Determination of Total Flavonoids in Acanthopanax senticosus(Rupr. et Maxim.) Harms by Enzymolysis and Its Technological Optimization

In order to optimize the ultrasonic extraction technique for the total flavonoid of leaf yellows plus, the contents of 21 leaf yellows plus total flavonoid from four regions in Heilongjiang Province were comparatively analyzed. The ultrasonic extraction technology was optimized by Box-Behnken response surface method, and the total flavonoid content of 21 kinds of Acanthopanax senticosus(Rupr. et Maxim.) Harms from different producing areas were analyzed by cluster analysis. The optimal process conditions were determined as ultrasonic time 30 min, solid-liquid ratio 1 : 12 and ultrasonic power 250 W, and the average yield of the total flavonoid was 1.453 mg·g^ (-1). By optimizing the ultrasonic-assisted extraction method, the total flavonoid content from different producing areas was compared in the experiment, which provided certain data support for the optimization of the extraction process in the future and laid a certain theoretical foundation for the quality analysis of Chinese medicinal materials.

无梗五加叶体外抗氧化活性研究

研究无梗五加叶及其不同部分的抗氧化活性,研究其作为食用天然抗氧化剂的可行性。采用DPPH.、ABTS+.自由基及还原性反应体系,利用分光光度法测定无梗五加叶总提液及其不同组分在不同浓度下的抗氧化能力和总酚含量。结果表明:无梗五加叶的不同部分对DPPH.、ABTS+.自由基均具有较强的清除能力,对Fe3+有较强的还原能力,其结果与浓度呈良好的量效关系。30%组分的抗氧化能力最强,在浓度为0.62 mg/mL时,对DPPH.及ABTS+.自由基的最大清除率分别为99.588%、99.387%,与同浓度VC的清除率接近,且其IC50分别为0.024 mg/mL0、.127 mg/mL。测得30%组分的总酚含量最高,为0.567%。无梗五加叶有较好的抗氧化能力,与总酚含量的相关性好,同时该结果也客观地反映了DPPH法、ABTS法及还原性法测定无梗五加叶抗氧化活性的准确性。

无梗五加果中总香豆素和6,7-二甲氧基香豆素的含量测定

目的测定无梗五加果中总香豆素及6，7-二甲氧基香豆素的含量。方法以东莨菪内酯为对照品，采用分光光度法，于348nm处测定总香豆素含量。采用HPLC法测定6，7-二甲氧基香豆素含量。色谱柱为Hypersil BDS C18（4．6mm×250mm，5 μm），流动相为甲醇-磷酸水溶液（pH3．0）-乙腈-四氢呋喃（体积比为15：77：6：2），检测波长为340nm。结果总香豆素质量浓度在3．44～12．9mg·L^-1（r=0．9992）内、6，7-二甲氧基香豆素质量浓度在1～40mg·L^-1（r=0．9999）内线性关系良好；平均回收率分别为100．6％、97．7％；总香豆素和6，7-二甲氧基香豆素的质量百分含量分别为0．12％、0．0037％。结论方法准确、可靠，可为无梗五加果的质量控制提供参考依据。

无梗五加果化学成分的研究(英文)

从无梗五加(Acanthopanax sessiliflorus(Rupr.et Maxim.)Seem.)果70%乙醇提取物中分离鉴定了12个化合物。经波谱鉴定为东莨菪内酯(1),原儿茶酸甲酯(2),槲皮素(3),无梗五加苷B(4),金丝桃苷(5),(-)-pinoresinol-4,4′-di-O-β-D-glucopyranoside(6),chiisanoside(7),22α-hydroxychiisanoside(8),niduloic acid(9),胡萝卜苷(10),东莨菪苷(11)和无梗五加苷D(12)。其中化合物9为新天然产物,化合物1,2,6和11是首次从五加科植物中分离得到,化合物3是首次从五加属植物中分离得到。

HPLC法同时测定无梗五加果中东莨菪内酯和异嗪皮啶的含量

目的建立同时测定无梗五加（Acanthopanax sessiliflorusr（Rupr．et Maxim．）Seem．）果中东莨菪内酯和异嗪皮啶含量的HPLC法。方法采用Zirchrom Kromasil ODS C18（4．6mm×200mm，5／lm）色谱柱，流动相为乙腈-甲醇-水-冰醋酸（体积比为13：1：86：1），流速为1．0mL·min^-1。柱温为室温，检测波长为344nm。结果东莨菪内酯和异嗪皮啶分别在0．975～7．80mg·L^-1和0．360～2．88mg·L^-1内质量浓度与峰面积呈良好的线性关系，回归方程分别为A=2．150×10^4P^- 2．964×100（r=0．9991）和A=1．776×10^p-1．947×10^3（r=0．9997），平均回收率分别为101．2％和98．8％，测得样品中东莨菪内酯和异嗪皮啶的含量分别为30．5μg·g^1（RSD=1．7％）和7．90μg·g^-1（RSD=2．4％）。结论方法准确、可靠，可为无梗五加果的质量控制提供参考依据。

无梗五加果多糖组成及生物活性的研究

采用HPLC法对经脱色脱蛋白、DEAE52纤维素柱层析得到的主要多糖组分ASP-Ⅰ、ASP-Ⅱ进行单糖组成和纯度、相对分子质量(Mr)测定,表明无梗五加果多糖单糖组成为甘露糖、氨基葡萄糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖及岩藻糖,主要由Mr为21800、147000、45400和18100的4种均一多糖组成;其中,均一多糖ASP-Ⅰ由半乳糖和鼠李糖组成,物质的量之比为1:0.7,Mr为18100。对水提醇沉后得到的无梗五加果多糖进行部分生物活性研究表明,其在清除自由基、抗疲劳、耐缺氧及提高免疫调节能力等方面都具有一定功效。

HPLC-ELSD法在刺五加药材糖类成分分析中的应用

建立一种高效、快速的高效液相色谱—蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)分析刺五加药材中糖类成分—葡萄糖及蔗糖组分。采用CHROMATOREX NH2柱为固定相;以乙腈:水为84.5:15.5(V/V)为流动相,流速1.0 mL.min-1;漂移管温度为100℃;氮气流速为2.5 L.min-1。在上述色谱条件下,葡萄糖和蔗糖的线性范围分别为0.023 2-0.116 0 mg.mL-1及0.099 6-0.496 5 mg.mL-1;且该二种糖的检测限分别(信/噪=3)为3.87 ng和3.31 ng。本方法无须进行糖衍生化而直接用于刺五加药材中糖类成分的分离分析。

毛细管电泳法同时检测刺五加叶中的芦丁和金丝桃苷含量

目的建立简单、快速且能同时分离测定刺五加叶中芦丁、金丝桃苷含量的毛细管电泳法。方法采用毛细管电泳法,缓冲体系为0.2mol.L-1NaH2PO4,0.1mol.L-1Borax及双蒸水(10:7:3,pH8.8),熔融石英毛细管柱(25μm×45cm),分离电压为20kV,检测波长为254nm,进样时间为30s,进样高度10cm。结果芦丁、金丝桃苷在125～750,200～1200mg.L-1与峰面积线性关系良好,线性方程分别为:Y=144145ρ+423.8(r=0.9999)及Y=216836ρ-191.57(r=0.9999),样品平均回收率为99.38%及100.39%。结论该方法简单、快速、准确、重现性好,不同生长时期、不同产地的刺五加叶中两成分均存在一定的差异。

胶束电动毛细管电泳同时检测刺五加中紫丁香苷及绿原酸的含量

目的建立简单、快速且能同时分离测定刺五加中紫丁香苷、绿原酸含量的胶束电动毛细管电泳法。方法采用胶束电动毛细管电泳法,缓冲体系为100mmol·L^-1NaH2PO4-100mmol·L^-1Borax-100mmol·L^-1SDS-双蒸水（6.25∶43.75∶37.5∶12.5,pH9.25）,熔融石英毛细管柱（25μm×45cm）,分离电压为16kV,检测波长为254nm,进样时间为25s,进样高度10cm。结果紫丁香苷、绿原酸在0.0625-2.0000,0.2500-8.0000g·L^-1与峰面积线性关系良好,线性方程依次为：Y=112904ρ＋1645.（r=0.9999）,Y=98191ρ-165.11（r=0.9999）;样品回收率分别为100.78%和99.56%;两种成分含量以刺五加根中最高。结论该方法简单、快速、准确、重现性好,可用于刺五加药材的质量控制,不同部位两成分均存在一定的差异。

刺五加组织培养与细胞工程进展

综述了国内外对刺五加组织培养与细胞工程研究的现状。分别从体细胞胚胎发生的影响因素外植体的发育程度和类型、培养基、植物生长调节剂的种类和浓度以及作用特点、体细胞胚胎的形态发生过程与解剖学和人工种子的包埋与萌发;茎尖外植体的离体培养与快速繁殖;根癌农杆菌和发根农杆菌对愈伤组织和新生体胚的遗化转化;毛状根培养生产刺五加次生代谢产物的研究现状进行了评述,并进一步分析了其中存在的问题,提出了一些建议。

无梗五加果多糖与黄酮类化合物的研究

采用薄层色谱法对树脂纯化后的无梗五加果总黄酮进行了研究,表明以聚酰胺为固定相、微乳液为展开剂进行薄层层析鉴定效果最好,共分得9个组分。各种层析条件下的Rf值分析表明,无梗五加果中含药用成分金丝桃苷,未发现芦丁和槲皮素。采用HPLC法对经脱色、脱蛋白、DEAE52纤维素柱层析得到的主要多糖组分ASPⅠ-、ASP-Ⅱ进行单糖组成和纯度、相对分子质量(Mr)测定,表明无梗五加果多糖单糖组成为甘露糖、氨基葡萄糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖及岩藻糖,主要由Mr为21800、147 000、45 400和18 100的4种均一多糖组成;其中,均一多糖ASPⅠ-由半乳糖和鼠李糖组成,物质的量之比为1∶0.7,Mr为18 100。对水提醇沉后得到的无梗五加果多糖进行生物活性研究表明,其具有抗疲劳和耐缺氧的能力。

短梗五加种子萌发影响因子研究

短梗五加[Acanthopanax sessiliflorus(Rupr.et Maxim.)Seem]种子透水性良好,休眠后萌发不受其影响。果肉、种皮和胚乳中均存在抑制物质,胚乳中提取物质对白菜种子萌发的抑制效果最明显,果肉其次,种皮最弱。果实成熟种子自然脱落时,种胚尚未发育完全,处于心形胚阶段。种子萌发需要先暖温层积以完成胚的分化与生长,然后转入低温完成生理后熟。

刺五加果肉化学成分的研究(Ⅱ)

应用多种色谱技术进行分离纯化,从刺五加果肉水提取物中分离得到12个化合物,经理化性质和波谱分析鉴定其结构分别为:(-)-3,4-二香草基四氢呋喃(1)、桧脂素(2)、5α,8α-桥二氧麦角甾-6,22-双烯-3-醇(3)、刺五加苷A(4)、刺五加苷B(5)、尿嘧啶(6)、2-呋喃甲酸(7)、琥珀酸(8)、Phthalic acid bis-(2-ethyl-hex-yl)ester(9)、硬脂酸甘油酯(10)、正二十四烷酸(11)和正三十八烷(12)。其中化合物1、3、6、7、8和9为首次从本植物中分得。

刺五加药材提取工艺的研究

目的建立刺五加药材提取工艺。方法以异秦皮啶和甲醇浸出物为指标,采用正交试验法,对最佳提取工艺进行工艺参数考察。结果刺五加粗粉加12倍量的75%乙醇分3次回流提取,每次2.0h为最佳提取工艺。结论该提取工艺合理,生产实际操作简单,适合于大规模生产。

气相色谱保留参数用于刺五加果挥发油中萜烯及萜烯氧化物的分类

根据刺五加挥发油中24个挥发性成分在5个程序升温条件下的保留时间,采用基于Levenberg-Marquardt法的软件GC_AB计算得到相应成分的气相色谱保留参数(A,B值)。通过对其中的萜烯及萜烯氧化物之间A,B关系的相关性分析,发现相同碳数的单萜烯、倍半萜烯和其氧化物分别具有良好的A-B线性相关性,但单萜烯与倍半萜烯、单萜烯与其氧化物、倍半萜烯与其氧化物的A-B关系不共线。研究表明,在中草药挥发油之类的复杂未知混合物体系的分析中,通过色谱保留参数进行萜烯及萜烯氧化物的分类是一种很有潜力的辅助定性方法。

多种气相色谱联用技术分析陕西刺五加茎挥发油的化学成分

采用气相色谱 /四极杆质谱(GC/qMS)、气相色谱 /正交加速飞行时间质谱(GC/oaTOFMS)和气相色谱 /傅里叶变换红外光谱 (GC/FTIR)联用技术,对一种陕西产刺五加Acanthopanaxsenticosus(Rupr. etMaxim. )Harms茎挥发油的化学成分进行了分析。基于GC/qMS谱库的检索功能,结合GC/FTIR在结构鉴别上的优势和GC/oaTOFMS对质谱碎片离子精确的质量测定功能,成功地实现了对 68个色谱组分的定性分析。与使用单一的联用技术(例如GC/qMS)相比,利用多种色谱联用技术在定性分析上的互补性,可以明显提高对组成复杂的挥发油类样品分析的可靠性。

刺五加不同药用部位中槲皮素鼠李糖苷的含量比较

[目的]测定刺五加不同药用部位中槲皮素鼠李糖苷含量,并对结果进行比较,为刺五加合理利用及质量评价提供科学依据。[方法]采用高效液相色谱法测定刺五加的根、茎、叶、花和果中槲皮素鼠李糖苷含量。色谱条件为:大连江申Nucleosil C18(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,流动相为无水甲醇-水(40∶60,V/V),流速为1.1 ml/min,检测波长为370 nm,柱温为30℃,进样量为10μl。[结果]刺五加各药用部位中槲皮素鼠李糖苷的含量大小顺序为花蕾>叶>果>茎>根。其中,花蕾中槲皮素鼠李糖苷含量最高,为4.43%;其次为叶(0.61%);根中的最低,为0.01%。[结论]该方法操作简便、快速、准确,可用于刺五加不同部位中的槲皮素鼠李糖苷的含量比较。

刺五加绿枝扦插繁殖研究

以不同生根剂、扦插基质进行刺五加绿枝扦插生根试验。结果表明:用吲哚丁酸1000mg/kg、萘乙酸1500mg/kg浸泡1.5min,生根率分别达到44.3％和35.0％;细河沙和细炉灰均适宜做扦插基质。

刺五加提取液对慢性疲劳模型大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴的调节作用

目的:观察刺五加提取液对慢性疲劳(chronic fatigue,CF)大鼠的行为和下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴的影响,探讨其抗疲劳机制。方法:30只大鼠随机分为5组:对照组,CF组,刺五加提取液50、100、200mg/kg组。除对照组6只大鼠外,其余24只大鼠用跑台训练法建立CF模型。各组大鼠分别灌胃给予生理盐水,生理盐水,刺五加提取液50、100、200mg/kg,每天给药1次,共21d。测定各组大鼠给药后力竭时间;放射免疫分析法(RIA)检测促肾上腺皮质激素释放素(CRH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)和皮质酮的血浓度,实时(real-time)PCR法检测下丘脑促皮质素释放激素受体1(CRHR1)mRNA表达。结果:刺五加提取液100、200mg/kg大鼠跑台致力竭时间比CF组明显延长(P<0.01)。CF模型大鼠CRH、ACTH和皮质酮的血浓度显著升高(P<0.01),下丘脑CRHR1mRNA表达上调(P<0.01)。刺五加提取液50、100、200mg/kg可部分逆转由CF引起的CRH、ACTH及皮质酮血清浓度升高(P<0.05,P<0.01)和CRHR1mRNA表达的上调(P<0.05,P<0.01)。结论:刺五加提取液的抗疲劳作用可能与抑制HPA轴功能亢进,改善CRHR1偶联的信号通路有关。

三种五加在青海不同地区的引种栽培表现

以刺五加苗、短梗五加苗、红毛五加为试材,分别在大通县、互助县、西宁市进行引种栽培试验,通过3年对3种五加的成活率、物候、冠幅、树高、地径等生长指标观测,研究不同试验地对3种五加的引种栽培表现。结果表明:引种的3种五加在试验地均能完成正常的开花结果等生育期,引种驯化初步成功;不同试验区,物候期及各项生长指标发生较为明显变化。3种五加在同一地区物候期基本表现相似,但略有不同。3种五加可在青海西宁地区及大通河流域的主要林区根据实际需要选择栽培。