响应面法优化牛膝多糖的微波法提取工艺研究

采用响应面法优化微波提取怀牛膝多糖的条件。在单因素试验的基础上,选取微波提取功率、提取时间、料液比和提取次数为影响因子,应用Box-behnken中心组合进行四因素三水平的试验设计,以怀牛膝多糖得率作为响应值,进行响应面分析(RSM)。结果表明,微波法提取多糖的最佳工艺参数为提取功率800 W,提取时间2.5 min,料液比1∶30(g∶mL),提取次数2次,模型预测值为29.38%,实际测得多糖得率为29.40%,与模型预测值的相对误差为0.07%,模型预测值为与模型预测值基本相符。微波辅助法适用于提取怀牛膝多糖。

中药牛膝中化学成分的研究

目的对牛膝 (AchyranthesbidentataBl.)的化学成分进行分离、鉴定。方法采用硅胶吸附柱色谱 ,分配柱色谱等分离手段 ;利用理化性质、理化反应以及波谱技术 (NMR、MS等 )对化合物进行鉴定。结果得到 5个化合物 :5 羟甲基糠醛 ( 5 hydroxymethylfuraldehyde) ( 1 ) ,人参皂苷Ro( gin senosideRo) ( 2 ) ,竹节参皂苷 1 (PJS 1 ) ( 3) ,polypodineB( 4 ) ,β 蜕皮甾酮 (ecdysterone) ( 5 )。结论化合物 1～ 4为首次从牛膝中分离得到。

用超临界流体色谱法测定怀牛膝及其制剂中齐墩果酸的含量

采用超临界流体色谱法(SFC)分别测定了不同产地的怀牛膝药材及三种含怀牛膝的制剂中齐墩果酸的含量。方法简单、快速。不需经特殊的纯化处理。各产地药材齐墩果酸含量波动较小(1.75～2.19％,x±SD=1.94±0.17％),可以作为药材与制剂质量评价的指标,药材的加样回收率为97.42％(n=18,RSD=2.80％);制剂天麻丸的加样回收率为94.82％(n=9,RSD=2.51％)。

怀牛膝的三萜皂苷成分研究

目的对怀牛膝(AchyranthesebidentataBl.)根中三萜皂苷类成分进行研究,阐明其药效物质基础。方法利用硅胶柱、ODS柱、制备液相等进行分离,利用光谱技术和化学常数鉴定化合物的结构。结果分离并鉴定了7个化合物:即齐墩果酸(Ⅰ),竹节参皂苷-1(Ⅱ),齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(Ⅲ),齐墩果酸-3-O-β-D-(6′-丁酯)-吡喃葡萄糖醛酸苷(Ⅳ),齐墩果酸-3-O-β-D-(6′-甲酯)-吡喃葡萄糖醛酸苷(Ⅴ),3-O-(β-D-吡喃葡萄糖醛酸)-齐墩果酸-28-O-(β-D-吡喃葡萄糖)(Ⅵ),chikusetsusaponinⅣaethylester(Ⅶ)。结论化合物Ⅳ,Ⅴ,Ⅶ为首次从该植物中分离得到。

反相高效液相色谱法测定怀牛膝中羟基促蜕皮甾酮的含量

AIM: To set up an assay method for the determination of ecdysterone (EDS) in the root of Achyranthes bidentata Bl. by RP HPLC. METHODS: The EDS was separated on a Hypersil ODS column (200 mm×4 6 mm ID, 5 μm), using acetonitrile — water (1 0∶5 4) as the mobile phase and detected at 243 nm. The flow rate was 1 0 mL·min -1 . Phenol was used as an internal standard. RESULTS: The calibration curve was in good linearity over the range of 28 04～280 40 μg (γ=0 9997). The average recovery was 95 2%. CONCLUSION: The method is simple, fast, sensitive and is suitable for quantitative analysis of EDS in the root of Achyranthes bidentata Bl.

怀牛膝中甾酮类成分的分离与鉴定

为了阐明怀牛膝中具有促进成骨细胞增殖作用的甾酮类化学成分,采用硅胶柱色谱、ODS反相柱色谱和制备型高效液相色谱等方法分离,从怀牛膝大孔树脂50%乙醇洗脱组分中分离得到了5个甾酮类化合物,并通过UV、NMR和MS等波谱确定了其化学结构分别为β-蜕皮甾酮(β-ecdysterone)(1)、25S-牛膝甾酮(25S-inokosterone)(2)、25R-牛膝甾酮(25R-inokosterone)(3)、旌节花甾酮C(stachysterone C)(4)和旌节花甾酮D(stachysterone D)(5),其中化合物旌节花甾酮C为首次从牛膝中分离得到。

牛膝中脱皮甾酮的含量测定及促成骨样细胞增殖活性

AIM To study the activity of ecdysterone from Achyranthes bidentata Bl. (AB) promoting proliferation of osteoblast like (OB like) UMR106 cells and to determine its content in AB by HPLC method. METHODS Ecdysterone isolated from AB was cultured with OB like cells UMR106 together in vitro and the proliferation of OB like cells was determined by MTT assay. The chromatographic conditions for determining ecdysterone included an ODS column (250 mm×4 6 mm, 5 μm), a mobile phase consisting of a mixture of water acetontrile tetrahydrofuran (86∶11∶3), detection wavelength of 243 nm, and column temperature of 27℃. Phenacetin was used as the internal standard. RESULTS The ecdysterone from AB had significant activity promoting proliferation of OB like cells, the proliferation was promoted by 41% ( n =3). The average recovery of ecdysterone was 96 2% (RSD=2 1%), the calibration was linear in the range of 30～300 μg·mL -1 (γ=0 9998). CONCLUSION Ecdysterone was screened quickly by cultivating with OB like cells together in vitro . The HPLC method is accurate, fast and reproducible for the determination of ecdysterone in AB.

牛膝“泛糖”机制研究

目的 对牛膝“泛糖”机制进行研究。方法 采用正交试验研究牛膝“泛糖”的主要影响因素。结果 环境温度是牛膝“泛糖”的主要因素 ,其次是相对湿度和药材水分。最佳贮藏条件是环境温度 2 5℃ ,相对湿度 6 0 % ,药材水分 11%。结论 牛膝药材在环境温度 35℃以下 ,相对湿度 70 %以下 ,药材水分 9%～ 13%条件下 ,可安全贮存。

怀牛膝毛状根诱导及培养体系的建立

以牛膝叶片为外植体,研究了不同发根农杆菌、培养基、乙酰丁香酮(AS)对毛状根诱导率及其生长的影响.结果表明,发根农杆菌不同菌种对牛膝叶片转化率有显著影响,3个供试菌种中ATCC15834菌株诱导率最高;在1/2MS无激素固体培养基上毛状根的诱导率及生长状况均优于MS培养基;100μmol·L-1 AS可以有效提高毛状根诱导率.毛状根从叶片形态学下端中脉切口处形成的愈伤组织上产生,能在无外源激素的培养基上自主生长.PCR扩增结果显示发根农杆菌Ri质粒的rolB基因已在牛膝毛状根基因组中插入、整合并得到表达.建立了牛膝毛状根诱导培养体系,为利用毛状根大规模生产药用成分奠定了基础.

怀牛膝愈伤组织诱导及分化的研究

对怀牛膝叶片和茎段愈伤组织的诱导及分化进行了研究.结果表明:KT 0.5 mg/L+2,4-D 1.5 mg/L对叶片愈伤组织的诱导效果最好,KT 0.5 mg/L+NAA 1.5 mg/L对茎段愈伤组织的诱导效果最好,出愈率均达100%;KT 0.5 mg/L+NAA 1.5 mg/L有利于叶片形成的愈伤组织分化为根,6-BA 0.5 mg/L+NAA 1.5 mg/L则有利于茎段形成的愈伤组织分化为芽.

牛膝提取物对成骨样细胞增殖的作用

考察了牛膝 (AchyranthesbidentataBl.)的不同提取部位对成骨样细胞UMR10 6的作用 .通过牛膝的醇提液及醇提液的不同提取部位和UMR10 6成骨样细胞共同体外培养 ,用MTT方法检测了各部位对细胞增殖的作用 ;同时考察了MTT法的实验条件 .结果表明 :牛膝的醇提液及其石油醚和乙酸乙酯萃取的混和物对细胞具有较强的促进增殖作用 ,而正丁醇层和水层对细胞增殖无影响 ;在MTT法中 ,铺板细胞浓度、检测波长和加入MTT后的孵育时间均影响吸光度值的测定 .

怀牛膝成分的分离与鉴定

目的进一步研究怀牛膝(AchyranthesbidentataBl.)的化学成分。方法反复利用正相和反相硅胶色谱进行分离和纯化,通过理化及波谱分析鉴定化合物结构。结果从正丁醇可溶部分中分离得到6个化合物,分别鉴定为齐墩果酸-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(oleanolicacid-3-O-β-Dglucuronopyranoside,1)、竹节参苷Ⅳa(chikusetsusaponinⅣa,2)、竹节参苷Ⅳa甲酯(chikusetsusaponinⅣamethylester,3)、竹节参苷Ⅳa丁酯(chikusetsusaponinⅣabutylester,4)、28去葡萄糖牛膝皂苷D甲酯(28deglucosylachyranthosideDmethylester,5)和牛膝甾酮(inokosterone,6)。结论化合物1～5为首次从该植物中分离得到。

怀牛膝中化学成分的分离与鉴定

目的:阐明怀牛膝中具有抗骨质疏松作用的化学成分。方法:采用硅胶柱色谱、ODS反相柱色谱和制备型高效液相色谱等方法分离,从怀牛膝大孔树脂50%乙醇洗脱组分中分离得到了5个化合物,并通过UV、NMR和MS等波谱确定了其化学结构。结果与结论:所分离得到的5个化合物分别为25,26-二去氢坡那甾酮A(25,26-dehydroponasteroneA)(1),红苋甾酮(rubrosterone)(2),小檗碱(ber-berine)(3),正丁基吡喃果糖苷(n-butyl-β-D-fructopyranoside)(4),邻苯二甲酸二丁酯(Dibutyl phthalate)(5),其中化合物25,26-二去氢坡那甾酮A为首次从牛膝中分离得到。

怀牛膝细胞悬浮培养及多糖含量变化的研究

采用正交实验设计研究基本培养基、碳源、2,4-D、6-BA、CH及接种量对怀牛膝悬浮培养细胞生长和细胞中多糖含量的影响。结果表明,(1)6-BA是影响怀牛膝细胞生长的关键因子,其影响效应依次为6-BA>CH>接种量>基本培养基>2,4-D>碳源,细胞生长的适宜培养基为MS+30 g/L葡萄糖+2 mg/L 2,4-D+1 mg/L 6-BA+0.5 g/L CH,适宜接种量为30 g/L。(2)碳源是影响细胞中多糖含量的关键因子,其影响效应依次为:碳源>2,4-D>6-BA>CH>接种量>基本培养基,利于细胞中多糖含量提高的适宜培养基为:LS+30 g/L蔗糖+0.5 mg/L 6-BA+0.5 g/L CH,适宜接种量为30 g/L。

中药牛膝化学成分的分离与鉴定

目的 对牛膝（Achyranthes bidentataB1．）的化学成分进行分离、鉴定。方法 采用硅胶吸附柱色谱，HPLC等分离手段对牛膝进行分离；利用理化性质、理化反应以及NMR、MS等波谱技术对化合物进行鉴定。结果分离得到5个化合物，分别鉴定为环（酪氨酸-亮氨酸）[cyclo-（-Tyr-Leu），1]、环（亮氨酸-异亮氨酸）[cyclo-（-Leu-Ile），2]、杜鹃花酸（nonanedioic acid，3）、琥珀酸（succinicacid，4）、正丁基-β-D-吡喃果糖苷（n-butyl-β-D-fructopyranoside，5）。结论 化合物1～3为首次从牛膝中分离得到。首次对化合物1和2进行了碳谱数据归属。

15种中草药提取液对怀牛膝根结线虫的杀虫杀卵效果

利用15种中草药水溶性提取液对怀牛膝根结线虫二龄幼虫及卵进行室内离体活性测定。结果表明,供试的15种中草药提取液对怀牛膝根结线虫幼虫和卵的毒杀活性差异显著,其中,用徐长卿、黄姜、喜树、藜芦提取液处理后,二龄幼虫72h的校正死亡率分别为95.46%、95.00%、91.79%、90.47%,杀线虫活性强度均达到"++++",1～30d卵的孵化抑制率分别为94.30%、94.13%、90.89%、91.13%,卵的校正死亡率分别为80.40%、82.23%、75.54%、78.87%。徐长卿、黄姜、喜树、藜芦提取液对怀牛膝根结线虫的杀虫、杀卵效果较好。

牛膝的HPLC/UV/MS指纹图谱研究

目的 :采用HPLC/UV/MS法构建牛膝药材的指纹图谱。方法 :采用AgilentZorbaxSB C18柱 ;甲醇与0 1%甲酸进行梯度洗脱 ;流速为 1 0ml/min。结果 :得到分离度、重现性均较好的牛膝药材HPLC/UV指纹图谱 ,标示了 4个共有峰 ,并借助HPLC/MS技术对其主要色谱峰进行了初步归属。结论 :牛膝药材指纹图谱的构建 ,为控制其质量提供了依据。

吲哚丁酸对怀牛膝幼苗生长及谷胱甘肽抗氧化酶系统的影响

对怀牛膝幼苗施加不同浓度的吲哚丁酸(IBA),研究IBA对其幼苗生长及谷胱甘肽抗氧化酶系统的影响.结果显示:1.0mg/L IBA能同时显著提高怀牛膝叶片中谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、谷胱甘肽还原酶(GR)、谷胱甘肽S-转移酶(GST)的活性及蛋白质含量(P<0.05),并能促进其幼苗株高、根长和根干重的增加.结论:1.0mg/L IBA促进了牛膝幼苗的生长,提高了叶片中谷胱甘肽抗氧化酶系统的活性及蛋白质含量,有效的增强了植株的抗逆性.

牛膝化学成分及其对细胞增殖影响

目的研究牛膝Achyranthis bidentata Bl.的化学成分及其对细胞增殖的影响。方法牛膝药渣水提物的分析采用Diaion HP-20大孔吸附树脂、Sephadex LH-20、ODS、硅胶以及HPLC制备柱进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。MTT法评价其对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖作用的影响。结果从中分离得到10个化合物,分别鉴定为cynarasaponin A(1)、人参皂苷R0(2)、竹节参皂苷Ⅳa(3)、竹节参苷Ⅳa甲酯(4)、竹节参皂苷Ⅳa乙酯(5)、竹节参皂苷Ⅳa丁酯(6)、竹节参皂苷1(7)、姜状三七苷R_1(8)、齐墩果酸-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(9)、齐墩果酸-3-O-β-D-葡萄糖醛酸乙酯(10)。化合物1、6、7、8对HUVEC增殖有明显的抑制作用。结论化合物1和10为首次从牛膝中分离得到,化合物1、6、7、8有较强的抑制细胞增殖作用。

牛膝类药材的生物学与化学成分的研究进展

牛膝类药材是我国传统的大宗药材之一,《中国药典》2005年版一部中将牛膝类药材分为牛膝和川牛膝2种收录。近年来国内外对牛膝类药材开展了多方面的深入研究。现就其原植物、营养器官和生殖器官的形态解剖、组织培养、指纹图谱、分子生物学、多倍体育种等生物学特性及其主要药用成分皂苷类、甾酮类、多糖类等的研究进行综述,以期为今后的研究提供参考。