大肠杆菌acrA基因的重组表达及其抗体的制备

以大肠杆菌E. coli ATCC25922株的染色体DNA为模板,PCR扩增AcrA蛋白部分基因,获得约691bp的DNA片段。将PCR产物克隆至pMD18-T载体中测序,并进一步将acrA亚克隆于pET28a原核表达载体中,进行该基因的诱导表达。表达的产物经SDS-聚丙酰胺凝胶电泳分析,可见一条约33ku的特异性蛋白条带。用纯化的acrA基因原核表达产物免疫獭兔,ELISA法检测不同时期獭兔抗体效价。蛋白质印迹结果表明,用表达的AcrA蛋白制备的acrA抗体能够用于检测大肠杆菌AcrA蛋白的表达水平。