藏药铁棒锤种子发芽特性研究

研究了铁棒锤(Aconitum pendulum Busch)种子在光照和黑暗条件下不同温度(10、15、20、25、30℃和23/28℃变温)处理对发芽率、发芽势和发芽指数的影响。结果表明,铁棒锤种子千粒重为1.66 g;最大吸胀率为125.0%,达到饱和吸胀需20 h;黑暗环境下15℃有利于种子发芽,发芽率达30.3%,16天内平均发芽指数达1.54,但萌发后光照有利于形成健壮的幼苗。上述结果说明,土壤温度稳定通过15℃是铁棒锤的最佳播期,播种后应采用一定的覆盖遮荫措施,出苗后及时解除遮荫以促进根系发育。

半制备型高速逆流色谱分离制备铁棒锤根中的一种咪唑生物碱

采用高速逆流色谱(HSCCC)技术从铁棒锤根氯仿提取物中分离制备了一种高纯度咪唑类生物碱1H-imidazole-2-carboxylic acid,butyl ester(ICABE)。采用高效液相色谱(HPLC)测定目标化合物在两相溶剂中的分配系数,优化HSCCC分离ICABE的溶剂体系,确定了以正己烷-氯仿-乙醇-水(10∶1∶13∶2,v/v/v/v)为HSCCC的两相溶剂系统,以上相为固定相,下相为流动相,流动相流速为1.8 mL/min,主机转速850 r/min,检测波长为230 nm条件下进行分离制备,在350 min内从100 mg粗样品中一步分离得到7.5 mg ICABE,经HPLC检测其纯度达98%以上(峰面积归一化法),结构由UV、1H-NMR和13C-NMR得以鉴定。该方法简便、快速,所得产物纯度高,适合于铁棒锤中ICABE的制备分离。

铁棒锤种子发芽抑制机理及解除方法研究

目的:揭示铁棒锤种子发芽抑制机理,探寻提高种子发芽率的方法。方法:通过铁棒锤种子中生物碱类物质对油菜种子发芽率及生长情况的影响,明确铁棒锤种子的休眠机理;测定不同浓度的GA_3处理对铁棒锤种子发芽率的影响。结果与结论:铁棒锤种子中的发芽抑制物质为生物碱,适宜浓度的GA_3处理能打破休眠,且以400 mg/kg GA3处理14 h效果最好,发芽率达到91%。

宁夏地道药材铁棒锤抗炎镇痛活性部位的筛选

目的观察铁棒锤提取物各极性部位的抗炎镇痛效果。方法通过皮下注射角叉菜胶和腹腔注射醋酸溶液的方法建立小鼠炎症和疼痛模型,以吲哚美辛为阳性对照药对铁棒锤不同提取部位的抗炎镇痛作用进行评价。结果铁棒锤能抑制角叉菜胶所致小鼠耳肿胀程度,减少醋酸所致小鼠扭体次数,其中50%和95%醇洗部分具有显著的抗炎镇痛作用(P<0.01)。结论 50%和95%醇洗部分可能为铁棒锤抗炎镇痛作用的活性部位。

不同种子处理方法对铁棒锤育苗质量的影响

目的研究不同种子处理方法对铁棒锤育苗质量的影响。方法对铁棒锤种子进行去皮、赤霉素(GA3)处理,测定不同种子处理方法对铁棒锤出苗数及苗栽质量的影响。结果搓去种皮或100 mg/L GA3处理14 h均有利于提高铁棒锤田间出苗数及苗栽质量,而以先去皮再经100 mg/L GA3处理14 h效果最好。结论本研究初步形成了铁棒锤大田育苗的技术方法。

铁棒锤不定根诱导及培养的初步研究

目的建立铁棒锤不定根的诱导及增殖培养体系。方法通过组织培养的方法,考察外植体类型及植物生长物质对铁棒锤不定根的诱导及增殖情况的影响。结果不定根诱导能力依次为根>茎>叶,2.5 mg/L吲哚丁酸有利于铁棒锤不定根的诱导及增殖。结论本研究初步建立了铁棒锤不定根的诱导及增殖培养体系,为铁棒锤深层次的资源开发及利用提供了一种新途径。

毛茛科植物铁棒锤与工布乌头的对比研究

目的:对铁棒锤和工布乌头进行对比,以证明两者是否存在差异,是否需要区别用药。方法:进行两种药材的显微特征、薄层色谱的比较,采用HPLC法测定铁棒锤及工布乌头中乌头碱的含量。结果:两种药材在显微特征上存在一定的差异。以正己烷:乙酸乙酯:二乙胺(10∶6∶0.8)为展开剂,以乌头碱为对照品,结果 TLC图表明两者成分有明显区别。含量测定结果表明,药材铁棒锤的乌头碱含量为0.71 mg·g-1,而工布乌头中乌头碱的含量仅为0.03 mg·g-1。结论:经过显微、TCL、HPLC的对比研究表明,两种药材有较大差异,在用法上应注意区分,不能将工布乌头视作铁棒锤进行用药。

铁棒锤种子中乌头碱的提取方法优化及HPLC含量测定

目的:优选铁棒锤种子中乌头碱的最佳提取方法。方法:分别采用浸泡法、超声提取法和回流法提取铁棒锤种子中乌头碱,采用HPLC方法测定其含量,色谱条件:ZORBAX Edipse XDB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);G131513二极管阵列检测器;柱温30℃;流动相为乙腈-0.3%二乙胺水溶液(50∶50);流速1.0 m L/min;检测波长240 nm。比较分析测定结果,优选出最佳提取方法。结果:测得以浸泡法提取乌头碱的含量最高,为0.15%;超声提取法次之,为0.10%;回流法提取效果较差,为0.039%。结论:优选出铁棒锤种子中乌头碱的最佳提取方法为浸泡提取法,简便易行,重现性好。

响应面法优化铁棒锤根中一种咪唑生物碱的超声提取工艺

采用响应面法优化铁棒锤根中一种咪唑生物碱Imidazole-2-Carboxylic acid butyl ester(ICABE)的超声提取工艺。在单因素试验基础上筛选出液料比、提取温度、提取时间三个主要因素,并通过响应面分析得到的最佳工艺条件为:液料比23 mL/g、提取温度58℃、提取时间51 min,在此条件下的理论提取率为0.081%,实际测得值为0.079%,两者较接近。验证试验表明,所得模型方程能较好地预测试验结果。

铁棒锤根系生长动态研究

采取田间抽样调查的方法,对铁棒锤根系的生长动态进行了研究.结果表明,生长150 d左右子根开始形成,240 d左右子根个数达到最大,270 d左右生长量达到最大（干质量11.47 g/株）;在整个生长周期内,母根生长量逐渐减小,生长的后期伴随新母根的形成原母根消失;根系含水量在生长的前期较高（70%～80%）,后期较低（62%）;根系体积和生长量的变化趋势一致.据此认为,生长210～240 d（6月25日～7月25日）是水肥管理的关键时期.生长270 d（8月25日）为最佳采收期.铁棒锤根系统中全根鲜质量、子根鲜质量、全根干质量、子根干质量、根系体积、子根体积均能建立良好的生长曲线,且相关系数（r≥0.934 5）均达到极显著水平,确定系数高于0.976 5.

陕产铁棒锤不同生长期不同器官中3-乙酰乌头碱及去氧乌头碱的含量动态积累规律研究

目的:对陕产铁棒锤不同生长期不同器官中3-乙酰乌头碱及去氧乌头碱进行含量测定,探讨化学成分的动态变化,为资源开发及合理使用提供参考。方法:色谱柱:Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:A:乙腈,B:0.03 mol·L-1碳酸氢铵溶液,浓氨水调PH9.5;流速:1.0 m L·min-1;梯度洗脱:检测波长为230 nm;温度35℃。结果:3-乙酰乌头碱在叶、茎及果实中的含量高于不同生长期根中的含量,具有资源的开发利用潜力,且随着植物的生长呈现上升趋势,在盛花期达到峰值。叶和茎中3-乙酰乌头碱含量较高,还会随着植物的生长转移到其他器官。去氧乌头碱在叶中含量最高,在盛花期达到峰值,且在叶中随着植物的生长呈现上升趋势,但茎中去氧乌头碱在各生长期的含量均低于根,去氧乌头碱的代谢规律有待进一步研究。结论:铁棒锤不同器官具有较高的药用价值,通过本研究,为陕产铁棒锤人工采收、合理使用、资源开发及质量评价提供理论依据。

铁棒锤水提物对大鼠的毒性试验

目的研究铁棒锤水提物对大鼠的急性毒性作用,为临床用药安全和后续实验提供参考。方法清洁级Wistar雄性大鼠56只,随机分为7组:对照组(生理盐水)、铁棒锤水提物(15、30、60、120、240和480 mg/kg)剂量组,连续灌胃给药处理14 d,观察大鼠14 d内所产生的毒性反应,并记录大鼠给药前后体质量和进食变化情况;第15天处死大鼠,通过测定血液常规指标以及血清生化指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)和肌酐(CRE),计算心脏、肝、肾和脑脏器系数,测定各组织中丙二醛(MDA)含量,苏木素—伊红染色观察各组织脏器病理学变化,评价其急性毒性作用。结果与对照组相比,铁棒锤水提物剂量组大鼠体质量、饲料消耗量、食物利用率及各组织脏器系数差异均无统计学意义(P>0.05),铁棒锤水提物480 mg/kg剂量组血清ALT、AST、CRE含量均高于对照组(P<0.05),但均在大鼠正常生理值范围内,其余给药组血清生化指标无明显变化。铁棒锤水提物剂量组大鼠血液常规指标、各组织MDA含量差异无统计学意义,组织病理切片亦未见异常现象。结论大鼠经口给予铁棒锤水提物的最大给药量为480 mg/kg,为成人推荐日用最大剂量的576倍,安全性良好,表明铁棒锤经水煮炮制的水提物具有一定的安全范围,为铁棒锤的临床应用提供一定的可能性和安全性。

PEG处理对老化铁棒锤种子萌发及幼苗生长的影响

通过测定不同储藏年限及PEG处理后铁棒锤种子的发芽率及幼苗生长情况,研究铁棒锤种子的储存寿命,探寻提高老化铁棒锤种子萌发率的方法。结果表明:铁棒锤种子发芽率随着储藏时间的延长呈现下降趋势,种子寿命为1年。10%的PEG处理对储藏3年的老化种子萌发及根的生长有一定促进作用,种子发芽率提高了6%,平均根长增加了0.17cm,15%的PEG处理对老化种子芽的生长有益,平均芽长增加了0.95 cm。

铁棒锤毒性研究及炮制方法

铁棒锤是我国一种传统中草药,具有多种生理活性,临床有广泛应用,但同时也是毒性药材之一。目前对铁棒锤的毒性及炮制方法研究尚不完善,难以对其质量及安全性进行控制。对铁棒锤的炮制、毒性、化学成分、药理活性、临床应用方面进行详细论述,以进一步完善对铁棒锤毒性及炮制方法的研究。

电感耦合等离子体原子发射光谱法测定铁棒锤不同器官中微量元素

目的通过测定铁棒锤不同器官中微量元素量,探讨不同器官潜在的药用价值。方法用微波消解法处理样品后,采用电感耦合等离子体原子发射光谱法(ICP-AES)测定微量元素。结果铁棒锤根、茎、叶和果实不同器官所含K、Ca、Na、Mg、Mn、Cu、Zn、Fe、Al等微量元素的量各有不同,各器官中Mg、Ca、K的量较高,根中9种微量元素的加合量远远高于茎、叶和种子。结论除根中具有重要的微量元素外,茎、叶和种子也含有丰富的微量元素,在临床中也应具有一定的药理作用,关于活性方面,还有待于进一步研究。此实验为深入研究铁棒锤中微量元素与疗效的内在联系提供科学参考依据。

铁棒锤种子蛋白质提取及聚丙烯酰胺凝胶电泳研究

目的构建适合铁棒锤种子蛋白质研究的聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)体系,为铁棒锤种子纯度检测及鉴别研究提供技术支撑。方法采用6种蛋白质提取法提取伏毛铁棒锤种子蛋白质,并筛选出最佳提取方法,在此基础上研究不同分离胶浓度、料液比、上样量对伏毛铁棒锤种子蛋白电泳分离效果的影响,并采用筛选出的蛋白质最佳提取分离方法对铁棒锤和伏毛铁棒锤种子进行鉴定。结果巯基乙醇法提取的伏毛铁棒锤种子蛋白质电泳图谱效果较佳,电泳谱带数最多(14条)、最清晰,适合于其种子纯度检测;分离胶浓度为15%、料液比为1∶10(M/V)、蛋白上样量稀释5倍时,其种子蛋白质电泳分离效果较好;铁棒锤和伏毛铁棒锤种子蛋白质电泳图谱在蛋白质谱带位置和强弱上有一定差异。结论本研究建立的铁棒锤种子蛋白样品制备方法及SDS-PAGE技术可用于铁棒锤种子纯度检测,其蛋白质图谱可作为铁棒锤与伏毛铁棒锤种子的鉴别依据。

基于有效成分和近红外光谱研究不同施肥水平对藏药铁棒锤质量的影响

目的:在大田条件下,研究不同施肥水平对铁棒锤质量的影响,为铁棒锤的广泛种植、科学施肥及标准化栽培提供指导依据。方法:采用“3414”法进行铁棒锤大田肥效试验,应用HPLC测定主要有效成分乌头碱的含量,近红外漫反射法测定不同配比氮磷钾施肥的铁棒锤药材的近红外光谱,并通过方差分析、聚类分析和主成分分析进行质量评价。结果:氮、磷、钾肥均对铁棒锤中乌头碱含量有极显著影响(P<0.001),且氮磷钾配施中磷肥占比高的,铁棒锤中乌头碱含量较高,效果较好。聚类分析和主成分分析结果表明,P_(2)O_(5)≥580.50 kg/hm^(2)时,施肥处理与铁棒锤药材质量具有较好的相关性。结论:建议最佳施肥量的磷肥(P_(2)O_(5)≥580.50 kg/hm^(2))可以有效提高铁棒锤中乌头碱的含量,通过“3414”田间施肥设计,说明科学有效施肥能提高铁棒锤的质量。

榜那的研究进展及质量标志物的预测分析

榜那为藏医常用药材,主要成分生物碱具有抗炎、镇痛、抗肿瘤、抗菌等药理作用。现在总结榜那化学成分和药理作用的基础上,结合其质量控制研究进展,以质量标志物(Q-Marker)的理论为指导,从亲缘关系、传统药性、药效、炮制、成分方面对Q-Marker进行预测,分析发现伏毛铁棒锤Aconitum flavum Hand.-Mazz.和铁棒锤A.pendulum Busch.比较接近,而与工布乌头A.kongboense Lauener.有较大差异,提示乌头碱可作为伏毛铁棒锤或铁棒锤的Q-Marker,塔拉萨敏可作工布乌头的Q-Marker,为榜那质量评价体系的建立及开发利用提供了参考。

铁棒锤炮制方法及“减毒存效”炮制原理研究进展

通过查阅和整理近年来的相关文献,主要从铁棒锤的炮制方法、炮制对其化学成分及药理作用的影响及“减毒存效”的炮制原理等3个方面对铁棒锤的炮制研究进展进行概述。发现铁棒锤较常用、规范的炮制方法为水煮法、蒸制法及砂炒法,为规范铁棒锤的炮制工艺、阐明铁棒锤“减毒存效”的炮制原理、铁棒锤的深入研究开发及临床安全用药提供参考。

诃子配伍铁棒锤对戊巴比妥钠诱导的H9c2心肌细胞毒效关系的影响及机制

目的综合评价诃子(Terminalia chebula Retz.,TCR)-铁棒锤(Aconitum pendulum Busch.,APB)不同配比对H9c2心肌细胞毒效关系的影响,寻找两者的配比规律,并探究TCR-APB药对心肌的保护机制。方法以APB为参照,按照1∶1,2∶1,3∶1及4∶1的比例配比TCR与APB药材并提取总提物,以戊巴比妥钠构建大鼠H9c2心肌细胞心力衰竭模型,计算4种配比总提物作用于H9c2心肌细胞的IC_(50)与EC_(50)值,比较其安全治疗指数(treatment indices,TI=IC_(50)/EC_(50));并进一步探究TCR-APB药对H9c2心肌细胞活力、心肌指标[乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)及肌酸激酶(creatine kinase,CK)]水平、线粒体膜电位(ΔΨ)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平、钙离子(Ca2+)浓度及TRP基因、钙调节相关基因的mRNA水平。结果TI计算结果显示,TCR与APB以2∶1比例配比时安全范围最好;100 ng·mL^(–1)的APB可显著上调TRPV1、TRPV2及TRPM8mRNA水平,使TRPV4与TRPA1的mRNA水平显著下调,毒性浓度范围下的调节则相反;分子对接结果发现TRPM8对各成分的亲和力均比其他靶点强;最佳配比提取物及其活性单体均可显著提高细胞活力,改善戊巴比妥钠损伤导致的H9c2心肌细胞LDH渗漏、CK水平上升、ΔΨ降低、细胞内ROS水平上升、胞内Ca^(2+)浓度增加以及FKBP1B和TRPM8的mRNA水平下调、RyR2和NOX2的mRNA水平上调等。结论TCR与APB配伍均可缓解H9c2心肌细胞损伤,起到减毒增效的作用,其最佳配比为2∶1,二者配伍可以通过影响TRP基因,特别是TRPM8,调节肌质网中FKBP1B与RyR2基因以及线粒体中ROS水平,纠正Ca^(2+)紊乱,从而保护心肌免受损伤。