肠道病毒D组68型假病毒的构建

目的制备携带萤火虫荧光素酶报告基因的肠道病毒D组68型(enterovirus D68,EV-D68)假病毒。方法分别构建携带绿色荧光蛋白报告基因的EV-D68表达子和携带萤光虫荧光素酶报告基因的EV-D68复制子,共转染HEK-293T细胞后收获EV-D68假病毒;实时逆转录聚合酶链反应(reverse transcription PCR,RT-PCR)及蛋白质印迹法(Western blotting)鉴定EV-D68假病毒;实时荧光定量PCR检测假病毒滴度,荧光强度定量检测假病毒感染活性。结果成功构建EV-D68表达子和复制子;成功制备EV-D68假病毒,RT-PCR和Western blotting结果表明其具有萤火虫荧光素酶报告基因和与活病毒相同的衣壳蛋白,拷贝数为(4~8)×10^6 copies/mL,荧光强度与假病毒感染剂量呈正相关,证明其具有感染活性。结论成功构建了EV-D68假病毒。

儿童急性弛缓性脊髓炎4例临床特点分析

目的总结儿童急性弛缓性脊髓炎(AFM)的临床表现、诊治经验和预后。方法回顾性病例总结,对首都儿科研究所附属儿童医院神经内科2018年9月至2022年11月收治的4例临床诊断AFM患儿的病例资料进行临床特点分析。结果4例AFM患儿年龄分别为7岁、4岁3月龄、7岁1月龄、6岁5月龄,女2例、男2例。前驱呼吸道感染3例、消化道感染1例。以感染后出现不对称肢体无力为主要表现,受影响肢体范围从单一肢体到四肢。所有患儿均无脑病表现,1例患儿出现周围性面瘫。4例患儿脊髓磁共振成像均提示长节段长T1长T2信号,以灰质受累为主。2例患儿出现脑脊液细胞-蛋白分离现象。1例咽拭子病原体检出肠道病毒D68;1例患儿血液中腺病毒抗体IgM阳性;1例患儿血液中埃可病毒、柯萨奇B组病毒抗体IgG阳性。4例患儿经过糖皮质激素、人免疫球蛋白或单纯对症治疗,同时在后期康复训练下,肌力不同程度恢复,3例遗留有残疾。结论以感染后、急性、不对称肢体无力起病伴有磁共振成像脊髓中央区域异常信号的患儿需考虑AFM,目前有效治疗手段有限且预后不良。

2012-2014年菏泽市15岁以下急性脊髓炎病例监测

目的对菏泽市2012-2014年15岁以下急性脊髓炎病例监测情况进行分析研究,初步评价菏泽市15岁以下脊髓炎病例报告监测和临床诊治工作进展,掌握其发病流行状况及规律,为保持无脊灰状态工作和脊髓炎病例诊治提供科学依据。方法根据急性弛缓性麻痹病例网络直报系统资料、流行病学个案调查资料、临床诊断资料和实验室病毒检测结果进行分析研究。结果菏泽市2012-2014年共报告15岁以下脊髓炎病例20例。2012-2014年15岁以下脊髓炎病例年平均报告发病率为0.38/10万。20例病例分布在全市9县区的20个乡镇(办事处)的20个行政村(社区),高度散发。48 h及时调查率为100.00%,合格大便标本采集率为100.00%。未检测到脊灰野病毒,1例检测到II型脊灰疫苗病毒,脊灰疫苗病毒分离率为5.00%,未检测到脊灰疫苗衍生病毒与疫苗高变异病毒。非脊灰肠道病毒分离率5.00%。结论菏泽市15岁以下脊髓炎病例报告监测和诊治工作取得了很大进展,但仍有不足之处。建议仍应加强15岁以下脊髓炎病例报告监测和诊治工作。

肠道病毒D组68型的流行特征和基因型分布

肠道病毒D组68型(enterovirus D68,EV-D68)属于小核糖核酸病毒科肠道病毒属,为无包膜单股正链病毒。EV-D68主要通过呼吸道传播,引起急性呼吸道感染,其诊断方法主要是通过聚合酶链式反应(PCR)对呼吸道标本进行核酸序列测定、病毒分离、血清学诊断。近年来全球不断有EV-D68相关疾病暴发,尚无有效的疫苗或抗病毒治疗方法,故需进一步监测EV-D68的流行趋势,为将来防控EV-D68引发的呼吸道感染暴发奠定基础。

人肠道病毒D68研究新进展

人肠道病毒-D68是小RNA病毒科、肠道病毒属D组成员,于1962年首次被分离鉴定,2005年以来在全球多个地区频繁暴发,引发严重的呼吸系统和中枢神经系统症状,危害公众健康。目前对EV-D68的研究主要集中在流行病学,其病毒学特征及发病机制仍有待进一步探究。本文就近期EV-D68病毒流行的基因特征、感染机制、与宿主相互作用及其与新发神经系统疾病关系的研究进展做一综述,期望为EV-D68致病机制的研究及抗病毒治疗提供有效信息。

肠道病毒D68感染对小鼠间质性肺炎及急性弛缓性脊髓炎发生的影响

目的探讨肠道病毒(EV)D68感染的新生小鼠对间质性肺炎及急性弛缓性脊髓炎(AFM)发生的影响。方法将108只雌性SD小鼠随机分为三组,每组各36只。实验组:经小鼠腹腔注射250μl/只纯化的EV-D68菌液;对照组:经小鼠腹腔注射250μl/只EV-D68 VP1抗体(GT1843);空白组:经小鼠腹腔注射250μl/只PBS溶液。于注射后第1、3、5、7、9、14 d在3组中分别随机抽取6只小鼠,收集尾静脉血血清离心后冻存备用,随即处死无菌取小鼠肺组织和脑组织固定后制片,定量PCR检测肺、脑组织中EV-D68 DNA载量,HE染色观察脑、肺组织病理变化,透射电镜观察脑组织超微结构。结果较空白组小鼠,实验组小鼠注射后第3 d在肺组织中即可检测到EV-D68 DNA,注射后第5 d在脑干和脊髓组织中检测到EV-D68 DNA,且随着时间的延长,EV-D68 DNA载量逐渐上升,在第14 d达到最高峰;对照组小鼠各时间段EV-D68 DNA载量均少于实验组小鼠。HE染色结果显示,空白组小鼠肺、神经组织无病变;实验组小鼠感染后第3 d肺组织中即出现典型的EV-D68病变效应,肺组织细胞坏死,出现典型的神经元损伤和嗜神经现象;对照组小鼠较实验组小鼠肺、神经损伤有所缓解。结论EV-D68可迅速感染肺部、脑干和脊髓等多器官组织,为EV-D68的嗜神经性提供了亚细胞水平的病理学依据;另EV-D68对肺部组织和神经系统的损伤机制具有较强的时序性表达特点,EV-D68抗体不能完全消除该损伤。