阔叶猕猴桃抗生素敏感性及遗传转化的研究

以阔叶猕猴桃(Actinidia latifolia)叶片为外植体,研究了各种抗生素对形态分化和器官形成的影响,并以叶盘为受体,通过根癌农杆菌介导法获得了抗性愈伤组织和抗性芽,组织化学染色表明gus基因已在植物组织中表达。研究结果表明,对不定芽分化来说,头孢霉素(Cef)效果明显好于羧苄青霉素(Carb)。Cef浓度为300mg.L-1时效果最好,再生频率达100%,平均再生芽数达最大为9.76个芽/外植体。生根过程中高浓度的Cef(≥200mg.L-1)明显抑制生根,而Carb对生根没有显著影响。在卡那霉素(Kan)和Carb组合处理中,Carb对生根没有显著影响,但Kan明显抑制生根。随着Kan浓度的升高,生根率和平均根数迅速减少,当浓度升高到50mg.L-1时,生根完全被抑制。因此,农杆菌介导的阔叶猕猴桃遗传转化中愈伤组织和不定芽诱导过程宜选用300mg.L-1Cef来抑制农杆菌生长,Kan筛选的临界浓度为20mg.L-1。在抗性芽生根过程中Kan浓度应该控制在50mg.L-1以内,并改用Carb作为杀菌剂,生根效果会更好。该研究确定了农杆菌介导的阔叶猕猴桃叶片遗传转化中使用抗生素的种类和用量,为通过基因工程对阔叶猕猴桃进行遗传改良奠定了基础。

阔叶猕猴桃叶片离体器官发生和植株再生(英文)

以阔叶猕猴桃(A ctinidia latifolia M err.)叶片为外植体,通过器官发生途径诱导形成不定芽,探讨了不同激素组合、暗培养时间以及不同浓度的蔗糖对叶片器官发生和植株再生的影响。结果表明,BW +0.1μm ol/L N AA +5μm ol/L Zeatin 附加20g/L 蔗糖,先进行21d 暗培养然后转到光下培养效果最好,6周后不定芽再生频率达91.67%,平均每个外植体再生芽数6.87个。再生芽生根良好,生根率可达100%。首次报道了阔叶猕猴桃的器官发生和植株再生,建立了叶片的高效再生体系,为今后的遗传转化研究奠定了基础。

多花猕猴桃的组织培养

介绍了多花猕猴桃的组织培养方法及其操作步骤。

阔叶猕猴桃果实GalDH cDNA克隆及其在大肠杆菌中的表达

以猕猴桃属植物中果实维生素C含量最高的阔叶猕猴桃(Actinidia latifolia Merr.)果实为试材,经RT-PCR扩增获得约1.0kb的L-半乳糖脱氢酶cDNA片段。生物信息学分析表明,该cDNA片段长为997bp,最大开放阅读框为960bp,可编码319个氨基酸残基,命名为AlGalDH,GenBank登录号为EU525846,核苷酸序列及其推导的氨基酸序列与已知其它植物GalDH核苷酸、氨基酸序列间的同源性分别在76%和70%以上,且具有醛酮还原酶的保守结构域。构建了其原核表达载体pET-AlGalDH并转化大肠杆菌BL21,经0.1mmol.L-1IPTG诱导,获得具有较高活性的表达融合蛋白6×His-AlGalDH。经Ni-His亲和磁珠分离纯化,获得单一的融合目的蛋白条带,测定其酶活为120pmol.min-1.mg-1。