猕猴桃果实特异表达ipt基因的构建

异戊烯基转移酶(ipt)基因是细胞分裂素生物合成关键酶.为保证ipt基因仅在猕猴桃开花授粉之后的幼果期开始有效表达,作者以pUC119质粒为克隆载体,将猕猴桃果实特异表达的猕猴桃素(Actinidin)基因启动子与ipt编码基因连接构建成猕猴桃果实特异表达ipt基因.

猕猴桃蛋白酶提取的工艺技术研究

采用盐析沉淀法，配合等电点沉淀法，对猕猴桃蛋白酶提取的工艺技术进行了研究。初步选定的工艺条件为：果汁与水的比例为1：1，食盐水浓度为22．5％～25％（W／V），pH值范围在4．0～4．8间，低温沉淀8～10h。粗酶的平均提取率约为0．765％。

草苁蓉碱性化学成分研究

利用气相色谱-质谱-计算机联用仪,对长白山草苁蓉中碱性组分进行研究,色谱图中共出峰35个,计算机检索鉴定出 14种成分,其中包括具有显著生物活性的猕猴桃碱等生物碱类成分4种。

藤梨根抗病毒活性部位的初步筛选

目的通过体外药效实验筛选藤梨根的抗病毒活性部位,初步确定其活性部位的大致成分,为进一步开发利用藤梨根奠定基础。方法通过MTT实验及对HBsAg和HBeAg的检测,筛选抗乙肝病毒的活性部位。结果乙醇提取部分(A1)、乙酸乙酯提取部分(Y)对HBeAg和HBsAg的抑制率TI>2,提示对两者抑制作用较强,对试验细胞无明显毒性。结论根据结果初步认为A1是藤梨根抗肝炎病毒的活性部位,在体外有较强抗肝炎病毒活性,对正常细胞的影响较小。

猕猴桃碱类的化学研究进展

归纳总结了猕猴桃碱类的结构特性 ,波谱特征以及化学合成等方面的研究。

猕猴桃果实特异表达异戊烯基转移酶基因植物表达载体的构建

以pBI121质粒为载体,将猕猴桃素基因启动子与ipt编码基因连接,构建猕猴桃果实特异表达ipt嵌合基因。

“米良1号”猕猴桃的营养成分及防癌作用的探讨

主要介绍了“米良1号”猕猴桃的营养成分及其含量，对猕猴挑的抗癌作用与小檗碱抗癌作用进行了探讨，认为猕猴桃抗癌作用不单是维生素C，而可能是猕猴桃中高含量的维生素C、猕猴桃碱及无机元素联合作用的结果。

邻苯二甲醛修饰法探测中华猕猴桃蛋白酶在胍溶液中活性部位的构象变化

The thiol group and amino group at the active site of actinidin were modified by o-phthaldehyde to form a fluorescence group with excitation and emission wavelength maxima at 345 um and 416 nm respectively. The fluorescence group was then used to probe the conformational changes of the modified enzyme in guanidine hydrochloride (GuHCl) solution. Results were compared with the changes of activity as well as fluorescence and CD spectra of unmodified actinidin in GuHCl sloutions. It is shown that the conformational changes of the enayme active site parallel the enzyme inactivation, and both of them precede the conformatvonal changes of the enzyme as a whole revealed by fluorescence and CD spectra.

猕猴桃引种试验研究初报

从国内 4个猕猴桃产区引进猕猴桃品种 6个 ,在甘肃省天水市布设建园试验观测点 4处 ,对各品种的生长、结果及抗性进行了连续 5年的观察。原产地为陕西省周至县的秦美和秦翠猕猴桃生长快、结果早 ,对本地气候、土壤条件有较好的适应性 ,建园第 4年单株产量分别达到 1 7.9kg和 1 3.5 kg,适宜作为良种在本地推广。区域试验表明 ,温度及越冬条件是限制猕猴桃栽培范围的主导因素 ,年平均温度低于 1 1℃时 ,猕猴桃生长慢 。

猕猴桃蛋白酶在胍中“慢构象快活力变化”现象

比较了猕猴桃蛋白酶(Actinidin)在盐酸胍中变性时的荧光变化与活力变化的关系。当胍浓度为0.1 mol/l时,酶的最大荧光发射波长λ_(max)不变,荧光强度上升。此时酶被激活,活力提高25％,激活速度比变性速度快5.0倍。胍浓度逐渐增大,酶λ_(max)略红移,4.0 mol/l时达336 nm。但荧光强度降低,酶表现为快相和慢相失活的二个一级反应,失活速度常数比变性速度常数快 1～3个数量级。Actinidin 的激活与失活现象显示这可能与活性部位相关的 Trp 微环境的构象变化有关。胍变性结果指出 Actinidin 构象变化速度小于活力变化速度,这代表酶变性反应时慢构象变化快活力变化的一种模式。

中华猕猴桃蛋白酶羧基的化学修饰

有关中华猕猴桃蛋白酶(Actinidin,E C 3、4.22.14)催化功能基团的研究表明:CYSH—25、His—161为酶活性部位必需基团,而Lys和Trp残基为酶活力表现所必需。本文中报道应用水溶性碳二亚胺(EDC)修饰动力学方法。

酶活性不可逆改变的底物保护动力学

根据邹氏的酶活性不可逆改变动力学理论,我们创建一种测定微观动力学参数方法判断底物对酶活力是否有保护作用,这对阐明酶的空间结构与功能、酶构象变化与活力变化的关系具有重要的科学意义,应用此法判断猕猴桃蛋白酶(Actinidin)在4mol/l盐酸胍和8mol/l脲的失活底物保护是否存在,实验结果表明:1)Actinidin在4mol/l盐酸胍失活过程受到底物一定程度的保护,2)Actindin在8mol/l脲失活过程底物对它完全保护.以上结果也提示了胍、脲作用机制不尽相同。

中华猕猴桃蛋白酶在半极性介质中的构象变化和动力学研究

三种有机溶剂,二氧六环、二甲基甲酰胺和乙二醇,都不同程度地抑制中华猕猴桃蛋白酶催化水解赖氨酸对硝基本酯(CBZ-LYS-pNP)能力,其动力学行为符合Michaelis-Menten方程式,二氧六环的抑制作用类似于竞争性抑制类型,二甲基甲酰胺和乙二醇为非竞争性抑制,其抑制常数,分别为k_1=5.6×10^(-2)、0.58和1.60mol/L,光谱分析表明,酶在有机溶剂中,空间构象也发生了变化,随着二氧六环和二甲基甲酰胺浓度的增大,酶分子的α-螺旋度下降,无规卷曲度上升,荧光发射强度比天然酶略有增高或降低,变化的规律性不够,紫外差光谱显示,酶在6％二甲基甲酰胺中有一个243nm的负峰,此负峰随浓度的增大而增大,并略向红移,在24％二甲基甲酰胺中,负峰红移至248nm处。

中华猕猴桃蛋白酶在甲醇溶液中的构象与活力变化研究

研究中华猕猴桃蛋白酶在不同浓度（Ｖ：Ｖ）甲醇存在下的内源荧光发射光谱、紫外差光谱及ＣＤ光谱的变化，并测定相应的活力变化；酶的内源荧光强度随甲醇浓度的增加而增高，且发射峰略有红移．在甲醇存在下，酶的紫外差光谱在２２５～２３５ｎｍ范围内出现正峰，随甲醇浓度增高，峰强度增大，且峰位蓝移．ＣＤ谱变化表明，在不同浓度甲醇存在下，酶的ａ──螺旋度有不同程度的减少．在１０％～５０％甲醇存在下，酶有不同程度的激活现象，当甲醇浓度为３０％和４０％时，激活程度最大，约为天然酶活力的１５０％．

中华猕猴桃蛋白酶经有机溶剂处理后的激活动力学行为

中华猕猴桃蛋白酶经有机溶剂处理后的激活动力学行为颜青，林青松，颜思旭（抗癌研究中心）（生物学系）由于酶在有机溶剂中的催化反应的研究日益得到国际上的广泛重视，本实验室近年来逐渐开展了中华猕猴桃蛋白酶在半极性介质中的分子折叠与活力关系的研究工作［１，２］...

猕猴桃蛋白酶及发酵剂对马肉发酵香肠品质特性的影响

研究发酵剂和猕猴桃蛋白酶对马肉发酵香肠品质的影响。以新鲜马肉为原料,添加发酵剂和猕猴桃蛋白酶进行发酵,检测其对马肉发酵香肠p H值、水分活度(water activity,aw)、水分含量、色差以及硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid,TBA)值等的影响,并通过对成品进行感官评价确定发酵剂和猕猴桃蛋白酶对其感官品质的影响。结果表明:与对照组相比,发酵剂处理组(A组)显著降低了马肉发酵香肠的pH值、aw和TBA值,加快了水分含量的下降,提高了亮度值(L~*)和红度值(a~*),后期黄度值(b~*)略有下降;与A组相比,发酵剂和猕猴桃蛋白酶处理组(B组)提高了其pH值,降低了aw,加快了水分含量的下降,而对a~*、L~*、b~*影响不大,对TBA值无显著影响;对成品的感官评价结果表明,B组马肉发酵香肠的口感较A组和对照组好。

中华猕猴桃蛋白酶在乙醇溶液中的分子折叠

研究了中华猕猴桃蛋白酶在不同浓度（Ｖ：Ｖ）乙醇存在下的内源荧光发射光谱、紫外差光谱、圆二色光谱（ＣＤ谱）及傅立叶变换红外光谱的变化，并测定了相应的活力变化，当乙醇浓度低于３０％时，酶的荧光强度无明显变化，而乙醇浓度大于３０％时，则酶荧光强度增大，且峰位略红移。在乙醇溶液中，酶的紫外差光谱在２２５～２３５ｎｍ内出现正峰，峰强度随乙醇浓度的增高基本表现为逐渐增大，峰位也逐渐蓝移。ＣＤ谱及红外光谱的测定结果表明低浓度乙醇中酶分子有序二级结构的减少及高浓度乙醇中β－折叠含量的增加．随乙醇浓度的增加．酶的活力表现为逐渐降低，且乙醇对酶的失活作用类似于竞争性抑制。

中华猕猴桃蛋白酶在盐酸胍中分子折叠与活力的关系

中华猕猴桃蛋白酶(Actinidin)在盐酸胍溶液中活力变化结果提示:酶在0.1mol/L胍中活力略有升高,随胍浓度增大,活力先经历一个陡降区,在1—2mol/L胍中有个稳定区域,随胍浓度增大,活力继续下降。同时以荧光光谱,圆二色光谱研究该酶分子的构象变化。结果表明引起酶构象发生明显变化所需胍浓度(3mol/L)远比酶明显失活所需胍浓度(0.5mol/L)大。相同胍浓度下酶活力丧失速度快于构象变化速度。经5mol/L胍变性的酶直接稀释至胍浓度为0.05mol/L时,酶活力不能恢复,而构象迅速恢复。失活酶先稀释至胍浓度为1—2mol/L、再进一步稀释至胍浓度为0.05mol/L,活力能恢复50％左右。以上结果表明,相对于整个酶分子来说,活性中心的构象变化对变性剂更敏感。Actinidin的失活及复活过程是多相的复杂过程。

生姜蛋白酶和猕猴桃蛋白酶对干腌羊火腿微生物菌相变化的影响

研究生姜蛋白酶和猕猴桃蛋白酶对干腌羊火腿微生物菌相变化的影响。采用聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳技术对鲜羊腿(0 d)、腌制3 d以及对照组、生姜蛋白酶添加量0.05%组(S组)、猕猴桃蛋白酶添加量0.05%组(M组)风干前期(8 d)、风干中期(15 d)、风干后期(23 d)、成熟期(30 d)工艺点的干腌羊火腿微生物菌相变化进行测定。结果表明:腐生葡萄球菌(Staphylococcus saprophyticus)、表皮巨球菌(Macrococcus epidermidis)、土壤葡萄球菌(S. edaphicus)、哈夫尼亚菌(Hafnia paralvei)、明串珠菌(Leuconostoc gelidum)是各组干腌羊火腿的优势菌,其中葡萄球菌属种类较多;2种蛋白酶可丰富干腌羊火腿微生物的种类;生姜蛋白酶和猕猴桃蛋白酶处理组成熟30 d时均出现木糖葡萄球菌(S. xylosus);在整个加工过程中,干腌羊火腿微生物菌相变化较稳定,受2种蛋白酶的影响不大。

发酵剂及猕猴桃蛋白酶促进马肉发酵香肠蛋白质的降解

为了提高马肉发酵香肠的品质,添加发酵剂和猕猴桃蛋白酶,促进其发酵成熟和肌肉蛋白质的降解。以新鲜马肉和马脂肪为原料,分别设计三个试验组,一组为对照组,另两组为处理组;对照组不采取处理,而两个处理组添加2%的发酵剂和0.05%的猕猴桃蛋白酶,并在相应条件下进行发酵,检测其总氮、非蛋白氮等指标,并通过SDS-PAGE电泳分析其肌肉蛋白质的降解情况。结果表明,灌肠后(0 d)各组总氮含量为3.09 g/100 g左右,而加工结束后(28 d),对照组(CK组)、发酵组(A组)、猕猴桃蛋白酶组(B组)总氮含量分别是3.41 g/100 g、3.85 g/100 g及4.15 g/100 g,说明总氮含量明显上升,并且发酵剂和猕猴桃蛋白酶的影响显著;28 d CK组、A组、B组非蛋白氮含量分别为0.42 g/100 g、0.52 g/100 g、0.65 g/100 g,与0 d非蛋白氮含量0.22 g/100 g相比,CK组上升1.9倍,A组上升2.4倍,B组上升2.9倍;SDS-PAGE电泳结果表明,在整个加工过程中A组与B组肌浆蛋白逐渐发生降解,大分子条带发生了明显的变化,发酵剂对马肉发酵香肠肌浆蛋白和肌原纤维蛋白的降解有显著的促进作用,猕猴桃蛋白酶对肌浆蛋白的影响显著,并比发酵剂大,但对肌原纤维蛋白的作用不大。