鲍曼不动杆菌多黏菌素E耐药机制研究

为探讨鲍曼不动杆菌新的多黏菌素E耐药机制,采用体外诱导法将临床菌株和参考菌株诱导成多黏菌素E耐药株。利用生长曲线、生物膜形成、体外竞争和抗血清试验检测多黏菌素E耐药前后菌株生物学性状变化。PCR和qRT-PCR试验检测多黏菌素E耐药后相关基因序列及表达量的变化。结果表明:多黏菌素E耐药前后菌株生长曲线未发现显著差异。AB13-R耐药株生物膜形成能力显著增强,另外2菌株生物膜形成能力在耐药前后无显著差异。鲍曼不动杆菌获得多黏菌素E耐药后均表现出体外竞争缺陷。AB156-R与其敏感菌相比抗血清增强,而ATCC19606-R和AB13-R与其敏感菌相比抗血清降低。AB13-R中pmrB基因谷氨酸缺失,脂多糖(LPS)合成及脂质A合成基因下调,药物外排泵基因上调,达到LPS合成减少并降低菌体内药物浓度,使AB13-R对多黏菌素E耐药。ATCC19606-R及AB156-R中均无基因突变,可能由其他机制介导菌株对多黏菌素E耐药。综上,鲍曼不动杆菌获得多黏菌素E耐药后会出现适应性改变,pmrB基因中谷氨酸的缺失可能是新的多黏菌素E耐药机制。

头孢哌酮/舒巴坦与2种抗菌药物联用对多药耐药鲍氏不动杆菌药敏试验研究

目的评价头孢哌酮/舒巴坦与米诺环素、头孢哌酮/舒巴坦与左氧氟沙星联合用药,对110株临床分离的多药耐药鲍氏不动杆菌的体外抗菌效应。方法采用棋盘法设计,琼脂稀释法测定不同浓度组合的抗菌药物对110株临床分离的多药耐药鲍氏不动杆菌最低抑菌浓度,并计算部分抑菌浓度(FIC)指数判定联合效应。结果头孢哌酮/舒巴坦与米诺环素联用后,其MIC50显著降低,FIC指数分布:FIC≤0.5占53%,0.5<FIC≤1占39%,1<FIC≤2占8%,FIC>2为0;头孢哌酮/舒巴坦与左氧氟沙星联用后,其MIC50显著降低,FIC指数分布:FIC≤0.5占59%,0.5<FIC≤1占37%,1<FIC≤2占4%,FIC>2为0。结论头孢哌酮/舒巴坦无论是与米诺环素还是与左氧氟沙星联用,对多药耐药的鲍氏不动杆菌表现为协同作用和相加作用,并以协同作用为主,无关作用较少,无拮抗作用。

鲍氏不动杆菌的临床分布特征及耐药趋势分析

目的监测医院近年临床标本鲍氏不动杆菌的分布特点及其耐药情况,以指导临床合理用药。方法2004年1月-2006年12月从患者不同标本分离的鲍氏不动杆菌(API细菌鉴定试条鉴定到种),采用CLSI/NCCLS标准K-B法对临床常用抗菌药物进行耐药分析,WHONET5.4软件进行统计学分析。结果鲍氏不动杆菌2004-2006年检出率分别为2.5%、3.8%、10.9%,在临床分离的非发酵菌中仅次于铜绿假单胞菌位居第2位;标本主要来源于痰(78.0%),病房集中于中心ICU(29.2%)、呼吸内科(19.3%)、急诊病房(10.9%);该菌耐药现象严重,对哌拉西林、头孢噻肟、头孢曲松、氨曲南呈多药耐药,敏感度最高的是碳青酶烯类,约80.0%。结论鲍氏不动杆菌是引起医院感染的常见条件致病菌。该菌耐药性广,临床治疗应合理选择使用抗菌药物,加强医院环境和人员消毒,控制不动杆菌属在医院内的定值与播散。

2012年中国CHINET不动杆菌属细菌耐药性监测

目的了解2012年我国不同地区15所医院临床分离不动杆菌属细菌的构成、分布及其耐药性。方法共收集15所教学医院临床分离的8 739株不动杆菌属,其中鲍曼不动杆菌7 827株(89.6%)。按照统一方案,采用纸片扩散法或自动化仪器法进行药敏试验,结果按CLSI 2013年版标准判读,采用WHONET5.6软件进行数据分析。结果 8 739株不动杆菌属细菌主要分离自住院患者,占85.4%,门急诊患者占14.6%。26.4%不动杆菌属分离自ICU,其次为内科病房(22.0%)。鲍曼不动杆菌对替加环素、米诺环素和头孢哌酮-舒巴坦的耐药率最低,分别为10.9%、35.2%和35.7%,其次为阿米卡星(43.4%);对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为63.5%和68.2%。不同医院不动杆菌属细菌对抗菌药物的耐药率也有不同,不同科室分离株的耐药率也有不同,其中以ICU分离株耐药率最高。出现较多多重耐药(45.0%,3 521/7 827)和泛耐药(20.0%,1 567/7 827)株。结论鲍曼不动杆菌是不动杆菌属中最常见的菌种,检出率呈逐年增长的趋势。该菌对于除米诺环素、阿米卡星和头孢哌酮-舒巴坦外的大多数抗菌药物的耐药率在60.0%以上,且耐药率有逐年增高的趋势。不同地区医院鲍曼不动杆菌的耐药率相差较大,不同科室菌株的耐药率也有很大差异。

检测多药耐药鲍氏不动杆菌的碳青酶烯酶及整合酶基因

目的检测多药耐药鲍氏不动杆菌(MDRAba)的碳青酶烯酶及整合酶基因。方法从70株对耐亚胺培南鲍氏不动杆菌中用PCR方法测定碳青酶烯酶OXA23类、OXA24类、OXA51类和OXA58类基因及Ⅰ类和Ⅱ类整合酶基因,对扩增阳性的碳青酶烯酶基因进行测序分析;抗菌药物敏感试验采用琼脂稀释法。结果获得OXA-23类基因阳性56株,占80.0%,OXA-58类基因阳性1株,仅1株菌OXA51类基因阴性;Ⅰ类整合酶基因阳性61株,占87.1%,未测得OXA24类碳青酶烯酶和Ⅱ类整合酶基因;序列分析提示分离的CRAba为OXA-23型和OXA-58型,所测菌株对环丙沙星、头孢他啶、庆大霉素、哌拉西林/他唑巴坦高度耐药,对多黏菌素B一致性敏感。结论新近出现的CRAba菌株主要是以Ⅰ类整合子携带的OXA-23型碳青酶烯酶。

耐亚胺培南鲍曼不动杆菌耐药表型和碳青霉烯酶基因型分析

目的检测广州市第一人民医院20株耐亚胺培南鲍曼不动杆菌的耐药性,研究并分型其碳青霉烯酶基因。方法用法国生物梅里埃公司VITEK2全自动细菌鉴定仪进行菌株鉴定和药敏试验,用6种碳青霉烯酶特异性基因引物进行PCR扩增和基因型的测序分析,并通过网上GenBank进行比对以确定编码酶基因的类型。结果 20株鲍曼不动杆菌对哌拉西林-他唑巴坦、左氧氟沙星和阿米卡星的耐药率分别为85%、50%和25%。对其他所测抗菌药的耐药率均在90%以上。扩增结果显示17株(85%)细菌携带碳青霉烯酶OXA-23基因,16株(80%)携带OXA-51基因,1株(5%)携带OXA 58基因。OXA-24、VIM、IMP基因引物PCR扩增均为阴性,随机抽取OXA-23基因阳性株进行双向测序后在网上GenBank比对与OXA-23标准株99%同源,OXA-51基因阳性株与OXA-66标准株99%同源,OXA-58基因阳性株与OXA-58标准株99%同源。结论我院耐碳青霉烯类抗生素的鲍曼不动杆菌呈现出多重耐药现象,对阿米卡星的耐药率最低,OXA-23型碳青霉烯酶基因检出率最高,OXA-23/OXA-51类基因占60%,应引起临床高度重视,防止在医院内广泛传播。

从鲍氏不动杆菌检出β-内酰胺酶ADC新变型耐药基因

目的研究医院临床分离的1株鲍氏不动杆菌耐药基因。方法应用法国生物梅里埃公司的API鉴定条/PSE5.0药敏条和美国BD公司的Phoenix NMIC/ID-109鉴定/药敏板鉴定和细菌药敏试验,应用PCR法检测1株鲍氏不动杆菌临床分离株29种β-内酰胺酶基因,并对PCR阳性产物测序和采用GenBank中的BLAST程序进行同源性分析。结果此株鲍氏不动杆菌2种方法药敏结果均为全耐药;2种β-内酰胺酶基因blaTEM和β-内酰胺酶ADC基因(blaADC)均呈阳性,测序和同源性分析证实为blaTEM、blaADC基因,blaADC为新变型(blaADC-泉州),GenBank注册号为EU200768。结论此株鲍氏不动杆菌携带2种基因blaTEM和β-内酰胺酶ADC基因,blaADC为新变型(blaADC-泉州)。

多黏菌素B与美罗培南对110株多药耐药鲍氏不动杆菌联合药敏研究

目的评价多黏菌素B与美罗培南联合用药,对110株临床分离的多药耐药的鲍氏不动杆菌的体外抗菌效应。方法采用棋盘法设计,琼脂稀释法测定不同浓度组合的抗菌药物,对110株临床分离的多药耐药鲍氏不动杆菌最低抑菌浓度(MIC),并计算FIC指数,判定联合效应;FIC≤0.5μg/ml为协同作用,0.5μg/ml<FIC≤1为相加作用,1<FIC≤2μg/ml为无关作用,MIC>2为拮抗作用。结果美罗培南与多黏菌素B联用后,其MIC50显著降低;部分抑菌指数(FIC)分布:FIC≤0.5μg/ml具有协同作用占92%;0.5μg/ml<FIC≤1相加作用占8%;1<FIC≤2μg/ml和MIC>2μg/ml无关作用和拮抗作用为0。结论结果表明两药联用,对多药耐药的鲍氏不动杆菌表现为协同作用和相加作用,并以协同作用为主,无无关和拮抗作用。

2008至2012年鲍曼不动杆菌临床感染分布及耐药特征分析

目的：了解华山医院2008年1月至2012年9月临床分离鲍曼不动杆菌的临床分布特征及对抗菌药物的耐药性变迁，为临床合理使用抗菌药物提供依据。方法采用纸片琼脂扩散法药物敏感性试验分析鲍曼不动杆菌对临床常用抗菌药物的耐药性及其耐药性变迁。结果近5年，临床分离鲍曼不动杆菌以痰标本检出率最高，科室分布主要为神经外科和重症监护病房，其中神经外科该菌的分离率呈现明显上升趋势，从2008年的19．6％上升到2012年的35．3％。临床分离鲍曼不动杆菌耐药严重，其中对碳青霉烯类抗菌药物的耐药率上升最为明显，对亚胺培南的耐药率从2008年的57．5％上升至2012年的71．2％；对美罗培南的耐药率从2008年的56．8％上升至2012年的71．7％。对其他内酰胺类、头孢菌素类、氨基糖苷类、喹诺酮类等抗菌药物的耐药率总体维持在70．0％～80．0％之间。结论鲍曼不动杆菌感染在神经外科和重症监护病房最为严重，且对常用药物普遍耐药，对碳青霉烯类抗菌药物的耐药率呈明显上升趋势，应加强鲍曼不动杆菌耐药监测，防止耐药菌的播散流行。

全耐药鲍氏不动杆菌耐药基因的检测及研究

目的研究全耐药鲍氏不动杆菌相关耐药基因的流行情况。方法对临床分离的17株鲍氏不动杆菌进行菌株鉴定和药敏试验,并运用PCR方法检测相关耐药基因。结果17株鲍氏不动杆菌对医院检测的抗菌药物全部耐药;17株菌中TEM-1、OXA-23、OXA-27、gyrA和AmpC基因的检出率为100.0%,2株菌携带aacC1基因(11.8%),9株菌携带PER-1基因(52.9%)。结论医院鲍氏不动杆菌流行株主要携带TEM-1、OXA-23、OXA-27、gyrA、AmpC、aacC1和PER-1等多个耐药基因,基因型与表型基本一致,临床工作中医生应重视全耐药鲍氏不动杆菌的诊断与治疗,减少交叉感染的发生,加强医院感染的控制。

南京地区鲍曼不动杆菌中整合子流行现状及携带的耐药基因分析

目的研究南京地区鲍曼不动杆菌中整合子的流行现状、与耐药的相关性及携带的耐药基因。方法收集106株南京地区鲍曼不动杆菌,纸片扩散法测定其药敏情况;PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)筛查整合子并分类;PCR法扩增整合子可变区;联合RFLP和DNA测序技术分析整合子携带的耐药基因。结果52.8%(56/106)鲍曼不动杆菌检出整合子,PCR—RFLP结果显示均为Ⅰ类整合子;94.6%(53/56)整合子阳性菌株可变区扩增阳性,扩增片段大小为0.15～2.8kb;共检出7种不同的可变区,含有编码对氨基糖苷类抗生素(aadA1、aadA2、aadA5、aadB、aacA4)、磺胺类抗菌药(dfrⅫ、dfr17)、β内酰胺类抗生素(bla_(axa-10))和氯霉素(catB-like、catB8)耐药的基因及2个功能不清的开放阅读框(orfF、orfI);发现1例新型基因盒组合形式orfI—aadA1,GenBank基因号为DQ092497。结论Ⅰ类整合子广泛存在于南京地区鲍曼不动杆菌中;整合子与鲍曼不动杆菌的耐药和多重耐药有关;鲍曼不动杆菌整合子主要携带氨基糖苷类耐药基因。

连续4年鲍曼不动杆菌感染分布及耐药性变迁

目的了解某院鲍曼不动杆菌(AB)在医院感染中的分布及耐药性变迁,为临床合理用药提供依据。方法对2008年1月—2011年12月住院患者送检的各类标本进行细菌培养分离,采用VITEK 2-compact全自动微生物仪进行菌株鉴定,K-B纸片扩散法检测抗菌药物的敏感性。结果 4年共分离AB 597株。AB在革兰阴性杆菌中所占比率,2008—2011年分别为:7.00%、8.35%、9.75%和12.66%,2011年较2008年明显上升,差异有统计学意义(χ2=32.77,P<0.05)。标本来源以痰标本最多,占70.86%;主要分离自老年病房(177株,29.65%)、肿瘤科(115株,19.26%)和神经内科(93株,15.58%)。AB对常用抗菌药物的耐药率在4年间均有逐年上升趋势(P<0.05);2011年AB对美罗培南、头孢哌酮/舒巴坦、米诺环素的耐药率较低,分别为8.56%、6.95%、5.35%。结论 AB的感染率和耐药率不断升高,加强对AB的监测,有利于临床合理选择抗菌药物,减少耐药菌株的产生与传播。

20株多药耐药鲍氏不动杆菌β-内酰胺酶基因研究

目的了解多药耐药鲍氏不动杆菌(MDR-ABA)β-内酰胺酶基因存在情况。方法采用PCR对20株MDR-ABA进行了blaTEM、blaSHV、blaPER、blaGES、blaIMP、blaVIM、blaSIM、blaOXA-23群、blaADC、blaDHA等基因检测研究。结果20株MDR-ABA中blaADC阳性18株(90%)、blaTEM阳性11株(55%),其余基因均阴性;共有19株(95%)检出β-内酰胺类药物耐药相关基因;本研究blaADC DNA序列与美国核酸库已登录的blaADC序列分子进化分析为新亚型。结论blaADC、blaTEM基因在本组MDR-ABA中流行,并且有blaADC新亚型发现。

重症监护病房老年患者鲍曼不动杆菌感染的临床特点及药敏分析

目的 探讨重症监护病房（ICU）老年患者鲍曼不动杆菌感染的临床分布特点及药敏分析。方法 选取2013年1月至2015年12月本院ICU住院鲍曼不动杆菌感染老年患者220例,送检的各种临床标本中分离培养细菌,使用Bio-Merieux公司生产的VITEK-32型全自动微生物鉴定分析仪进行细菌鉴定。应用WHONET5.6软件进行数据处理分析。结果 共分离出鲍曼不动杆菌259株。其中痰标本分离出185株（71.43%）;引流液分离出34株（13.13%）;血标本中分离出16株（6.18%）;其他标本分离出24株（9.26%）。鲍曼不动杆菌感染的老年患者中男多于女,感染患者及分离出的菌株数逐年增加。鲍曼不动杆菌对抗菌药物呈现广泛耐药性,但对替加环素的敏感性最高（70.13%~80.85%）,耐药性最低（0~23.38%）。结论 鲍曼不动杆菌对不同抗菌药物的药敏性不同,临床上抗感染治疗应以本地区分离菌株的体外抗菌药物敏感性试验结果为依据,选择敏感的抗菌药物进行治疗。

SHV型β内酰胺酶新亚型SHV-71的发现

目的了解鲍曼不动杆菌中SHV型β内酰胺酶的基因型及其耐药性。方法采用纸片扩散法(K-B法)测定5株鲍曼不动杆菌对13种抗菌药物的敏感性;设计SHV型β内酰胺酶引物,采用PCR法获得SHV型酶编码基因的片段,并将PCR扩增产物克隆入pMD18-T载体,以双脱氧链终止法测定核苷酸序列,确定亚型。结果药敏试验结果显示:5株鲍曼不动杆菌对氨苄西林、哌拉西林、头孢西丁、头孢他啶和氨曲南均耐药。3株菌SHV基因型扩增结果呈阳性,其中2株与SHV-12的序列100%相同,另1株(No-03)经GenBank网上同源性比较,未发现完全相同的核苷酸和氨基酸序列,为一种新发现的SHV亚型β内酰胺酶耐药基因,其序列以SHV-71的名称在美国核酸数据库GenBank成功登录(GenBank注册号:DQ296194)。结论临床分离的鲍曼不动杆菌No-03株所产SHV型BLA为一种新SHV亚型β内酰胺酶。

鲍氏不动杆菌连续分离株季胺类化合物耐药基因与Ⅰ类整合酶基因的研究

目的探讨临床分离的鲍氏不动杆菌（ABA）对常用抗菌药物的耐药性与季胺类化合物（消毒剂）耐药基因（qacE△1）、Ⅰ类整合酶（intⅠ1）基因存在状况。方法采用K-B法测定临床连续分离株对抗菌药物的敏感性,采用PCR检测qacE△1和intⅠ1基因。结果85株ABA对13种抗菌药物的耐药率在8.2%~81.2%;qacE△1基因和intⅠ1基因阳性66株（77.6%）。结论ABA具明显的多药耐药特征,qacE△1和intⅠ1基因携带率很高,对临床消毒剂的选择需重新评价。

鲍氏不动杆菌致呼吸机相关性肺炎的临床分析

目的为防治鲍氏不动杆菌致呼吸机相关性肺炎(VAP)提供科学依据。方法回顾性分析重症监护病房(ICU)自2003年1月-2006年12月鲍氏不动杆菌致VAP的62例住院患者临床资料及药敏情况。结果鲍氏不动杆菌所致VAP均有较严重的基础疾病,老年患者占77.4%,发病前曾使用过≥1种抗菌药物,30.6%有混合感染;鲍氏不动杆菌所致VAP有逐年上升趋势;药敏结果显示,鲍氏不动杆菌具有多药耐药性,对头孢哌酮/舒巴坦、亚胺培南/西司他丁的耐药性较低。结论应根据鲍氏不动杆菌致VAP的病原学分布特点及药敏情况,合理选择抗菌药物。

耐亚胺培南/西司他丁鲍曼不动杆菌的分离及耐药性

目的了解耐亚胺培南/西司他丁(IPM)鲍曼不动杆菌(Ab)在某院的分离及其耐药性。方法收集该院2006年1月—2010年12月临床各类标本,除血培养采用美国BD公司BACTEC9120进行检测,其余标本按常规方法培养分离细菌;在Phoenix 100全自动分析系统和配套试剂中,对菌株进行鉴定及药敏试验。采用2-巯基丙酸抑制试验测定金属酶。结果检出154株耐IPM的Ab,主要分离自痰及咽拭子标本,占74.03%;科室分布:主要分布于重症监护室(98株,63.64%)、神经科(25株,16.23%)、烧伤科(13株,8.44%)、呼吸内科(8株,5.19%)、老年内科(4株,2.60%)、普通外科和血液科(各3株,1.95%)。耐IPM的Ab对头孢哌酮/舒巴坦耐药率最低,为42.21%;对其他抗菌药物的耐药率均>65%。耐IPM的Ab产金属酶率为14.94%(23/154)。结论耐IPM的Ab主要来源于呼吸道感染标本,对抗菌药物敏感率较低。加强监控和优化抗菌药物的使用,对控制耐IPM的Ab在医院内流行有重要意义。

替加环素治疗肺结核并发鲍曼不动杆菌性呼吸机相关性肺炎的临床研究

分析本院2014年1月至2016年8月收治的32例肺结核患者并发鲍曼不动杆菌性呼吸机相关性肺炎而使用替加环素治疗的临床资料。4例单独用药，28例联合用药，其中26例（81．2％）患者临床治疗有效，6例（18．7％）临床治疗失败；26例治疗有效患者中23例（71．9％）获得细菌学清除。替加环素单独或与其他药物联合，可以作为肺结核患者并发鲍曼不动杆菌性呼吸机相关性肺炎的治疗选择。

噬菌体治疗泛耐药鲍氏不动杆菌重症感染小鼠的研究

目的探讨噬菌体治疗泛耐药鲍氏不动杆菌重症感染小鼠的疗效。方法以SPF级昆明小鼠建立小鼠感染泛耐药鲍氏不动杆菌的模型,分为实验组和对照组,实验组使用噬菌体AB46治疗,对照组给同等体积的肉汤治疗,统计比较两组小鼠的生存率,进行脾菌数分析。结果泛耐药鲍氏不动杆菌1∶10稀释实验组与对照组P=0.020<0.05,有统计学差异;1∶2、1∶5稀释组分别为P=0.650,P=0.170,均>0.05,无统计学差异;1∶50稀释的实验组与对照组均无小鼠死亡,脾菌数计数结果 P=0.026,有统计学差异。结论噬菌体治疗泛耐药鲍氏不动杆菌重症感染小鼠是一种有效的治疗方法,可明显提高小鼠的生存率,在感染较轻的情况下可以明显降低小鼠的脾菌数。