诃子在藏药炮制中的应用

通过查阅近年来国内外文献,归纳、分析了诃子在藏药炮制中的应用以及诃子炮制一些矿物药和有毒植物药过程的研究进展,根据诃子化学成分推测诃子炮制铁粉、草乌的原理及减毒机制,为进一步深入探讨藏药诃子炮制矿物药、有毒植物药的机制提供参考。

基于药效团和分子对接探究诃子制草乌通过瞬时受体电位香草酸1介导的减毒机制

目的:本研究利用药效团、分子对接及实时反转录PCR(RT-PCR)方法探究诃子制草乌通过瞬时受体电位香草酸1(TRPV1)介导的减毒机制。方法:采用Discovery Studio 4.0软件构建基于TRPV1激动剂分子共同特征的TRPV1激活药效团,虚拟筛选出草乌中的潜在活性成分;对草乌成分及诃子制草乌中引入的诃子成分进行Autodock vina分子对接研究;根据结果选出代表性成分,采用实时反转录PCR验证是否可促进心肌细胞中TRPV1 mRNA表达。结果:药效团共筛选出草乌中包括毒性较大的双酯型生物碱乌头碱、新乌头碱及次乌头碱在内的13个成分,分子对接结果表明这13个成分及诃子制草乌引入的诃子成分均有潜力与TRPV1结合。RT-PCR实验中没食子酸和新乌头碱在浓度≥25μmol/L时,均可明显促进大鼠H9c2心肌细胞中TRPV1 mRNA表达的增加,随着给药浓度的增大表达量增加,新乌头碱促进TRPV1 mRNA表达的作用更强。药效团、分子对接结果表明诃子和草乌中均含有多种具备TRPV1激活潜力的成分。结论:实验证明新乌头碱、没食子酸均可在一定程度上激活TRPV1通道,可作为TRPV1的激动剂。根据结果推测,诃子可能会通过拮抗草乌中的活性成分与TRPV1的结合,从而降低草乌通过TRPV1介导的毒性;也可能是诃子制草乌在引入没食子酸等诃子成分后,可在安全剂量范围内使TRPV1通道快速脱敏从而实现减毒。

蒙药“诃子解草乌毒”的配伍比例研究

目的:探讨蒙药“诃子解草乌毒”的最佳配伍比例。方法:将40只大鼠随机分为空白对照组(0.05%羧甲基纤维素钠溶液)、生草乌组(以生药量计0.12g/kg)和生草乌-诃子(1∶3、1∶1、3∶1,质量比)组(生草乌给药量以生药计均为0.12g/kg),每组8只;每天灌胃给药1次,连续给药28d;末次给药0.5h后,测定大鼠血清中肌钙蛋白(cTn-I)、肌红蛋白(MB)含量,并观察其心脏病理结构变化,以考察诃子对草乌致心脏毒性的解毒作用。采用平衡透析法并联合液质联用技术测定草乌中3种乌头碱(乌头碱、新乌头碱和次乌头碱,质量浓度均为5、10、20、40、80、160、400ng/mL)与正常人血浆的血浆蛋白结合率;然后固定3种乌头碱的质量浓度均为100ng/mL,考察加入不同比例诃子中主要解毒成分单宁酸后(3种乌头碱与诃子的质量比均分别为1∶0.025、1∶0.075、1∶0.1、1∶0.5),对3种乌头碱血浆蛋白结合率的影响,以考察诃子解草乌致心脏毒性的可能机制。结果:在解毒实验中,与空白对照组比较,生草乌组大鼠血清中cTn-I、MB含量显著升高(P<0.05),心肌组织出现细胞排列紊乱、细胞固缩、胞浆炎染等明显病理结构改变。与生草乌组比较,生草乌-诃子(1∶3、1∶1、3∶1)组大鼠血清中cTn-I、MB含量均显著降低(P<0.05),并且生草乌-诃子(3∶1、1∶1)组含量与空白对照组差异无统计学意义(P>0.05);心肌组织病变都得到不同程度改善,其中生草乌-诃子(3∶1)组大鼠心肌组织结构与空白对照组相似。在机制考察试验中,在不同质量浓度下,草乌中3种乌头碱与正常人血浆的血浆蛋白结合率均约为30%,差异均无统计学意义(P>0.05),且无明显的浓度依赖性;加入单宁酸后草乌中3种乌头碱的血浆蛋白结合率均不同程度降低,当3种乌头碱与单宁酸按1∶0.1、1∶0.075、1∶0.5比例配伍时,血浆蛋白结合率显著降低(P<0.05),且有配伍比例的依赖性。结论:生草乌-诃子(3∶1)配伍使用对草乌致心脏毒性的解毒效果最好;在此配伍比例下,草乌中3种乌头碱与正常人血浆的血浆蛋白结合率相对较高,游离药物浓度相对较低。

蒙药诃子配伍草乌的减毒增效机制研究进展

诃子与草乌均为传统的常用蒙药,在蒙医药诸多经典著作中均有记载。诃子因在蒙药中使用率最高,而被誉为“蒙药之王”。草乌在蒙药中也有更为悠久的用药历史和广泛的用途。蒙医在临床治疗过程中用草乌必配合诃子,多以诃子汤炮制草乌入丸散剂,或多以配伍药对形式入煎剂。现就蒙药中诃子与草乌的概况及诃子与草乌配伍减毒增效的机制进行综述,为蒙药的毒性研究与用药安全提供理论依据。

诃子与草乌不同比例配伍对3种双酯型生物碱含量的影响

目的建立草乌中主要毒性成分3种双酯型生物碱的HPLC含量测定方法,并测定其含量,探讨诃子-草乌不同比例配伍对3种双酯型生物碱含量的影响,阐释配伍减毒的原理。方法采用HPLC含量测定方法对3种双酯型生物碱进行含量测定,色谱条件为:采用Extend C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇-0.05%氨水流动相梯度洗脱,柱温30℃,检测波长235 nm,流速1 m L/min。结果诃子-草乌不同比例(草乌单煎、0.51、11、21、3.31、51)配伍合煎后,3种双酯型生物碱含量变化趋势略有不同。在水煎液中,3种双酯型生物碱总含量表现出先升高后降低的抛物线状趋势。在诃子-草乌(21)合煎液中3种双酯型生物碱总含量最大,在诃子-草乌(51)合煎液中3种双酯型生物碱总含量最低且低于单煎液。结论诃子-草乌不同比例配伍对水煎液中3种双酯型生物碱的含量具有很大影响,一方面促进3种双酯型生物碱的溶出,另一方面在诃子配伍比例较高时,又加速了生物碱的水解。

生草乌和诃子制草乌细胞毒性及抗炎作用的比较研究

目的:比较生草乌和诃子制草乌的细胞毒性及抗炎作用。方法:以大鼠心肌细胞H9c2为对象,采用CCK-8法检测0.5、1、2、4、6、8、10 mg/mL生草乌和诃子制草乌作用4、8、12、24 h对细胞抑制率的影响,采用Hoechst 33258染色法观察2、4、6 mg/mL生草乌和诃子制草乌作用24 h对细胞形态学特征的影响。以小鼠巨噬细胞RAW264.7为对象,采用CCK-8法检测0.05、0.1、0.25、0.5、0.75、1、1.5、2 mg/mL生草乌和诃子制草乌作用24 h对细胞存活率的影响,采用酶联免疫吸附试验法检测0.05、0.1、0.25、0.5mg/mL生草乌和诃子制草乌对LPS致RAW264.7炎症细胞中一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)释放的影响。结果:当质量浓度为0.5、1 mg/mL时,生草乌和诃子制草乌对H9c2细胞几乎均无抑制作用;当质量浓度为2 mg/mL时,诃子制草乌在各时间点对H9c2细胞的抑制率均显著高于生草乌(P<0.05或P<0.01),且作用24 h的细胞荧光强度虽强于生草乌,但其细胞核完整;当质量浓度为4~10 mg/mL时,诃子制草乌在各时间点(除8、10 mg/mL作用24 h外)对H9c2细胞的抑制率均显著低于生草乌(P<0.05或P<0.01),且4、6 mg/mL生草乌组细胞的荧光强度强于诃子制草乌组,同时生草乌组的细胞核破碎现象更为严重。0.05~0.5 mg/mL的生草乌和诃子制草乌对RAW264.7细胞均无毒性,0.25、0.5 mg/mL的生草乌和0.1、0.25、0.5 mg/mL的诃子制草乌对RAW264.7炎症细胞中NO的释放以及0.05、0.1、0.25、0.5 mg/mL的生草乌和诃子制草乌对RAW264.7炎症细胞中TNF-α、IL-6的释放均有显著的抑制作用(P<0.05或P<0.01),其中相同质量浓度下诃子制草乌对NO释放的抑制作用优于生草乌,对TNF-α、IL-6释放的抑制作用弱于生草乌。结论:草乌经诃子汤炮制后毒性有所降低,尤其是以中或高浓度、短期内使用的毒性低于生草乌。同时,诃子制草乌的抗炎作用与同浓度生草乌相当。

诃子汤炮制草乌血中移行成分差异研究

目的分析草乌炮制前后血清中移行成分的差异,从血清药物化学的角度揭示草乌炮制机制。方法将生草乌与诃子汤炮制草乌细分0.5%羧甲基纤维素钠混悬液灌胃给药大鼠后制备含药血清,建立并分析比较空白组、生草乌组和诃子汤炮制草乌组大鼠血清UPLC特征图谱,确定草乌炮制前后血清移行成分差异。结果生草乌组含药血浆样品中检测到11个血中移行成分,鉴定出了其中6个原型成分,诃子汤炮制草乌组含药血浆样品中检测到14个血中移行成分,鉴定出了其中8个原型成分。结论草乌炮制前后血清移行成分存在显著差异,这为今后诃子汤炮制草乌机制深入研究提供实验依据。

诃子草乌配伍与诃子制草乌水煎液中生物碱含量的比较——诃子制草乌炮制原理探讨Ⅱ

目的:对生草乌、诃子制草乌水煎液及草乌诃子共煎液中生物碱含量进行比较验证蒙医理论"诃子可解乌头毒"。方法:采用HPLC测定生草乌水煎液、诃子制草乌水煎液及诃子草乌共煎液中新乌头碱、乌头碱、次乌头碱以及苯甲酰新乌头碱、苯甲酰乌头碱、苯甲酰次乌头碱的含量。色谱条件以乙腈-四氢呋喃(25∶15)为流动相A,以0.1 mol.L-1醋酸铵溶液(每1 000 mL加冰醋酸0.5 mL)为流动相B。结果:双酯型生物碱的含量为诃子草乌共煎液>诃子汤制草乌煎液>生草乌煎液;单酯型生物碱的含量为生草乌煎液>诃子草乌共煎液>诃子汤制草乌煎液。结论:诃子可以使草乌中双酯型生物碱缓慢水解,诃子制草乌的毒性低于诃子草乌配伍。

诃子制草乌模拟炮制品在人工胃液与肠液中的水解行为研究

目的：研究诃子制草乌模拟炮制品在人工胃液与肠液中的水解行为,明确二者相互作用机制,为诃子制草乌的炮制减毒提供依据。方法：采用高相液相色谱（HPLC）法测定诃子制草乌在人工胃肠液中孵育不同时间（胃液中孵育2 h,肠液中孵育5、6、7、8 h）后其降解产物乌头碱、苯甲酰乌头原碱和苯甲酸的含量。结果：诃子制草乌中乌头碱含量在人工胃液中减少,在人工肠液中明显回升,在人工肠液孵育6~8 h时含量稳定;诃子制草乌中苯甲酰乌头原碱在人工胃液中未测得,在人工肠液中测得;诃子制草乌中苯甲酸在人工胃肠液中含量变化呈先递增再递减的趋势,且在人工肠液中孵育6 h时达最大值,7~8 h时维持稳定。结论：诃子制草乌炮制过程中鞣质与乌头碱可能结合生成难溶性物质,胃肠液p H对游离乌头碱的释放和水解有一定影响,人工胃液酸性环境对其水解有抑制作用,而人工肠液碱性环境对其水解有促进作用。

诃子鞣酸对乌头碱致H9C2细胞损伤的保护作用及机制

目的通过研究诃子鞣酸对乌头碱致H9C2细胞损伤的保护作用,探讨蒙药诃子制草乌炮制减毒机制。方法以不同浓度的乌头碱、诃子鞣酸及乌头碱+诃子鞣酸分别作用于H9C2细胞,利用高内涵分析(HCA)技术检测并分析药物对H9C2细胞数量、细胞核面积、细胞核DNA含量、Ca^2+荧光强度及线粒体功能的影响。结果10、20μmol/L乌头碱作用于H9C2细胞24 h后,可导致细胞内Ca^2+超载;20μmol/L乌头碱可致H9C2细胞线粒体功能障碍;5、10、20μmol/L诃子鞣酸单独作用于H9C2细胞均无明显毒性;当10、20μmol/L诃子鞣酸与20μmol/L乌头碱共同作用于H9C2细胞24 h后,线粒体功能恢复,细胞内Ca^2+荧光强度降低;与对照组相比,无明显差异。结论乌头碱会引起H9C2细胞Ca^2+超载和线粒体功能障碍,可能是草乌致心肌细胞毒性的主要原因。诃子中的诃子鞣酸可明显抑制由乌头碱引起的Ca^2+超载,改善线粒体功能,起到解草乌毒的作用。

诃子解草乌毒蒙医传统观念及现代研究概况

草乌和诃子是蒙医最为常用的药材之一,由于草乌大毒,临床不宜生用,蒙医常用诃子配伍草乌或用诃子汤炮制草乌进行减毒,从而保证草乌疗效的同时,保证其临床疗效。本文就蒙医诃子配伍草乌、诃子汤炮制草乌的传统文献和现代研究概况进行综述,为其进一步研究提供参考。