治疗相关的急性髓系白血病实验室和临床特征分析(附40例)

目的:分析40例治疗相关急性髓系白血病(t-AML)患者免疫标志跨系异常表达及其它实验室与临床特征。方法:回顾性分析2014年1月至2021年12月我院血液科40例t-AML患者的实验室和临床资料,实验室和临床资料数据通过查阅电子病历系统和实验室数据管理系统获得。采用SPSS 25.0软件进行数据分析。结果:40例患者第一肿瘤至t-AML的中位发病间隔期为21(16~41)个月;24例(60.0%)伴淋系抗原异常表达,27例(67.5%)染色体核型异常,18例(45.0%)融合基因阳性,27例(67.5%)基因突变阳性;中位RFS为11.0(1.0~79.0)个月,中位OS为11.5(1.0~80.0)个月。结论:与既往文献关于原发AML的报道相比,t-AML患者中跨系抗原表达比例高,发生基因突变的比例也高。

输血相关急性肺损伤的免疫机制

输血相关急性肺损伤(TRALI)是接受任何血制品期间或6h内新出现的急性肺损伤,是输血相关发病和死亡最常见的原因之一。基础和临床研究均表明血制品输注后免疫启动是肺损伤必需的步骤,抗原抗体反应触发一系列事件导致TRALI,主要涉及血制品人类白细胞抗原(HLA)和中性粒细胞抗原(HNA)抗体。TRALI重在预防,未来发病机制仍将是其研究重点。

WT1、PRAME和ERG基因在儿童急性白血病中的表达

目的研究肾母细胞瘤基因(WT1)、黑色素瘤优先表达抗原(PRAME)和ETS相关基因(ERG)在儿童急性白血病(AL)中的表达特点,并分析其在白血病微小残留病灶(MRD)监测中的意义。方法收集92份AL标本(84例患儿),其中初发标本28份,包括急性淋巴细胞白血病(ALL)标本18份,急性髓系白血病(AML)标本10份;AL完全缓解标本63份,包括ALL标本45份,AML标本18份;AL复发标本1份。采用Real-time PCR法检测AL患者骨髓中WT1、PRAME和ERG mRNA的相对表达量,并以同期住院的10例非恶性血液病患儿为对照。结果 AL初发组患儿的WT1、PRAME和ERG mRNA相对表达量均显著高于缓解组和对照组(P<0.05),但缓解组和对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);AML初发组的PRAME mRNA相对表达量显著高于ALL初发组(P<0.05)。28例初发组WT1、PRAME和ERG mRNA的阳性表达率分别为82.4%、92.9%和64.3%,三者间比较差异有统计学意义(P<0.05);三种基因联合检测的阳性率为100%。跟踪15例AL初发患者,诱导化疗缓解后三种基因的相对表达量均显著低于诱导化疗前(P<0.05)。1例复发患者初发时三种基因均呈阳性表达,缓解后转为阴性,复发时又变为阳性。结论与非白血病患者相比,WT1、PRAME和ERG mRNA在AL初发患者的骨髓中高度表达,三种基因联合检测可提高阳性率。AL患者的WT1、PRAME、ERG mRNA表达水平与疾病状态相关,适用于MRD的监测。

lncRNA HCG18调控miR-324-5p/GLI1轴在急性髓系白血病细胞增殖和侵袭中的作用机制

目的长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18(lncRNA HCG18)调对急性髓系白血病(AML)的作用机制尚不清楚。探讨lncRNA HCG18控微小RNA-324-5p(miR-324-5p)/胶质瘤相关基因同源蛋白1(GLI1)轴对AML细胞增殖、迁移与侵袭的影响。方法选择2017年1月-2021年3月在本院血液科住院治疗的AML患者35例作为研究对象(AML组),另选取同期在本院治疗并进行骨髓穿刺检查的非血液系统肿瘤性疾病患者30例作为对照组,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测所有入选人员骨髓单个核细胞中lncRNA HCG18与miR-324-5p的表达。体外培养AML细胞HL-60,将细胞分为对照组、si-NC组、lncRNA HCG18 siRNA组、miR-NC组、miR-324-5p mimics组、miR-324-5p mimics+GLI1 NC组、miR-324-5p mimics+GLI1组、lncRNA HCG18 siRNA+NC inhibitor组、lncRNA HCG18 siRNA+miR-324-5p inhibitor组,分别检测检测HL-60细胞中lncRNA HCG18、miR-324-5p表达、HL-60细胞增殖、迁移与侵袭及GLI1、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达。双荧光素酶报告系统分析miR-324-5p与lncRNA HCG18、GLI1的靶向关系。结果与对照组比较,AML组患者骨髓单个核细胞中lncRNA HCG18表达水平(2.85±0.32)较对照组(1.03±0.11)显著升高(P<0.01),而miR-324-5p表达水平(0.47±0.05)较对照组(1.05±0.09)显著降低(P<0.01);沉默lncRNA HCG18表达或过表达miR-324-5p后HL-60细胞增殖、细胞迁移与侵袭数、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达显著降低(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验显示,miR-324-5p与lncRNA HCG18、GLI1均有靶向关系;抑制miR-324-5p表达可逆转沉默lncRNA HCG18表达对HL-60细胞增殖、迁移与侵袭的抑制作用;GLI1过表达可逆转过表达miR-324-5p对HL-60细胞增殖、迁移与侵袭的抑制作用。结论lncRNA HCG18在AML细胞中高表达,抑制lncRNA HCG18表达可通过调控miR-324-5p/GLI1轴抑制AML细胞增殖、迁移与侵袭。

急性淋巴细胞白血病免疫分型研究

使用一组单克隆抗体及抗ＩｇＭ多抗对２４例急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）细胞表面抗原标志进行分析。结果表明：急性非Ｔ细胞白血病（Ｎｏｎ－Ｔ－ＡＬＬ）为６２．５０％，急性Ｔ细胞白血病（Ｔ－ＡＬＬ）为２９．１７％，急性未分化型白血病（ＡＵＬ）为４．１７％，急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ－Ⅱ）为４．１７％。Ｎｏｎ－Ｔ－ＡＬＬ－Ⅰ型以ＨＬＡ－ＤＰ＋，Ⅱ型以ＣＤ１９＋，Ⅲ型以ＣＤ１０＋，Ⅳ型以ＣＤ２０＋，Ⅵ型以ＳＩｇＭ＋为诊断条件。Ｔ－ＡＬＬ－Ⅰ期以ＣＤ７＋、Ⅲ期以ＣＤ３＋、ＣＤ４＋或ＣＤ８＋为诊断条件，其它表面抗原变化不定。Ｔ－ＡＬＬ中ＨＬＡ－ＤＰ表达率达４２．８６％。２４例ＡＬＬ中３例为Ｂ－Ｔ杂合型白血病，占１２．５０％，均分布在Ｎｏｎ－Ｔ－ＡＬＬ之中。ＦＡＢ形态学分型符合率为９５．６５％。非诊断性表面抗原标志的变化是进一步分亚型的依据，也可能与药物敏感性等治疗和预后相关。

人CD_(137)单抗对急性白血病T淋巴细胞亚群的影响及意义

目的:探讨人CD137单抗对急性白血 病(acuteleukemia,AL)T淋巴细胞亚群的影 响,及其在AL免疫治疗中的作用和意义。方 法:采用免疫荧光标记、流式细胞术(FACS) 及体外细胞培养技术,分析人CD137单抗刺激 前后22例初治AL患者外周血T淋巴细胞亚 群的变化特点。结果:人CD137单抗可诱导初 治患者外周血T细胞CD3、CD4和CD4/CD8 比值显著升高,P<0.05;从而使其T细胞亚 群接近正常,而对于对照组T细胞亚群几无 影响。结论:人CD137单抗可逆转初治AL患者 T细胞缺陷或失衡,使T细胞亚群恢复或接近 正常,这对改善患者基础免疫状态,配合联合 化疗,具有重要意义;CD137单抗可促使CD4、 CD8T细胞增多,从而参与抗肿瘤免疫反应,可 能是AL免疫治疗的重要方法之一,具有一定 的临床应用价值。

IL-2激活的AL骨髓细胞免疫表型变化意义的体外研究

目的：探讨ＩＬ－２激活的急性白血病骨髓细胞抗原表达的变化及其在临床治疗上的意义分析。方法：用ＡＰＡＡＰ免疫酶标法检测１０例经ＩＬ－２激活的急性白血病患者骨髓细胞相关抗原标记及活化过程中的变化。选出其中可供分析的急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）３例，急性髓细胞性白血病（ＡＭＬ）３例进行讨论。结论：急性白血病骨髓细胞在激活后ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１６、ＣＤ５６均有变化，尤其是ＣＤ＋５６细胞在ＡＭＬ和ＡＬＬ中有明显差异。结论：结合化疗效果分析，表明高表达ＣＤ＋５６者对常规化疗不敏感。据此可选择治疗方案、预测疗效。

HTLV-I相关抗原及其抗体在AML细胞表面的表达

应用直接免疫金银染色法和直接酶免疫法分别检测３７例急性髓系白血病（ＡＭＬ）患者白血病细胞培养前后其表面ＨＴＬＶ－Ｉ相关抗原及其抗体的变化。结果表明，培养前ＨＴＬＶ－Ｉ相关抗原的患者阳性率、细胞阳性率（％，ｘ±ｓ）分别为２７．０％（１０／３７）、１６．８９±２７．７４，培养６天后分别上升至７８．４％（２９／３７）、４３．４４±３０．０６，分别经χ２检验和ｔ检验表明均有显著性差异（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．００１）。培养前ＨＴＬＶ－Ｉ相关抗体的患者阳性率、细胞阳性率（％，ｘ±ｓ）分别为７３．０％（２７／３７）、４８．２１±３４．３０，培养６天后未能检测出ＨＴＬＶ－Ｉ相关抗体。２０例对照采用相同的细胞分离、培养和检测手段无阳性发现。进一步分析表明，培养前ＡＭＬ细胞表面ＨＴＬＶ－Ｉ相关抗原及其抗体表达的细胞阳性率之间呈明显负相关（ｒ＝－０．５６，Ｐ＜０．０１）。从而推论ＡＭＬ可能与外源性。

急性非淋巴细胞白血病免疫分型研究

使用一组单克隆抗体对27例急性非淋巴细胞白血病(ANLL)进行免疫学分型。其结果:ANLL-Ⅰ型只表达 HLA-DP 或 CD_9。CD_9在 ANLL-Ⅱ和 ANLL-Ⅲ型中与 CD_(33)相伴表达。在ANLL 中 HLA-DP>CD_(33)>CD_(13)>CD_(15)>CD_9>CD_(14),其表达率分别为65.38%,50.00%,34.62%,30.77%,23.08%,19.23%。CD_(13)、CD_(15)、CD_(33)共同表达率为7.69%,CD_(13)与 CD_(15)和 CD_(15)与CD_(33)共同表达率为11.54%,CD_(13)与CD_(33)共同表达率为19.23%,因此 CD_(13),CD_(15),CD_(33)应联合使用。粒—淋杂合型 ANLL 占7.69%。FAB 形态学分型与免疫学分型符合率为96.30%。结果提示免疫学分型有利于 ANLL 与 ALL 的鉴别和治疗方案的选择。

成功救治2例CAR-T细胞治疗后伴严重细胞因子风暴和相关性脑病伴文献复习

目的探讨CAR-T相关性脑病综合征(CRES)和细胞因子释放综合征(CRS)的临床诊治。方法复习2例CAR-T细胞治疗后伴严重细胞因子风暴和相关性脑病患者临床资料及治疗经过,并结合文献复习。结果2例患者均表现为癫痫、发热、血压下降、低氧血症、窦性心动过速及凝血功能异常。CRP、血清铁蛋白(SF)、白细胞介素(IL)-2、IL-6和IL-10均明显升高。诊断为CRS(3级)和CRES(3级)。CRS发病时间为CAR-T细胞输注后第2 d和第7 d,而CRES发病时间为第4 d和第10 d。第1例患者使用托珠单抗(8 mg/kg)联合DXM(20 mg/d)治疗,临床症状迅速缓解。第2例患者出现CRS加用托珠单抗(8 mg/kg)及DXM(20 mg/d)治疗后,仍发生CRES,改为甲强龙(1 g/d),临床症状缓解。结论密切监测CAR-T细胞治疗后的不良反应,及时有效地处理CRS和CRES,有助于提高CAR-T细胞治疗的安全性。

人类白细胞抗原抗体引起输血相关急性肺损伤发病原因分析

2019年9月至2020年10月广州血液中心对临床诊断为人类白细胞抗体引起输血相关急性肺损伤(TRALI)的3例患者进行发病原因分析,包括男2例,女1例,年龄分别为56、50及20岁。通过固相凝集法、抗人球蛋白试验及流式细胞术检测供者体内是否存在针对患者的抗体;采用基于测序的人类白细胞抗原(HLA-SBT)分型技术检测患者的人类白细胞抗原(HLA)基因型;采用Lifecodes HLA-Ⅰ/Ⅱ类单抗原特异性抗体检测试剂(LSA-Ⅰ/Ⅱ),通过Luminex 200液相悬浮芯片系统检测供者血液中的HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗体特异性;并分析供者体内针对患者HLA的特异性抗体及相应抗原决定簇。结果显示,供者体内检出针对TRALI患者的HLA-Ⅰ或Ⅱ类特异性抗体,其中患者1接受的供者3血浆中含有针对患者HLA-DRB1^(*)09∶01抗原的抗体,介导供受者抗原抗体反应的抗原决定簇为70R、31I、70QA;供者4血浆中存在针对患者2的HLA-A^(*)11∶02、HLA-A^(*)11∶01、DRB1^(*)12∶02及DRB1^(*)09∶01抗原的抗体,相关抗原决定簇为151AHA、57V和16Y;供者6和供者7血浆中存在针对患者3的HLA-DRB1^(*)14∶04、DRB1^(*)11∶01及DPB1^(*)05∶01抗原的抗体,相关抗原决定簇为96HK、140TV、13SE及111K。通过实验室检测分析明确了3例TRALI病例是由HLA抗体引起的,对临床疑似TRALI病例应重视HLA抗体检测,并给予针对性的诊断及治疗。

血液肿瘤和实体瘤治疗相关急性髓系白血病的临床特点分析

目的探讨血液肿瘤和实体瘤治疗相关的急性髓系白血病(t-AML)的临床特点。方法回顾性分析2014年1月至2021年12月河南省肿瘤医院41例t-AML患者的临床病理资料, 分为血液肿瘤组t-AML(n=28)和实体瘤组t-AML(n=13)。生存分析采用Kaplan-Meier法和Log rank检验。结果 41例患者第一肿瘤至t-AML的中位发病间隔时间为21.0个月(16.5~46.0个月);24例(58.5%)伴淋系抗原异常表达, 28例(68.3%)染色体核型异常, 18例(43.9%)融合基因阳性, 28例(68.3%)基因突变阳性;中位无复发生存时间(RFS)为11.0个月, 中位总生存时间(OS)为11.5个月。血液肿瘤组t-AML患者急性早粒细胞白血病(APL)比例(0.0, 0/13)、达到完全缓解(CR)的比例(18.2%, 2/11)、中位OS(4.5个月)和中位RFS(2.5个月)低于实体瘤组[分别为35.7%(10/28)、68.0%(17/25)、均未达到], 但M4/M5比例(93.2%, 12/13)高于实体瘤组[53.6%(15/18), 均P<0.05]。实体瘤组PML-RARa基因阳性和预后良好核型比例[分别为35.7%(10/28)和46.4%(13/28)]高于血液肿瘤组[0.0(0/13)和0.0(0/13), 均P<0.05], 而预后中等核型比例(42.9%, 12/28)低于血液肿瘤组[84.6%(11/13), P<0.05]。治疗相关急性早幼粒细胞白血病(t-APL)组患者CR比例(90.0%, 9/10)、中位OS(未达到)和中位RFS(未达到)均高于无APL的t-AML组[分别为38.5%(10/26)、6和8个月, 均P<0.05]。剔除t-APL患者影响后, 实体瘤组患者CR患者例数8例、中位OS(9个月)和中位RFS(未达到)与血液肿瘤组(分别为2例、4和2个月)比较, 差异均无统计学意义(均P>0.05)。单因素分析结果显示, 原发肿瘤为血液肿瘤是影响t-AML患者OS和RFS的危险因素(均P<0.10)。结论与实体瘤继发的t-AML患者比较, 血液肿瘤继发的t-AML患者治疗效果差, 预后差;剔除t-APL患者的影响后, 血液肿瘤与实体瘤治疗相关的t-AML患者间治疗效果和预后无明显差异。

抗CD19嵌合抗原受体T细胞IM19在B细胞肿瘤中的安全性及疗效研究

目的:评价抗CD19嵌合抗原受体T(chimeric antigen receptor T,CAR-T)细胞IM19在复发难治B细胞血液系统恶性肿瘤中的疗效及安全性。方法:12例复发难治B细胞血液系统恶性肿瘤患者接受IM19治疗,包括6例B细胞非霍奇金淋巴瘤和6例急性B淋巴细胞白血病患者。患者接受3×10~5～10×10~5cells·kg^(-1)CAR-T细胞输注。细胞回输后1和3个月评估疗效,并监测不良反应事件的发生情况,同时检测细胞扩增以及细胞因子释放。结果:12例患者中有11例达到完全缓解,患者体内可以检测到IM19扩增,以及白介素-6和白介素-10水平升高。没有患者发生≥3级的细胞因子释放综合征和CAR-T细胞相关的神经系统毒性。结论:IM19治疗复发难治B细胞血液系统恶性肿瘤安全有效。