AcrAB外排泵ramA对肺炎克雷伯菌耐喹诺酮类药物的影响

目的探讨AcrAB外排泵调控基因ramA对肺炎克雷伯菌耐喹诺酮类药物的影响。方法用喹诺酮类药敏纸片扩散法、MIC及其逆转实验和有机溶剂耐受实验测定细菌耐药表型,用PCR扩增外排泵结构基因acrA、acrB、tolC及调控基因acrR,ramA,marA,用半定量PCR检测调控基因的转录水平。结果泵的结构基因和调控基因均存在43株KP菌中。仅喹诺酮类耐药株与敏感株ramA转录水平存在统计学差异(P<0.05)。和对照组相比,高表达ramA的AC-1株,其泵结构基因的转录水平增高,耐药表型也有明显改变,用泵抑制剂后,其喹诺酮类的MIC恢复对照水平。结论 ramA是KP菌耐喹诺酮类抗生素的一个重要因素。抑制ramA的表达,有助于治疗多重耐药肺炎克雷伯菌的感染。

大肠杆菌的AcrAB-TolC多药外排泵及其调控研究进展

多药外排泵造成了细菌的多种药物的耐药现象,这对感染性疾病的防治提出了挑战。对于多药外排泵的研究不仅使人们认识细菌耐药性机制,而且为细菌耐药性的防治提供思路。大肠杆菌AcrAB-TolC外排泵系统的结构和调控机制研究取得了一些新进展,这为病原菌的相关研究提供了参考,本文对其进行了综述。

新生儿科产NDM-1耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌主动外排泵基因acrA的研究

目的研究主动外排泵基因arcA在耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌中抗生素转录水平,探讨主动外排机制在耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌中的作用。方法收集2012年8月-2013年12月中南大学湘雅二医院新生儿科患者的痰及血液标本分离的7株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌株作为实验组,10株同一新生儿科碳青霉烯类敏感肺炎克雷伯菌株作为对照组,采用Phoenix100全自动微生物分析系统进行鉴定及药敏检测,采用K-B法和Etest进行表型确认,采用改良Hodge确证试验确定细菌耐药表型,采用RAPD技术检测细菌基因型,采用PCR扩增NDM-1、acrA基因,采用RT-PCR检测acrA mRNA表达。结果7株试验菌均产碳青霉烯酶。PCR扩增显示其染色体和质粒上均携带NDM-1基因;RAPD显示7株试验菌为同一ST17型;5株试验菌和8株敏感菌株检出外排泵基因acrA;RT-PCR显示试验组和对照组acrA mRNA表达水平平均值分别为0.545和1.899,两组arcA mRNA扩增产物电泳条带与16SrRNA扩增产物电泳条带的灰度比值分别为0.13和0.317,结果进行Fisher精确概率检验,P=0.317>0.05,差异无统计学意义。结论 acrA的表达可能不是产NDM-1耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌耐药的必要原因。

志贺菌主动外排泵调控基因marOR突变与泵表达水平的关系

目的了解临床分离志贺菌调控基因marOR的突变情况，并探讨其与主动外排泵表达水平的关系。方法对100株临床分离志贺菌和本实验室筛选的敏感菌及标准株的marOR基因进行聚合酶链反应（PCR），对扩增产物进行限制性内切酶酶切与单链构象多态性（SSCP）分析，对marOR基因突变株进行测序，利用RT-PCR测定其泵基因acrA、acrB和tolC的表达水平，并对其进行四环素、氯霉素、氨苄青霉素、庆大霉素、诺氟沙星、复方新诺明等6种药物的药敏试验。结果100株临床分离志贺菌、敏感株及标准株均扩增出marOR基因，未发现该基因缺失株；SSCP分析发现marOR基因的突变率为23％；随机选择11株marOR基因突变株和1株敏感株及标准株进行测序，其中有9株存在4个碱基的缺失和3个位点的碱基突变，RT-PCR分析表明11株marOR基因突变株的acrAB—tolC主动外排泵表达水平高于敏感株和标准株，且该11株均为多重耐药株。结论在该实验中志贺菌marOR基因突变率较高，其突变株的acrAB—tolC主动外排泵基因高表达，可能增加耐多药性。