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结核分枝杆菌分子伴侣Acr2蛋白的原核表达及其功能分析
1
作者
张宗欣
赵纪元
孙红宾
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2024年第1期37-42,共6页
目的 在E.coli中表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)分子伴侣Acr2蛋白,并分析其功能。方法 将重组质粒pET-28a-Acr2转化感受态E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达His-Acr2蛋白,经Ni-NTA层析及SuperdexTM200 10/300 GL凝胶过...
目的 在E.coli中表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)分子伴侣Acr2蛋白,并分析其功能。方法 将重组质粒pET-28a-Acr2转化感受态E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达His-Acr2蛋白,经Ni-NTA层析及SuperdexTM200 10/300 GL凝胶过滤层析纯化获得Acr2蛋白。将Acr2蛋白经热变性(100℃温浴15 min)及化学变性(8 mol/L尿素,37℃温浴4 h)后进行自发再折叠和再组装的复性处理,采用圆二色性光谱法和非变性SDS-PAGE检测变性及复性后Acr2蛋白的二级结构。通过底物结合试验检测Acr2蛋白在体外的分子伴侣功能。结果 纯化Acr2蛋白的相对分子质量约为232 000,纯度达90%以上,浓度约为2 mg/mL。Acr2蛋白经变性-复性处理后可恢复其天然二级结构,且在48℃条件下可与变性的苹果酸激酶(malate dehydrogenase,MDH)形成稳定复合物。结论 Acr2蛋白经变性-复性处理后可恢复其天然分子构象,且具有体外分子伴侣活性。本研究为制备具有天然活性的结核杆菌蛋白抗原提供了新策略。
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关键词
结核分枝杆菌
小分子热休克
蛋白
acr2蛋白
变性
复性
分子伴侣
原文传递
题名
结核分枝杆菌分子伴侣Acr2蛋白的原核表达及其功能分析
1
作者
张宗欣
赵纪元
孙红宾
机构
郑州轻工业大学食品与生物工程学院
出处
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2024年第1期37-42,共6页
基金
河南省自然科学基金面上项目(212300410415)。
文摘
目的 在E.coli中表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)分子伴侣Acr2蛋白,并分析其功能。方法 将重组质粒pET-28a-Acr2转化感受态E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达His-Acr2蛋白,经Ni-NTA层析及SuperdexTM200 10/300 GL凝胶过滤层析纯化获得Acr2蛋白。将Acr2蛋白经热变性(100℃温浴15 min)及化学变性(8 mol/L尿素,37℃温浴4 h)后进行自发再折叠和再组装的复性处理,采用圆二色性光谱法和非变性SDS-PAGE检测变性及复性后Acr2蛋白的二级结构。通过底物结合试验检测Acr2蛋白在体外的分子伴侣功能。结果 纯化Acr2蛋白的相对分子质量约为232 000,纯度达90%以上,浓度约为2 mg/mL。Acr2蛋白经变性-复性处理后可恢复其天然二级结构,且在48℃条件下可与变性的苹果酸激酶(malate dehydrogenase,MDH)形成稳定复合物。结论 Acr2蛋白经变性-复性处理后可恢复其天然分子构象,且具有体外分子伴侣活性。本研究为制备具有天然活性的结核杆菌蛋白抗原提供了新策略。
关键词
结核分枝杆菌
小分子热休克
蛋白
acr2蛋白
变性
复性
分子伴侣
Keywords
Mycobacterium tuberculosis(Mtb)
Small heat shock protein(sHSP)
acr
2
protein
Denaturation
Renatur-ation
Molecular chaperone
分类号
R378.911 [医药卫生—病原生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
结核分枝杆菌分子伴侣Acr2蛋白的原核表达及其功能分析
张宗欣
赵纪元
孙红宾
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2024
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