达沙替尼抑制前列腺癌细胞雄激素受体磷酸化机制研究

目的探讨酪氨酸激酶抑制剂达沙替尼抑制前列腺癌细胞雄激素受体（AR）磷酸化的机制。方法以HEK-293T及COS7细胞株为研究对象，野生型AR（WT-AR）载体及其突变载体ARY267F、ARY534F分别与Ack1或Src载体共转染细胞，Western blot方法检测AR磷酸化位点。以LNCaP细胞株为研究对象，在无雄激素条件下，用表皮生长因子（EGF）或内皮样生长因子家族成员heregulin处理后，Western blot法检测AR磷酸化状态，再加入达沙替尼或用siRNA转染法沉默Ack1或Src基因后，Western blot法观察AR磷酸化变化；反转录-实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）法检测不同处理的LNCaP细胞前列腺特异抗原（PSA）以及人激肽释放酶2（hK2）mRNA的表达。结果转染载体后，HEK-293T细胞中Ack1激酶介导ARTyr267特异位点磷酸化，COS7细胞中Src介导AR Tyr534特异位点磷酸化。heregulin处理LNCaP细胞后，AR Tyr267位点磷酸化；加入达沙替尼后，该位点磷酸化被抑制；Ack1被沉默后，heregulin诱导的AR Tyr267位点磷酸化亦被抑制。EGF处理LNCaP细胞后，AR Tyr534位点磷酸化；加入达沙替尼后，该位点磷酸化被抑制；Src被沉默后，EGF诱导的AR Tyr534位点磷酸化亦被抑制。EGF或heregulin可上调LNCaP细胞内源性AR靶基因PSA和hK2 mRNA水平（P〈0．05），给予达沙替尼后，抑制了heregulin诱导的PSA和hK2 mRNA水平（P〈0．05），但EGF所诱导的PSA mRNA及hK2 mRNA的表达水平无明显变化（P〉0．05）。结论达沙替尼抑制ARTyr267、ARTyr534位点磷酸化，其通过抑制heregulin诱导的前列腺癌细胞AR Tyr267特异位点磷酸化及前列腺癌标志物PSA及hK2 mRNA的表达而发挥抗前列腺癌效应。