TB AccuProbe、INNO-LIPA^(TM)RIF.TB探针和rpoβDNA测序三种方法鉴定结核分枝杆菌的研究

目的用 3种先进的技术 -TBAccuProbeDNA杂交法、INNO LIPATMRIF TB(LiPA)探针试验和rpoβDNA基因序列测定的前瞻性研究 ,以鉴定结核分枝杆菌复合物 (MTBC)和非结核分枝杆菌(NTM)及其成本效益。方法在BactecMGIT 96 0培养系统中将获得的 10 5例阳性培养物筛选出 70例MTBC和 35例NTM ,用 3种技术鉴定并检测其rpoβ基因序列突变位点。 结果TBAccuProbe杂交阳性率是 95 7% (6 7/70 ) ,LiPADNA探针阳性率是 98 6 % (6 9/70 ) ,rpoβDNA序列测定阳性率是 97 1% (6 8/70 )。 3种方法两两比较差异在统计学上均无显著意义 (P >0 0 5 )。每份阳性培养物花费时间 :TBAc cuProbe杂交法和LiPADNA探针法在 2 4小时内完成 ,全部完成需 6～ 37天 ,平均为 15天 ;rpoβ基因序列测定需 4～ 5天完成 ,全部完成需 8～ 4 0天 ,平均 17天。比传统的 4～ 8周鉴定时间减少了很多。每份标本所需费用 3种方法各为 12 0、194和 96元。在 35例NTM中 ,3种方法均为MTBC阴性 ,同时rpoβDNA序列测定鉴定了NTM的种类。结论TBAccuProbe杂交和LiPADNA探针操作简便 ,所需时间短 ,只能鉴定MTBC和NTM。但LiPADNA探针还能鉴定rpoβ基因位点突变 ;rpoβ基因序列测定所需时间稍长 ,要有特定仪器和专门人员 ,但所需费用较低 ,除能鉴定MTBC外 。

3种方法鉴定单核细胞增生李斯特菌比较

[目的]采用分子生物学方法(accuprobe和PCR)对传统方法经ATB鉴定为单核细胞增生李斯特菌和疑为单核细胞增生李斯特菌的菌株进行鉴定比较,建立灵敏,快速,可靠的鉴定方法。[方法]对经传统方法结合ATB鉴定分离的菌株(单核细胞增生李斯特菌)分别采用accuprobe和PCR试剂盒进行鉴定比较。[结果]对10株经传统方法结合ATB鉴定的Lm菌(包括疑似Lm菌)经PCR鉴定,3株为阳性,7株为阴性,与accuprobe法鉴定结果一致。[结论]分子生物学方法检测单核细胞增生李斯特菌是对传统方法的有效补充。