HPLC法测定刺五加不同部位刺五加苷B、E含量

目的:建立 HPLC 法同时测定刺五加苷 B 和刺五加苷 E 含量的方法,并对刺五加不同部位的刺五加苷 B 和刺五加苷 E进行含量测定,为合理开发、利用刺五加资源提供理论依据。方法:采用 Nucleosil C_(18)色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),以乙腈(A)-水(B)为流动相,梯度洗脱(0～8 min:12%B;8～20 min:12%B→18%B;20～25 min:18%B;25 min:12%%B),流速0.8 mL·min^(-1),检测波长210 nm。结果:刺五加苷 B 在茎干中含量最高,叶中最低;刺五加苷 E 在根中含量最高,花中含量最低。除叶以外,其他各部位中刺五加苷 E 的含量均低于刺五加苷 B。结论:本方法简便,重复性好,可作为刺五加药材的质量控制方法,也为合理利用刺五加这一资源提供依据。

LC-MS/MS法同时测定刺五加制剂中紫丁香苷、刺五加苷E和异嗪皮啶的含量

目的：建立一种液相色谱-串联四级杆质谱（LC-MS/MS）法同时测定两种刺五加制剂中紫丁香苷、刺五加苷E和异嗪皮啶的含量。方法LC采用内标法，MS采用电喷雾离子源，多反应监测模式，正负离子同时检测。3种被测成分的监测离子对分别为395.0/232.0（紫丁香苷），765.2/765.2（刺五加苷E），223.0/162.0（异嗪皮啶），内标化合物的监测离子对为431.0/311.1（牡荆苷）。色谱柱为Diamonsil C18色谱柱（4.6 mm×150 mm ,5μm），流动相A为甲醇，流动相B为0.1%甲酸溶液，梯度洗脱，流速0.6 mL/min，分析时间12 min。结果刺五加注射液、刺五加片中紫丁香苷、刺五加苷E、异嗪皮啶的线性范围分别为6.00-2000 ng/mL（r =0.9979），6.00-2000 ng/mL（r =0.9951），2.00-600 ng/mL （r=0.9931）；刺五加注射液的平均加样回收率（n=9）分别为104.13%，95.16%，102.64%；刺五加片的平均加样回收率（n=9）分别为102.51%，99.60%，99.15%。结论采用LC-MS/MS方法测定刺五加注射液、刺五加片中3个有效成分含量，该方法快速、简便、灵敏度高、专属性好，可作为刺五加制剂的一种质量控制评价方法。

刺五加中刺五加苷E的含量测定

目的:探讨刺五加中刺五加苷E的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法测定,色谱柱为Symm etry—C18(4.6mm×250mm),乙腈/1%冰醋酸溶液(15:85)为流动相,检测波长为210nm,柱温为30℃,流速为1.0mL/min。结果:应用高效液相色谱法测定刺五加中刺五加苷E的含量有效可行。结论:高效液相色谱法是测定刺五加中刺五加苷E的含量的有效方法,可用于不同剂型刺五加的质量评定及临床血药浓度检测。

HPLC法同时检测刺五加叶中原儿茶酸、绿原酸、刺五加苷E、金丝桃苷及槲皮苷的含量

建立HPLC同时定量刺五加叶中原儿茶酸、绿原酸、刺五加苷E、金丝桃苷及槲皮苷五种主要成分的方法。方法:色谱柱:Agilent Extend C18(4.6mm×25mm,5μm),柱温:30℃;流速1 mL/min;进样量:10μL;流动相A:0.3%磷酸-水溶液,流动相B:0.3%磷酸-乙腈;梯度洗脱,洗脱条件:0～3 min,95%A;3～10 min,95%～80%A;10～35 min,80%～70%A;35～40 min,70%～10%A;40～50 min,10%A;紫外检测波长:265 nm。结果:金丝桃苷和槲皮苷在20～240μg/mL,原儿茶酸、绿原酸、刺五加苷E分别在5～60μg/mL、167.2～2010μg/mL及6～72μg/mL下与峰面积呈良好的线性关系;平均加样回收率在99.6%～103.1%,RSD为1.5%～2.7%。结论:本方法简便可靠,适用于刺五加叶中的多成分含量测定。

LC-MS/MS同时测定刺五加根中刺五加苷B、刺五加苷E及黄酮类次生代谢物含量的研究

通过建立超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定野生刺五加与人工栽培植株根中刺五加苷B、刺五加苷E、金丝桃苷、芦丁、槲皮苷、山奈酚含量,比较野生刺五加与人工种植五加根中目标化合物含量差异。经色谱和质谱方法的考察,结果表明:超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)成功应用于检测刺五加野生植株和人工栽培植株根中目标化合物含量,具有灵敏度高、选择性好、分析时间短、定量分析准确等优点。利用UPLC-MS/MS法测定刺五加植株根中6种药用次生代谢物含量,目标化合物能达到基线分离,各成分回收率在92.47%~96.44%之间;人工栽培植株根中的主成分(Q值)综合得分大于野生植株,目标化合物总含量分别为6.278 56μg·g^(-1)和6.053 63μg·g^(-1),前者高出后者0.224 93μg·g^(-1)。刺五加苷E、芦丁、山奈酚人工栽培植株含量大于野生植株,或具有显著性差异(p<0.05);而刺五加苷B、金丝桃苷、槲皮苷野生植株含量大于人工栽培植株,或具有显著性差异(p<0.05)。

HPLC法测定短柄五加根和茎中刺五加苷E含量

[目的]建立测定不同产地短柄五加根、茎中刺五加苷E含量的HPLC方法。[方法]采用Agilent TC-C_(18)(2)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;以乙腈-0.1%磷酸(16∶84)为流动相;流速1 mL/min;检测波长220 nm,进样体积为10μL,柱温30℃。[结果]刺五加苷E在8.0~160.6μg/mL与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9996),平均加样回收率为98.62%,RSD为0.50%。[结论]该方法操作简便、稳定可靠,适用于短柄五加根、茎中刺五加苷E含量的测定,可作为倒卵叶五加药材的质量控制指标。

复方拜颤停片5种成分在帕金森病模型大鼠体内组织分布特征研究

目的研究复方拜颤停片代表性成分异嗪皮啶、紫丁香苷、刺五加苷E、芍药苷和异钩藤碱在帕金森病模型大鼠体内的组织分布特征。方法雄性SD大鼠36只,连续7 d腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶造模,成模后随机取30只大鼠单次灌胃给予复方拜颤停片(926 mg/kg),于给药后1、6、8、10、24 h各处死6只大鼠,取肝、心、脾、肺、肾、脑及小肠,制备组织匀浆,利用超高效液相色谱-质谱联用技术分别检测异嗪皮啶、紫丁香苷、刺五加苷E、芍药苷和异钩藤碱含量。结果5种成分的浓度在肝、心、脾、肺、肾和脑组织中于给药后6 h达最高峰,在小肠中于给药后1、8 h出现2个高峰。除小肠外的组织分布特征,异嗪皮啶为肾>脾>心>肝>脑>肺,紫丁香苷为肾>脑>肺>脾>肝>心,刺五加苷E为肾>脾>脑>肺>心>肝,芍药苷为肾>肝>脾>心>脑>肺,异钩藤碱为肾>肝>脾>心>脑>肺。结论复方拜颤停片5种代表性成分在大鼠体内的组织分布较为广泛,在肝与小肠中药物浓度变化趋势相反,均在肾脏中浓度最高,且在脑组织中有不同程度分布。

刺五加根及根茎中紫丁香苷、刺五加苷E的提取工艺

目的:优选刺五加的最佳提取工艺。方法:采用正交设计法,以HPLC测定提取物中紫丁香苷、刺五加苷E的含量。结果:最佳提取工艺为10倍量的80%乙醇回流提取3次,每次2h。结论:该提取工艺稳定,设计合理,重现性好,可为生产实践提供理论依据。

RP-HPLC法测定糙叶五加不同部位中刺五加苷B和E

目的建立同时测定糙叶五加不同部位中的刺五加苷B和刺五加苷E的方法。方法采用RP-HPLC法,色谱柱为Lichrom C18(250 mm×4.6 mm,5μm)柱,柱温35℃,0.1%磷酸水溶液-乙睛梯度洗脱(0→15 min,90∶10;15→30 min,90∶10→84∶16),检测波长为220 nm,体积流量1.0 mL/min。结果刺五加苷B的线性范围为14.4～72.0μg/mL(r=0.999 9),平均回收率为98.97%;刺五加苷E的线性范围37.4～187.0μg/mL(r=0.999 7),平均回收率为99.13%。糙叶五加根、茎、叶中刺五加苷B的质量分数分别为:0.463 4、2.452 4、0.016 5 mg/g(n=3);刺五加苷E的质量分数分别为0.143 9、1.375 4、0.187 7 mg/g(n=3)。结论该方法简便快速,结果准确可靠。

大孔树脂分离纯化刺五加中紫丁香苷、刺五加苷E和异嗪皮啶的工艺研究

目的研究大孔树脂分离纯化刺五加中紫丁香苷、刺五加苷E和异嗪皮啶的工艺。方法比较了4种不同类型的大孔树脂对刺五加中紫丁香苷、刺五加苷E和异嗪皮啶的吸附解吸性能,确定适宜的树脂类型和最佳纯化工艺条件。结果AB-8型大孔树脂对紫丁香苷、刺五加苷E和异嗪皮啶的吸附性能及解吸效果较好。最佳工艺条件为上样浓度:0.5 g·mL·1,吸附流速:2 BV·h·1,上样量:5 BV,洗脱剂:30%的乙醇,用量:11 BV,洗脱流速:1 BV·h·1。纯化后的终产品中紫丁香苷、刺五加苷E和异嗪皮啶的含量分别为3.13%,1.82%和0.42%。结论 AB-8型大孔树脂用于同时富集紫丁香苷、刺五加苷E和异嗪皮啶效果最佳,是一种理想的分离纯化介质。

HPLC-PAD测定刺五加中刺五加苷B与刺五加苷E的含量

目的研究HPLC同时测定刺五加中刺五加苷B与刺五加苷E的含量。方法采用Agilent Zorbax SB-C18柱(4.6mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.5%磷酸(0～10 min,9∶91;10～30 min,9～20∶91～80),流速1.0 mL.min-1,检测波长220 nm,柱温25℃。结果刺五加苷B、刺五加苷E分别在0.35～34.83与0.69～69.20μg.mL-1内线性关系良好,其相关系数分别为0.999 9与1.000 0;精密度RSD均为0.4%,小于2%;重复性RSD分别为1.4%与1.0%,稳定性RSD分别为3.1%与3.4%,均小于5%;平均回收率(n=9)分别为97.4%(RSD为5.5%)和102.7%(RSD为4.3%)。结论本方法操作简便,结果可靠,重复性好,可作为刺五加及其制剂的质量控制方法。

刺五加与短梗五加中紫丁香苷、刺五加苷E及异嗪皮啶含量比较

为比较刺五加及短梗五加样品中主要活性成分差异,选取吉林、黑龙江及辽宁等三省刺五加及短梗五加样品,利用薄层层析(TLC)法进行鉴别,并利用HPLC法测定了紫丁香苷、刺五加苷E及异嗪皮啶含量。结果表明:利用紫外灯(365 nm)显示的刺五加TLC图谱中异嗪皮啶特征条带均非常明显,短梗五加TLC图谱中异嗪皮啶特征条带不明显但存在痕迹,因此该鉴别方法可增加定量指标以保证鉴别结果的确定性。HPLC测试结果显示刺五加样品中三种功效成分含量总体较高,且紫丁香苷及异嗪皮啶平均含量均高于短梗五加样品。个别短梗五加中紫丁香苷含量达到近0.1%,而《药典》中规定紫丁香苷含量不低于0.05%,因此为防止短梗五加的混入,可在进一步深入研究基础上适当提高刺五加中紫丁香苷含量标准。

刺五加化学成分研究

目的研究长白山区药用植物刺五加茎中苷类化学成分。方法利用正、反相色谱等分离手段对刺五加提取液进行分离纯化,根据波谱学方法对化合物的结构进行鉴定。结果从刺五加中分离确定了7个化合物,分别为紫丁香苷（1）,刺五加苷E（2）,cirtrusin A（3）,cirtrusin B（4）,丁香树脂酚葡萄糖苷（5）,（-）-guaiacylglycerol-β-O-4＇-coniferyl erther（6）,hedyolisol（7）。结论化合物3、4、6和7均为首次在该植物中分离得到,化合物1-5为苷类物质,并且发现化合物1-5均具有较好的自由基清除活性,其对自由基DPPH的IC50值分别为0.04、3.49、10.35、14.19和25.92μg·mL-1。

RP-HPLC法测定野生刺五加果实中6种成分的含量

目的：建立测定刺五加果实中原儿茶酸、紫丁香苷、绿原酸、刺五加苷E、异嗪皮啶和槲皮素-3-鼠李糖苷含量的RPHPLC方法。方法：采用Agilent Eclipse XDB-C18（4.6 mm×250 mm,5μm）色谱柱,以乙腈-0.3%磷酸水溶液为流动相,流速1.0 m L·min-1,梯度洗脱,检测波长300 nm,柱温30℃。结果：原儿茶酸、紫丁香苷、绿原酸、刺五加苷E、异嗪皮啶和槲皮素-3-鼠李糖苷质量浓度分别在4.92～36.9、19.224～144.18、18.454～138.405、8.416～63.12、3.286～24.645、2.522～18.915μg·m L-1范围内与峰面积呈良好的线性关系,其线性回归方程分别为C=0.055 2A-0.057 9（r=0.999 9）,C=0.0799A＋0.014 6（r=0.999 7）,C=0.012 7A-0.131 4（r=0.999 6）,C=0.057 7A＋0.086 6（r=0.999 8）,C=0.012 0A-0.020 8（r=0.999 9）,C=0.014 2A＋0.065 1（r=0.999 9）;加样回收率（n=6）分别为100.4%、99.8%、100.9%、101.2%、99.4%和99.7%。6个成分的含量测定结果分别为0.501～0.510、2.511～2.522、2.310～2.325、1.331～1.340、0.371～0.382和0.260～0.272 mg·g-1。结论：经方法学验证,该法可作为刺五加果实质量控制的方法。

刺五加有效成分提取工艺考察及不同产地刺五加中有效成分量的比较

目的研究刺五加有效成分的提取工艺及比较不同产地刺五加中有效成分的量。方法采用HPLC法测定刺五加中紫丁香苷、刺五加苷E和异嗪皮啶。确定提取溶媒,采用正交试验法考察加溶媒量、提取时间和提取次数对提取工艺的影响,确定最佳提取工艺。根据最佳提取工艺,比较不同产地刺五加中紫丁香苷、刺五加苷E和异嗪皮啶的量。结果正交试验所得的最佳提取条件为加10倍量的50%乙醇,提取3次,每次2 h。黑龙江产的刺五加所含紫丁香苷、刺五加苷E和异嗪皮啶量较高。结论该提取工艺合理、稳定、可行;不同产地刺五加药材中紫丁香苷、刺五加苷E和异嗪皮啶的量存在一定的差异。