毒死蜱和三唑磷对斑马鱼头部AChE活性影响及在鱼体内的富集

采用半静态法，测定了在96h—Lc50的1／10、1／20、1／40及1／80作用剂量下慢性暴露，毒死蜱和三唑磷对斑马鱼头部乙酰胆碱酯酶（AChE）活性的抑制及两种农药在鱼体的富集作用，并研究解除30d后酶活性的恢复。结果表明，随暴露剂量增大、暴露时间延长，农药对AChE活性抑制越强。在96h—LC50的1／10作用剂量下连续暴露30d，毒死蜱和三唑磷处理组斑马鱼头部AChE活性分别为对照的42．25％和31．80％。毒死蜱不同剂量处理组酶活性在解除药剂后30d均可恢复到对照的90％以上，而三唑磷高剂量处理组（96h—LC50的1/10和1／20）分别只有对照的74．91％和71．46％。毒死蜱极容易在鱼体富集，慢性暴露30d富集系数达260．91～1320．03L·kg^-1，而三唑磷仅为8．23-26．84L·kg^-1。

麦穗鱼脑乙酰胆碱酯酶(AChE)的纯化及其比较性研究

用 PEG2 0 0 0双水相萃取、DEAE- Sephadex A- 5 0和 Sephadex G- 2 0 0方法分离纯化麦穗鱼Pseudorasbora parva脑中的乙酰胆碱酯酶 (ACh E) ,然后比较分析纯酶液与粗酶液中鱼脑 ACh E的动力学特性和抗抑制性 ,以便更直接地了解底物与酶以及毒剂与酶的反应关系。研究结果表明 ,经过一系列步骤的纯化 ,最后所得的 ACh E是纯度较高的酶液 ;通过对 ACh E的动力学研究发现 ,纯化后的麦穗鱼脑 ACh E与底物之间的亲和力和其在粗酶状态时没有显著的差别 ,而且纯化后的鱼脑 ACh E对底物抑制作用更敏感 ;抗抑制性研究发现 ,纯化后的麦穗鱼脑 ACh E对经溴水氧化的马拉硫磷 (malathion)和三唑磷 (triazophos)的敏感性显著高于粗酶状态的 ACh E。

对有机磷农药敏感的海鱼脑AChE筛选研究

以10种海洋鱼类：鲅鱼、黄花鱼、鲈鱼、黄鱼、美国红鱼、真鲷、黑鲷、面包鱼、黑头鱼和鳗鲡为实验材料，采用半抑制浓度（IC50）和双分子速率常数（Ki）为指标，通过体外抑制作用比较了这10种海鱼脑AChE对马拉硫磷和甲基对硫磷的敏感性，并分析了海鱼脑AChE作为监测海水中有机磷农药指示酶的可行性，由此筛选出适于制备海水有机磷农药酶传感器的指示酶．实验表明：10种海鱼脑AChE的基础活性在4．62～35．65μmol／（min·g）之间，面包鱼的酶活性最高，黄花鱼的酶活性最低．对马拉硫磷，由IC50所得到的AChE敏感性为：鲅鱼、黄鱼、鲈鱼、真鲷〉黑鲷〉黑头鱼、鳗鲡〉美国红鱼、黄花鱼〉面包鱼；由Ki所得到的AChE敏感性为：鲅鱼〉黄鱼、鲈鱼、真鲷〉黑鲷、黑头鱼、鳗鲡〉美国红鱼、黄花鱼〉面包鱼．对甲基对硫磷，由IC50所得到的AChE敏感性为：鲅鱼〉鲈鱼〉黄鱼、黄花鱼、真鲷、黑鲷、黑头鱼、鳗鲡〉美国红鱼〉面包鱼；由Ki所得到的AChE敏感性为：鲅鱼〉鲈鱼、黄鱼、黄花鱼、黑鲷、黑头鱼、鳗鲡〉真鲷〉美国红鱼〉面包鱼．鲅鱼脑AChE对2种有机磷农药都较为敏感．影响鱼脑AChE对有机磷农药敏感性的主要因素为生物来源、农药种类和抑制方式，而与酶的基础活性无关．海鱼脑AChE活力抑制作用与水体中的有机磷农药具有良好的剂量-效应关系，在1～50mg／L浓度范围内，两者间呈现较好的线性相关性（r^2≥0．93）．根据AChE的敏感性及其对有机磷农药的线性响应程度，鲅鱼脑AChE适于作为监测马拉硫磷和甲基对硫磷酶传感器的指示酶．

海鱼AChE监测海水有机磷农药的可行性研究

有机磷农药 (OPs)对乙酰胆碱酯酶 (AChEEC 3.1 .1 .7)具有专一性抑制作用 ,因此AChE常作为淡水和土壤OPs污染的特异性标识物 (biomarker)。本文在海水背景下 ,通过测定两种有机磷农药 (马拉硫磷和甲基对硫磷 )对海洋鱼类—鲈鱼 [Lateolabraxjaponicus(cuvier) ]脑组织AChE的抑制效应 ,分析了海鱼AChE监测海水OPs的可行性。结果显示 ,抑制时间为 2 0min时 ,抑制程度达到相对稳定 ;在低浓度OPs抑制下 ,纯酶液比粗酶液表现出更好的敏感性 ,对马拉硫磷和甲基对硫磷的灵敏度分别达到 0 .2 8μg·L 1和 0 .2 μg·L 1;在一定浓度范围内 ,AChE活力对OPs具有显著的线性响应。研究表明 ,利用鲈鱼AChE指示和监测海水OPs的微污染是完全可行的。

黄鱼(Hexagrammosotakii)脑组织AChE的亲和层析

采用亲和层析法对黄鱼脑组织的乙酰胆碱酯酶进行分离纯化。纯化酶最大比活力为6 3.1 36 U /mg蛋白 ,最适 p H为 8,最适反应温度为 35℃。此酶经过 SDS- PAGE呈一条带 ,表明其纯度达电泳纯。对纯化酶进行底物特异性、过量底物抑制效应和抑制剂选择性检验 ,结果证实该酶为乙酰胆碱酯酶。

有机磷农药对海洋动物乙酰胆碱酯酶(AChE)的毒性效应研究进展

近几十年来，农业和海水养殖业所使用的有机磷农药 (OPs) 造成沿岸海水的严重污染，威胁到海洋动物的生存。有机磷农药的海洋生态毒理学研究已经成为海洋环境科学中的热门领域之一。作为动物神经传导过程中的关键酶，乙酰胆碱酯酶 (AChE) 能够被有机磷农药专一性抑制，因此，有机磷农药对海洋动物 AChE 的影响受到更多的关注。本文以近年来该领域的研究成果为基础，综述了有机磷农药对海洋动物乙酰胆碱酯酶的毒性效应。

溴氰菊酯对草鱼鱼种脑AchE及ATP酶活性的影响

本试验研究了溴氰菊酯对草鱼鱼种的急性毒性效应以及溴氰菊酯对草鱼鱼种脑ＡｃｈＥ及ＡＴＰ酶活性的影响。结果表明，溴氰菊酯对规格Ⅰ（平均体重８．２１ｇ）、规格Ⅱ（平均体重６６．６ｇ）草鱼鱼种９６ｈ半数致死浓度（９６ｈＬＣ５０）分别为２．１６μｇ／Ｌ、４．２６μｇ／Ｌ，９５％置信区间分别为１．９３～２．４２μｇ／Ｌ、３．８２～４．７５μｇ／Ｌ，离体条件下对草鱼种脑Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活性抑制显著，呈一定的浓度－效应关系，回归方程ｙ＝５．８９＋０．３２ｘ（ｒ＝０．９２）；对离体、活体脑ＡｃｈＥ、离体脑Ｎａ＋Ｋ＋－ＡＴＰ酶活性无显著影响。

基于固定化AChE的流动注射型酶传感器研究

以固定化鲅鱼脑组织乙酰胆碱酯酶[acetylcholinesterase，ACHE（EC3．1．1．7）]为识别元件，以pH电极为换能器，构建流动注射型AChE酶传感器．该传感器在以磷酸盐缓冲液为载液的条件下具有良好的重现性（RSD=1．427%，n=10）和敏感性，可实现对有机磷化合物的在线监测；对甲基对硫磷具有线性响应的浓度范围为4.29×10^-10～4.29×10^-8mol·L^-1，最低检测限为1．3×10^-10mol·L^-1。在以清洁海水为载液条件下，该传感器对海水中甲基对硫磷的敏感性较差，但是采用NaCIO溶液对海水中甲基对硫磷进行预氧化后，传感器对其的最低检测限可达到2．16×10^-7mol·L^-1。

麦穗鱼脑AChE间接非竞争ELISA定量分析法的建立

用PEG2000双水相萃取、DEAE-SephadexA-50和SephadexG-200方法分离纯化麦穗鱼Pseudorasboraparva脑中的乙酰胆碱酯酶(AChE),并制备了兔抗麦穗鱼脑AChE抗血清。用兔抗麦穗鱼脑AChE抗体连接抗原,建立了定量分析麦穗鱼脑AChE的间接非竞争酶联免疫吸附法(Indirectandnon-competitiveELISA),此法操作简便、灵敏度高,适用于定量检测。该方法的建立有利于AChE在环境科学和农药学研究领域的进一步研究和应用。

马醉木二萜成分及其乙酰胆碱酯酶抑制活性研究

为研究马醉木叶中的二萜成分及其乙酰胆碱酯酶抑制活性,该研究根据薄层色谱显色特征,使用硅胶、MCI和半制备高效液相等色谱技术对其进行分离与纯化,并通过波谱数据(NMR和MS)分析且结合文献报道数据进行对比,鉴定了所得化合物的结构,同时采用Ellman法首次对其乙酰胆碱酯酶抑制活性进行评价。结果表明:从马醉木叶中分离并鉴定了8个二萜化合物,分别是pierisformoside F(1)、3-epi-grayanotoxinⅩⅧ(2)、3-epi-grayanotoxin B(3)、asebotoxin-X(4)、pierisformosin B(5)、asebotoxinⅢ(6)、rhodojaponinⅢ(7)和pierisformosin C(8)。其中,化合物1为首次从该植物中分离得到,化合物8表现出乙酰胆碱酯酶抑制活性。综上表明,马醉木中含有丰富的二萜成分和活性成分。该研究结果丰富了马醉木的化学成分多样性,为其后续综合开发和利用提供了一定的理论依据,也为寻求更多的活性成分提供了借鉴。

鲅鱼脑组织AChE的分离纯化及某些生化性质

采用亲和层析法对鲅鱼[Scomberomorus niphonius （Cuvier）]脑组织的胆碱酯酶[acetylcholinesterase （ACHE），EC3．1．1．7]进行分离纯化，然后对其进行底物特异性、过量底物抑制效应和抑制剂选择性检验。结果证实：该酶为乙酰胆碱酯酶（ACHE），其最大比活力为297．82μmol／（min·mg），最佳pH范围在7．0～8．0之间，最佳温度为30℃。此酶经过SDS—PAGE呈一条带，表明其纯度达电泳纯。

重金属污染条件下花背蟾蜍跳跃能力与骨骼肌ATP酶和AChE活性变化研究

以相对无污染的刘家峡地区和重金属污染较重的白银地区为研究样点,以黄河流域广泛分布的花背蟾蜍Bufo raddei为研究对象,对比调查研究了两地花背蟾蜍成体的单次跳跃能力以及后肢骨骼肌组织中与运动密切相关的总ATP酶、Ca2+-ATP酶、AChE活性的变化情况。结果显示,与相对无污染的刘家峡地区相比,白银地区花背蟾蜍成体的跳跃能力极显著降低,说明重金属污染对蟾蜍运动能力有一定的影响,使其减弱。白银地区蟾蜍骨骼肌中总ATP酶、Ca2+-ATP酶、AChE活性均呈升高趋势,分别达刘家峡地区的1.91、2.64和1.37倍,酶活性的升高可能与低浓度重金属诱导有关。导致花背蟾蜍跳跃能力下降的途径及机理还需要进一步深入研究。

家蝇AChE检测毒死蜱残留的最佳条件研究

以纯化的家蝇(Museadomestica)乙酰胆碱酯酶(AChE)为试验材料,研究了缓冲液pH值、底物(ATCh)浓度、温度三个因素对酶活性的影响。结果表明:在pH值为8.5￣9.0,温度为30℃,底物浓度为2.5mmol/L的条件下,该酶具有最大活性。在此基础上,测定了不同pH值的缓冲反应体系和不同抑制时间条件下毒死蜱(Chiorpyifos)对AChE活性的抑制,发现pH值为8.0时AChE对毒死蜱最为敏感,而且对毒死蜱具有良好的线性响应关系(R2=0.9973),半抑制浓度仅为39.1μg/(L抑制时间为20min),检测下限为4.4μg/L。随着抑制时间的延长,毒死蜱对AChE的抑制程度逐渐增强,检测限可进一步降低。可见家蝇AChE是指示环境中毒死蜱污染程度的良好材料。

甘草不同溶剂提取物对AChE、ACE以及α-葡萄糖苷酶的抑制活性和对亚硝酸根清除活性的研究

目的:研究甘草不同溶剂提取物对α-葡萄糖苷酶、乙酰胆碱酯酶(ACh E)、血管紧张素转化酶(ACE)活性的影响以及对亚硝酸根离子的清除能力。方法:采用高效液相色谱法测定甘草不同溶剂提取物对ACE的抑制作用,采用分光光度法测定其对α-葡萄糖苷酶、ACh E的抑制作用及对亚硝酸根离子的清除能力。结果表明:甘草石油醚、乙酸乙酯、乙醇提取物均对α-葡萄糖苷酶有较好的抑制作用,其IC_(50)值分别为3.212、0.151、0.891 mg/m L,优于阳性药阿卡波糖;甘草提取物乙酸乙酯部位、水部位对ACh E有较强的抑制作用,其IC_(50)值为0.489、0.872 mg/m L,优于阳性药利斯的明;甘草乙酸乙酯提取物对亚硝酸根离子有较强的清除能力,其IC_(50)值为1.068 mg/m L,优于阳性药V_C;甘草乙酸乙酯提取物对ACE有较强的抑制作用,其IC_(50)值为0.815 mg/m L,优于其阳性药卡托普利。在这5种甘草不同溶剂提取物中,甘草乙酸乙酯提取物抑制活性最强。结论:甘草乙酸乙酯提取物具有很强的α-葡萄糖苷酶、ACh E、ACE抑制作用且对亚硝酸离子有很好的清除能力。

大鼠脑缺血再灌注后海马组织AchE活力的动态观察

目的观察大鼠脑缺血再灌注后海马组织AchE活力的动态变化.方法阻断大鼠双侧颈总动脉进行脑缺血再灌注,于术后第1,7,15 d用比色法测海马组织AchE活力.结果第1,7 d模型大鼠AchE活力分别是(170.95±10.44)mmol·L-1,(168.34±12.02)mmol·L-1,较正常组明显降低(P＜0.01),且7 d组AchE活力低于1 d组,随着缺血再灌注损伤的修复,15 d组AchE活力明显回升.结论 AchE活力降低在缺血再灌注脑损伤中起重要作用.

二硫代磷酸酯类对尼罗罗非鱼和鲮体内AChE酶活性的影响

为探明二硫代磷酸酯类对尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)的特异性毒性机理,以尼罗罗非鱼和土鲮(Cirrhinus molitorella)为试验对象,研究暴露在不同药物质量浓度(0.05、0.1 mg/L)和不同时间下2种鱼的生存状况以及体内乙酰胆碱酯酶(ACh E)活性的变化。结果表明:在急性毒性试验及清水恢复的整个过程中,暴露在0.05、0.1 mg/L药液中的尼罗罗非鱼和鲮的死亡率分别为100%和0;尼罗罗非鱼和鲮的脑及肝脏中的ACh E酶活性呈现出随药物暴露浓度和时间的增加而显著降低的趋势,但尼罗罗非鱼体内ACh E酶活性的下降幅度显著高于鲮(P<0.05),且呈现不可逆的趋势;在10 d清水恢复后,暴露在0.05、0.1 mg/L药液中的鲮脑中的ACh E酶活性复原度高达96.25%、79.33%。由此得出,低剂量的二硫代磷酸酯类对尼罗罗非鱼具有高毒性,而对鲮的毒害作用较小,其特异性的毒杀机制可能源于2种鱼体内ACh E酶活性对二硫代磷酸酯类敏感性的显著性差异。

受马拉硫磷抑制的麦穗鱼 (Pseudorasbora parva)脑乙酰胆碱酯酶 (AChE)的恢复(英文)

研究了受亚致死剂量马拉硫磷抑制的麦穗鱼 (Pseudorasboraparva)脑乙酰胆碱酯酶 (AChE)的活性恢复。马拉硫磷处理浓度分别为 0 .5mg L、1.0mg L、2 .0mg L ,约为LC5 0 的 1 2 0、1 10、1 5。处理 48h后 ,AChE抑制率随浓度升高而增加 ,分别为 33.76 %、5 7.89%、6 3.0 5 %。恢复 12 0h后 ,0 .5mg L处理过的鱼AChE恢复到了对照的 80 %以上 (80 %被认为是鱼的安全限 ) ;1.0mg L处理过的鱼经 2 88h也恢复到了对照的 80 %以上 ;而 2 .0mg L处理过的鱼恢复 36 0h还低于对照的 6 0 %。恢复期间后两个处理鱼AChE活性差异加大。

Fe^(3+)对泥鳅脑组织AChE活性的影响

以泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)为材料,比较了脑、肠、肝脏和胰脏的乙酰胆碱酯酶(Acetylcholin esterase,AChE)活性,然后采用体内染毒的方法,研究Fe3+对脑组织AChE活性的影响。结果表明,1%组织匀浆液中,脑、肠、肝脏、胰脏组织中AChE活性分别是1.42、0.35、0.06、0.15 U/mg;14 d后,与对照组相比,在60 mg/L Fe3+溶液中,泥鳅脑组织中AChE活性显著降低(P<0.05),表明Fe3+对泥鳅具有神经毒性。

落叶松毛虫AChE最佳反应体系建立及其对3种杀虫剂敏感性比较

通过正交试验和酶活性测定法研究了落叶松毛虫6龄幼虫乙酰胆碱酯酶(AChE)最佳反应体系及对3种杀虫剂的敏感性。结果表明:落叶松毛虫6龄幼虫AChE最佳反应条件为酶液质量浓度0.2g/mL、底物浓度0.8mmol/L、反应体系pH7.5、水浴温度35℃和反应时间5min。敌敌畏、高效氯氟氰菊酯和阿维菌素对落叶松毛虫6龄幼虫体外AChE活性产生不同的抑制作用,且抑制效应与杀虫剂呈现明显的剂量--效应关系;其中敌敌畏抑制效果最显著(IC50=3.018×10-4mg/mL),其次是高效氯氟氰菊酯(IC50=1.436×10-2mg/mL),而阿维菌素对AChE活性抑制效果最弱。

丹参酮对D-半乳糖-Aβ_(1-40)致痴呆大鼠海马内Aβ和AChE的影响

目的探讨丹参酮对D-半乳糖-Aβ1-40致复合痴呆模型大鼠海马内β-淀粉样蛋白(Aβ)和乙酰胆碱酯酶(AChE)表达的影响。方法实验动物随机分成AD模型组、丹参酮治疗组和溶媒对照组。采用免疫组织化学和酶组织化学方法,分别观察大鼠海马内Aβ和AChE表达的变化。结果AD模型组大鼠海马内Aβ-ir细胞数显著增多,平均光密度增强;AChE阳性神经纤维受损,光密度下降(含阳性面积百分比和光密度);与溶媒对照组比较差异显著(P<0.01)。丹参酮处理后,Aβ-ir细胞数明显减少,光密度也下降;AChE阳性神经纤维密度增强,与AD模型组比较差异有显著性意义(P<0.01)。结论丹参酮改善D-半乳糖-Aβ1-40致复合痴呆大鼠学习记忆障碍的作用机制,可能与降低海马内Aβ的表达而保护脑内胆碱能神经有关。