装重组杆状病毒。SDS-PAGE、western blot和间接免疫荧光对表达的蛋白进行鉴定和反应原性分析。分别以重组杆状病毒表达的核蛋白、原核表达核蛋白为包被抗原进行ELISA检测。结果表明,在昆虫细胞中表达的狂犬病病毒重组核蛋白能与鼠抗RV核蛋白单克隆抗体和RV阳性血清特异性结合,其相对分子量约为50.5ku。以重组杆状病毒表达的核蛋白为抗原建立的rNP-ELISA的敏感性、特异性、符合率分别为86.36%,89.83%,90.00%,优于大肠杆菌表达的RV核蛋白。说明杆状病毒系统表达的核蛋白是建立RV核蛋白ELISA抗体检测方法的理想抗原。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 核蛋白基因 Bac—To—Bac/acmnpv杆状病毒表达系统.
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基因重组核型多角体病毒AcMNPV对东方粘虫的毒力作用 被引量:2
2
作者 秦利 张涛 +3 位作者 国见裕久 仲井まどか 刘涛 樊虹 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 2002年第3期191-194,共4页
采用小滴饮下法 ,研究了基因重组核型多角体病毒AcMNPVAaIT和野生型核型多角体病毒AcMNPV -C6对东方粘虫(Pseudaletiaseparata)的病原性 ,并添加感染增效物质 ,研究其增效作用。结果表明 ,AcMNPVAaIT比AcMNPV -C6具有更强的病原性 ,被... 采用小滴饮下法 ,研究了基因重组核型多角体病毒AcMNPVAaIT和野生型核型多角体病毒AcMNPV -C6对东方粘虫(Pseudaletiaseparata)的病原性 ,并添加感染增效物质 ,研究其增效作用。结果表明 ,AcMNPVAaIT比AcMNPV -C6具有更强的病原性 ,被感染昆虫死亡率高、致死时间短 ; 展开更多
关键词 感染增效物质 基因重组 核型 多角体 病毒 acmnpv 东方粘虫 毒力作用
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AcMNPV核衣壳的形态发生 被引量:3
3
作者 陈建国 滕俊琳 翟中和 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第2期83-86,共4页
报道了缺失多角体蛋白基因的AcMNPV在sf9细胞内核衣壳的形态发生过程。病毒衣壳蛋白首先装配成许多呈束状排列的直径为34nm中空长管状结构,然后是病毒DNA进入管内,装有DNA的长管按一定的长度间隔断开,形成成束的核衣壳,每个核衣壳的大小... 报道了缺失多角体蛋白基因的AcMNPV在sf9细胞内核衣壳的形态发生过程。病毒衣壳蛋白首先装配成许多呈束状排列的直径为34nm中空长管状结构,然后是病毒DNA进入管内,装有DNA的长管按一定的长度间隔断开,形成成束的核衣壳,每个核衣壳的大小约34×260nm,最后成束的核衣壳被囊膜包被形成完整的多粒包埋型病毒粒子。 展开更多
关键词 杆状病毒 昆虫病毒 核衣壳 形态发生
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AcMNPV大方形多角体突变株的特征研究 被引量:2
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作者 林广云 王珣章 +3 位作者 龙綮新 邓日强 庞义 余奇理 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期64-74,共11页
对在细胞核中只形成一个几乎与细胞核同样大的立方形多角体突变株AcMNPVTKmt513的多角体及其感染细胞,做超薄切片及透射电镜观察,结果表明,在感染细胞核内病毒粒子并没有被包埋到多角体蛋白内,而且多角体蛋白也不具... 对在细胞核中只形成一个几乎与细胞核同样大的立方形多角体突变株AcMNPVTKmt513的多角体及其感染细胞,做超薄切片及透射电镜观察,结果表明,在感染细胞核内病毒粒子并没有被包埋到多角体蛋白内,而且多角体蛋白也不具有野生型病毒多角体蛋白那样的晶格结构。生物测定结果表明,经提纯后的突变多角体对虫体无感染力,而感染了突变株病毒的细胞只有弱的感染力。序列测定结果证实,其fp25基因无突变发生,且fp25基因在Sf9细胞中的转录也无异常,从而排除了突变与fp25基因有关。比较了26种NPV及GV的多角体蛋白及颗粒体蛋白的氨基酸序列,发现第25位的甘氨酸是绝对保守的。利用Prosis电脑软件对突变株病毒的多角体蛋白进行了二级结构预测并与野生型病毒作了比较,发现突变株病毒多角体蛋白的二级结构与野生型的比较,α螺旋数上升,β折叠数下降,同时,亲水性及抗原性都发生了改变。两种病毒的多角体蛋白通过SDSPAGE分析,其迁移率没有差别。 展开更多
关键词 acmnpv fp25基因 多角体蛋白
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增效物质对AcMNPV-AaIT感染的增效作用 被引量:1
5
作者 王玲玲 李俊 +1 位作者 张涛 秦利 《昆虫知识》 CSCD 北大核心 2007年第3期382-384,共3页
以苜蓿尺蠖蛾核型多角体病毒的基因重组型病毒(AcMNPV-AaIT)及甜菜夜蛾Spodoptera exigua(H櫣bner)为材料,采用室内添食法研究增效物质对该病毒感染增效作用,筛选出对重组病毒具有感染增效作用的物质—刚果红。
关键词 增效物质 刚果红 acmnpv-AaIT 甜菜夜蛾
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基因重组核型多角体病毒AcMNPV-AaIT对甜菜夜蛾幼虫的毒力研究 被引量:1
6
作者 徐艳聆 樊虹 +3 位作者 聂磊 王玲玲 张涛 秦利 《辽宁农业科学》 2004年第2期10-12,共3页
研究了基因重组核型多角体病毒AcMNPV AaIT和野生型多角体病毒AcMNPV C6对甜菜夜蛾的病原性,并添加感染增效物质,研究其增效作用。结果表明:AcMNPV AaIT对甜菜夜蛾3、4龄幼虫的LD50分别为151、379PIB/头,比AcMNPV C6少39、906PIB/头;LT5... 研究了基因重组核型多角体病毒AcMNPV AaIT和野生型多角体病毒AcMNPV C6对甜菜夜蛾的病原性,并添加感染增效物质,研究其增效作用。结果表明:AcMNPV AaIT对甜菜夜蛾3、4龄幼虫的LD50分别为151、379PIB/头,比AcMNPV C6少39、906PIB/头;LT50分别比AcMNPV C6缩短1.1d和1.5d;昆虫病毒感染增效物质具有强烈的感染增效作用,增效比值为617倍。 展开更多
关键词 基因重组核型 多角体病毒 野生型 acmnpv—AaIT 甜菜夜蛾 病原性
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重组病毒AcMNPV-BmK IT侵染Sf9细胞后凋亡相关基因的表达分析 被引量:1
7
作者 付月君 林桃桃 梁爱华 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期23-27,44,共6页
将从东亚钳蝎中克隆到的兴奋型昆虫毒素基因(BmK IT)同源重组到苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)基因组中,得到重组病毒AcMNPV-BmK IT,抗虫试验表明重组杆状病毒的杀虫活性明显优于野生型病毒,但AcMNPV介导的BmK IT的抗虫分子机制尚... 将从东亚钳蝎中克隆到的兴奋型昆虫毒素基因(BmK IT)同源重组到苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)基因组中,得到重组病毒AcMNPV-BmK IT,抗虫试验表明重组杆状病毒的杀虫活性明显优于野生型病毒,但AcMNPV介导的BmK IT的抗虫分子机制尚未阐明。本试验从草地贪夜蛾Sf9细胞中克隆获得了凋亡相关基因Sfp53,制备了抗体,分析了AcMNPV-BmK IT对Sfp53表达的影响,结果表明被重组病毒感染的细胞所表达的Sfp53时间与表达量与野生型相比都有所提前和提高,说明重组病毒可加速细胞的凋亡;同时通过半定量PCR分析了AcMNPV-BmK IT感染Sf9细胞时病毒抗凋亡基因iap2的表达,结果表明重组型病毒抗凋亡基因iap2表达量减少。以上结果在细胞分子水平上解释了AcMNPV-BmK IT杀虫活性提高的原因。 展开更多
关键词 acmnpv-BmK IT 凋亡 Sfp53 iap2
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拓展AcMNPV宿主域至家蚕的研究 被引量:2
8
作者 查新民 季平 +1 位作者 于继彬 沈卫德 《江苏蚕业》 2001年第3期7-9,共3页
将核型多角体病毒(Autographa caliphanic nuclear polyhedrosis virus,AcMNPV)与家蚕核型多角体病毒(Bombyxmori nuclear polyhedrosis v... 将核型多角体病毒(Autographa caliphanic nuclear polyhedrosis virus,AcMNPV)与家蚕核型多角体病毒(Bombyxmori nuclear polyhedrosis virus,NmNPV)基因组DNA的Sma I酶切C片段共转染Sf细胞,共转染上清液接种到BmN细胞中进行扩增,然后在BnN中进行空斑分析,挑取多角体空斑进行扩增。发现所得到的病毒即能在Sf纫胞中增殖,也能在BmN细胞中增殖,并产生多角体颗粒。用重组病毒的多角体口服感染幼虫,能引起家蚕幼虫发病。 展开更多
关键词 acmnpv BMNPV 宿主域 共转染 杆状病毒 病毒杀虫剂 家蚕
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吖啶橙对草地贪夜蛾sf9细胞和AcMNPV病毒的损伤效应
9
作者 邓平建 房师松 +3 位作者 李喜梅 倪惠波 王叶元 林健荣 《癌变.畸变.突变》 CAS CSCD 2007年第2期125-128,共4页
背景与目的:探索吖啶橙对昆虫细胞的遗传损伤。材料与方法:用不同浓度的吖啶橙处理草地贪夜蛾Sf9细胞、AcMNPV病毒,观察其对细胞生长发育,微核发生率,AcMNPV感染力的影响。结果:sf9细胞经5μg/ml的吖啶橙处理后,细胞分裂生长速度减慢,... 背景与目的:探索吖啶橙对昆虫细胞的遗传损伤。材料与方法:用不同浓度的吖啶橙处理草地贪夜蛾Sf9细胞、AcMNPV病毒,观察其对细胞生长发育,微核发生率,AcMNPV感染力的影响。结果:sf9细胞经5μg/ml的吖啶橙处理后,细胞分裂生长速度减慢,细胞表面粗糙,微核发生率为10.4‰,10μg/ml时可引起细胞膜破碎或死亡,微核发生率为22‰,出现三核,多核甚至核裂现象。当AcMNPV经吖啶橙处理后再感染sf9细胞,AcMNPV可在细胞内增殖,形成多角体,并出现一些类似三角形或四角形的异常多角体。结论:用一定剂量的吖啶橙处理草地贪夜蛾sf9细胞和AcMNPV病毒,可对细胞产生损伤和引起AcMNPV发生异常多角体。 展开更多
关键词 吖啶橙 草地贪夜蛾sf9细胞 acmnpv病毒 损伤
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AcMNPV大立方形多角体突变株突变位点的证实
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作者 林广云 施先宗 +1 位作者 龙綮新 余奇理 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期61-64,共4页
纯化了3株在共转染后形成正常多角体的病毒株,提取其病毒DNA,并对其做了EcoRⅠ、BglⅡ酶切分析;克隆含多角体蛋白基因的EcoRⅠI片段并进行序列测定,证实了此病毒株为回复突变株.
关键词 杆状病毒 多角体蛋白 回复突变 突变位点 acmnpv
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AcMNPV polh启动子上游增强序列的部分缺失分析
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作者 柴柯 龙綮新 王询章 《海南大学学报(自然科学版)》 CAS 2004年第1期61-69,共9页
本实验构建了2个用于杆状病毒AcMNPV(苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒)启动子及其调控序列研究的质粒载体:pF SBCAT和pF SBCATPpolh.以此为基础,结合目前对BmNPV(家蚕核多角体病毒)polh(多角体)基因和AcMNPVpolh基因上游增强序列的研究结果,... 本实验构建了2个用于杆状病毒AcMNPV(苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒)启动子及其调控序列研究的质粒载体:pF SBCAT和pF SBCATPpolh.以此为基础,结合目前对BmNPV(家蚕核多角体病毒)polh(多角体)基因和AcMNPVpolh基因上游增强序列的研究结果,构建了AcMNPVpolh基因上游增强序列部分缺失的瞬时表达载体;以cat为报告基因,利用瞬时转染和CATELISA的方法检测报告基因的表达活性,初步研究了对于polh启动子具有增强作用的AcMNPVpolh基因上游序列的结构.结果显示,与BmNPVpolh上游293bp序列同源性极高的AcMNPVpolh上游293bp片段对于polh启动子没有增强活性;CMVm启动子的AcMNPVpolh上游增强序列部分缺失之后不能够增强AcMNPVpolh启动子.因此,这一序列可能不再被缩短,也不大可能存在独立地起作用和更短的正、负调控元件. 展开更多
关键词 acmnpv polh 增强序列 部分缺失 杆状病毒 苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒 家蚕核多角体病毒 BMNPV
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RSV编码的4种蛋白在“AcMNPV-sf9昆虫细胞”体系中的重组表达
12
作者 林董 何柳 +3 位作者 谢荔岩 吴祖建 林奇英 谢联辉 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2008年第3期269-274,共6页
应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)获得水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)的4个基因NS2、NS3、CP和SP,并将它们克隆至pMD-18-T载体上.得到的重组质粒pMD-18-T-NS2、pMD-18-T-NS3、pMD-18-T-CP和pMD-18-T-SP经XbaⅠ/HindⅢ双酶切,分... 应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)获得水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)的4个基因NS2、NS3、CP和SP,并将它们克隆至pMD-18-T载体上.得到的重组质粒pMD-18-T-NS2、pMD-18-T-NS3、pMD-18-T-CP和pMD-18-T-SP经XbaⅠ/HindⅢ双酶切,分别与经相同方法酶切的苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa california nuclear polyhedrosis virus,AcM-NPV)转移载体pFastBacHTb相连接,构建重组转移质粒pFastBacHTb-X(pFastBacHTb-NS2、pFastBacHTb-NS3、pFastBacHTb-CP和pFastBacHTb-SP).序列测定表明,目的基因准确地插入到表达载体中.重组质粒pFastBacHTb-X通过转化包含有穿梭载体的大肠杆菌(Escherichia coli)感受态细胞DH10Bac,得到重组穿梭质粒rb-X(rb-NS2、rb-NS3、rb-CP和rb-SP).rb-X侵染草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)离体细胞(sf9)24-72 h后,在荧光倒置显微镜可见光200倍视野下观察到细胞增大、培养液和细胞内出现颗粒状物质、部分细胞破裂甚至裂解等一系列与正常sf9细胞形态有明显区别的现象.rb-X侵染细胞72h后,从细胞提取蛋白,电泳分析得到4个条带,大小分别为28.2、29.2、40.2和25.2 ku,与预测的4种融合蛋白大小一致.Western blotting分析分别得到4条单一条带,证明了RSV NS2、NS3、CP和SP基因在"AcMNPV-sf9昆虫细胞"真核表达体系中成功表达. 展开更多
关键词 水稻条纹病毒 苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒 草地贪夜蛾细胞 杆状病毒表达系统
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从野桑蚕体内分离的NPV与BmNPV、AcMNPV间的RAPD分析
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作者 李兵 沈卫德 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2003年第6期101-102,共2页
将野外收集的野桑蚕核型多角体病毒进行空斑筛选 ,纯化后的病毒通过碱裂解法抽提基因组DNA ,用家蚕核型多角体病毒 (BmNPV)和苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒 (AcMNPV)的基因组DNA作对照 ,用随机引物进行PCR扩增。结果表明 ,野桑蚕分离的NPV... 将野外收集的野桑蚕核型多角体病毒进行空斑筛选 ,纯化后的病毒通过碱裂解法抽提基因组DNA ,用家蚕核型多角体病毒 (BmNPV)和苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒 (AcMNPV)的基因组DNA作对照 ,用随机引物进行PCR扩增。结果表明 ,野桑蚕分离的NPV与BmNPV、AcMNPV存在较大的差异性 ,通过版本为 1.3b的Treecomw软件分析 ,表明野桑蚕体内的NPV与BmNPV的同源关系较近 ,而与AcMNPV的同源关系较远。 展开更多
关键词 野桑蚕 w—BmNPV BMNPV acmnpv RAPD
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AcMNPV突变株的蛋白表达时相研究
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作者 丁清泉 方勤 +3 位作者 RenéeLapointe 戴顺英 赵小东 Eric B.Carstens 《中国病毒学》 CSCD 2003年第1期35-38,共4页
将苜蓿银纹夜蛾多核衣壳核型多角体病毒(Autograph Colifornica nuclear polyhedrosis virus,AcMNPV)的野生型株HR3和温度敏感突变株ts317、ts538、ts8感染草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)Sf21细胞,并在允许温度(25℃)或非允许温度(3... 将苜蓿银纹夜蛾多核衣壳核型多角体病毒(Autograph Colifornica nuclear polyhedrosis virus,AcMNPV)的野生型株HR3和温度敏感突变株ts317、ts538、ts8感染草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)Sf21细胞,并在允许温度(25℃)或非允许温度(33℃)下培养,分别采用过氧化物酶标记的抗P47蛋白、抗P143蛋白、抗多体蛋白和抗病毒结构蛋白的单克隆抗体检测病毒增殖过程各蛋白出现的时间。结果表明:1)P47蛋白是一种晚期(12hpi)表达蛋白,各突变株在允许温度(25℃)能够表达,但在非允许温度(33℃)不能表达。2)P143蛋白是一种早期(8hpi)表达蛋白,在允许温度和非允许温度时都能表达,ts8的表达量较少。3)在非允许温度条件下,蛋白质的合成速度高于允许温度。4)野生型和突变株ts317的病毒结构蛋白(P80、GP64、VP39、P24和PTP)在允许温度增殖下都能检测到,ts538和ts8表达量相对少些。5)除了GP64和P24外,ts538和ts8感染的细胞在非允许温度下不能表达病毒的结构蛋白。6)野生型毒株HR3在允许温度和非允许温度下的蛋白表达无明显差异。 展开更多
关键词 苜蓿银纹夜蛾多衣壳核型多角体病毒 MNPV 蛋白表达 温度敏感突变株
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AcMNPV e18基因酵母双杂交诱饵载体构建和转录自激活检测 被引量:3
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作者 史瑞丽 周晓伟 黎路林 《湖北农业科学》 北大核心 2013年第10期2436-2438,2442,共4页
用PCR方法扩增苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhe-drovirus,AcMNPV)被膜蛋白ODV-E18基因,克隆至酵母双杂交诱饵载体pGBKT7构建诱饵质粒pG-BKT7-e18。将诱饵质粒分别转化酵母菌株Y187和AH109感受... 用PCR方法扩增苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhe-drovirus,AcMNPV)被膜蛋白ODV-E18基因,克隆至酵母双杂交诱饵载体pGBKT7构建诱饵质粒pG-BKT7-e18。将诱饵质粒分别转化酵母菌株Y187和AH109感受态细胞,被转化细胞在涂有X-gal的SD/-Trp营养缺陷型固体培养基上形成白色菌落;在SD/-Trp/-His和SD/-Trp/-Ade固体培养基上均不形成菌落,表明诱饵基因表达产物BD-E18在这两种细胞中都不能激活报告基因转录。pGBKT7-e18转化的Y187细胞在SD/-Trp营养缺陷型液体培养基中的生长速度与空载体转化细胞相同,显示BD-E18对酵母细胞无细胞毒性。结果表明,AcMNPV ODV-E18可能不直接参与对宿主细胞或病毒基因表达的调节,其编码基因可以作为诱饵基因通过筛查病毒宿主cDNA文库识别与其相互作用的蛋白质。 展开更多
关键词 苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus acmnpv) ODV-E18 酵母双杂交 自激活 细胞毒性
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AcMNPV类芋螺毒素多肽的抗菌活性分析 被引量:1
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作者 曹青 吴岩 +3 位作者 刘永 吴俣 王文兵 朱姗颖 《生物学杂志》 CAS CSCD 2012年第6期29-31,共3页
类芋螺毒素(CTX)基因存在于多种杆状病毒,编码富含半胱氨酸的多肽。从AcMNPV中克隆了ctx基因,利用AcMNPV杆粒操作系统构建了重组病毒Ac-pFastBac1-Pie1-ctx-eGFP和Ac-pFastBac1-Pie1-ctx。绿色荧光蛋白介导的亚细胞定位显示AcMNPV CTX... 类芋螺毒素(CTX)基因存在于多种杆状病毒,编码富含半胱氨酸的多肽。从AcMNPV中克隆了ctx基因,利用AcMNPV杆粒操作系统构建了重组病毒Ac-pFastBac1-Pie1-ctx-eGFP和Ac-pFastBac1-Pie1-ctx。绿色荧光蛋白介导的亚细胞定位显示AcMNPV CTX定位于Tn细胞的细胞膜;抑菌实验表明,重组病毒Ac-pFastBac1-Pie1-ctx感染的胞外产物对金黄色葡萄球菌、微球菌、短小芽孢杆菌等临床致病菌具有显著的抗菌活性,但其作用机制尚需进一步阐明。 展开更多
关键词 类芋螺毒素(CTX) acmnpv 亚细胞定位 抗菌活性
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含外源类蜗牛毒素基因的AcMNPV的虫体感染性研究 被引量:2
17
作者 卢玉蓉 冯枞棣 +5 位作者 吴东 孙修炼 邓菲 袁丽 J.M.Vlak 胡志红1 《中国病毒学》 CSCD 2004年第3期276-280,共5页
类蜗牛毒素基因(conotoxinlike,ctl)是在一些杆状病毒基因组中存在的与蜗牛毒素类似的一类基因,其功能尚不清楚。本文利用苜蓿银纹夜蛾核多角病毒(AcMNPV)bacmid表达系统构建了含油桐尺蠖核多角体病毒(BusuNPV)ctl基因的重组病毒AcBac-p... 类蜗牛毒素基因(conotoxinlike,ctl)是在一些杆状病毒基因组中存在的与蜗牛毒素类似的一类基因,其功能尚不清楚。本文利用苜蓿银纹夜蛾核多角病毒(AcMNPV)bacmid表达系统构建了含油桐尺蠖核多角体病毒(BusuNPV)ctl基因的重组病毒AcBac-ph-ctl。在细胞水平上对ctl基因的RT-PCR分析表明,该基因转录出mRNA。在甜菜夜蛾体内进行了生物活性测定,结果表明AcBac-ph-ctl与对照野生型AcMNPV的LC50,ST50无显著性差异,表明在此系统中,外源的CTL无杀虫增效性能。 展开更多
关键词 类蜗牛毒素基因(ctl) acmnpv BACMID LC50 ST50 转录 生物测定
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AcMNPV介导BmKIT和组织蛋白酶协同表达对Sf9细胞凋亡的分析 被引量:1
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作者 赵洁 梁爱华 付月君 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2015年第1期118-122,共5页
为了研究Bm K IT提高Ac MNPV抗虫活性的作用机制,将Bm K IT基因插入到Ac MNPV中形成重组病毒。采用重组单价病毒Ac MNPV-Bm K IT(IE1)、Ac MNPV-Bm K IT(P10)、Ac MNPV-Bm K IT(PH)和一种重组双价病毒Ac MNPV-Bm K IT(P10)-vcath(PH),... 为了研究Bm K IT提高Ac MNPV抗虫活性的作用机制,将Bm K IT基因插入到Ac MNPV中形成重组病毒。采用重组单价病毒Ac MNPV-Bm K IT(IE1)、Ac MNPV-Bm K IT(P10)、Ac MNPV-Bm K IT(PH)和一种重组双价病毒Ac MNPV-Bm K IT(P10)-vcath(PH),通过四唑盐比色法(MTT)和蛋白质印迹法(Western Blot)分析了Bm K IT在Ac MNPV的3个启动子调控下对Sf9细胞增殖和细胞凋亡的影响,结果显示,感染病毒36,48 h Bm K IT在不同启动子调控下表达量从高到低依次为PH、P10、IE1。同时分析了Ac MNPV介导的Bm K IT与组织蛋白酶的协同表达对昆虫Sf9细胞增殖和调亡的机制,结果表明,Ac MNPV-Bm K IT(P10)-vcath(PH)处理组对Sf9细胞抑制率比Ac MNPV-Bm K IT(P10)处理组平均提高了14.5%,凋亡相关蛋白c-Myc、cleaved-Caspase3、Bax表达量增加,Bcl-2表达量减少。 展开更多
关键词 acmnpv BMK IT 组织蛋白酶 协同作用
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肌动蛋白在AcMNPV向细胞外运输过程中作用的初步研究 被引量:3
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作者 李小青 周蕊 +3 位作者 贾蕴丽 贾放 余泽华 陈新文 《中国病毒学》 CSCD 2004年第6期632-635,i010,共5页
本实验利用 AcMNPV(Autographa californica multiple nuclear polyhedrosis virus,AcMNPV)的 bac-to-bac 系统构建了两种重组病毒,即含 GFP-actin 融合基因的重组病毒 AcMNPV-GFP-actin 和含 GFP 基因的重组病毒AcMNPV-GFP。用这两种... 本实验利用 AcMNPV(Autographa californica multiple nuclear polyhedrosis virus,AcMNPV)的 bac-to-bac 系统构建了两种重组病毒,即含 GFP-actin 融合基因的重组病毒 AcMNPV-GFP-actin 和含 GFP 基因的重组病毒AcMNPV-GFP。用这两种重组病毒分别感染 Sf9 细胞,以 AcMNPV-GFP 感染的 Sf9 细胞为对照,用共聚焦激光扫描显微镜观察了绿色荧光在病毒感染过程中的分布情况。由于肌动蛋白和绿色荧光蛋白是共定位的,所以绿色荧光的分布情况就是肌动蛋白的分布情况。实验中观察发现,AcMNPV-GFP 感染的 Sf9 细胞中的绿色荧光,在整个感染过程中是弥散分布的,而 AcMNPV-GFP-actin 感染 Sf9 细胞后 24-72h 这段时间内,肌动蛋白最初聚集在细胞核内,随后逐渐由细胞核向细胞质转移,最后完全聚集于细胞膜。根据实验结果,推测肌动蛋白可能参与了AcMNPV 出芽型病毒粒子(BV)由细胞核向细胞质运输以及从细胞膜排出的过程。 展开更多
关键词 绿色荧光蛋白 肌动蛋白 苜蓿银纹夜蛾多核衣壳核型多角体病毒 重组病毒
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TnGV增强蛋白在AcMNPV中的表达和活性分析 被引量:4
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作者 李志广 尹隽 钟江 《中国病毒学》 CSCD 2002年第4期326-330,共5页
为了研究杆状病毒增强蛋白的活性基团 ,本文构建了分别表达三种N端部分缺失的粉纹夜蛾颗粒体病毒增强蛋白的重组杆状病毒 ,这三种蛋白在N端分别缺失了 15 0 ,186和 2 5 0个氨基酸。用重组病毒感染Tn 5B1 4细胞 ,成功地表达了这三种蛋白 ... 为了研究杆状病毒增强蛋白的活性基团 ,本文构建了分别表达三种N端部分缺失的粉纹夜蛾颗粒体病毒增强蛋白的重组杆状病毒 ,这三种蛋白在N端分别缺失了 15 0 ,186和 2 5 0个氨基酸。用重组病毒感染Tn 5B1 4细胞 ,成功地表达了这三种蛋白 ,并得到了纯化的蛋白质。通过体外降解围食膜的方法检测这些部分缺失的增强蛋白的活性 ,结果证实这三种蛋白均失去了增强蛋白的降解围食膜粘蛋白的活性。这一结果表明 。 展开更多
关键词 TnGV增强蛋白 acmnpv 表达 活性分析 杆状病毒 结构 功能 生物防治
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