Ad-HIF-1α-Trip肌肉注射对大鼠缺血肢体血管新生和血液灌注的影响

目的研究重组腺病毒低氧诱导因子-1α三突变体(the recombinant adenovirus containing the triple-pointmutants HIF1-αgene,Ad-HIF-1α-trip)基因对大鼠缺血后肢血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达、血管新生及血流灌注的影响。方法 48只2月龄雄性Wistar大鼠(体质量0.200～0.250 kg)建立急性左后肢缺血模型,应用随机数字表法随机分成4组(n=12):生理盐水组(Saline组),腺病毒空载体组(Ad-Null组)、重组腺病毒低氧诱导因子-1α组(Ad-HIF-1α)、Ad-HIF-1α-trip组。分别在建模后即刻肌注生理盐水、Ad-Null、Ad-HIF-1α、Ad-HIF-1α-trip0.5 ml,病毒滴度4×109PFU。术后7 d,行Real-time PCR检测缺血组织HIF-1α及VEGF的表达情况。术前及基因转染后即刻、7、14、28 d对大鼠后肢进行对比超声(contrast enhanced ultrasound,CEU)检查,基因转染后28 d处死动物行病理切片CD31免疫组化微血管密度(microvascular density,MVD)计数。结果基因转染后7 d,在mRNA水平HIF-1α及VEGF在Ad-HIF-1α-trip组大鼠缺血后肢肌肉组织中表达最强[HIF-1α:(2.576±0.019);VEGF:(2.498±0.031),P<0.05];CEU结果显示:Ad-HIF-1α-trip组基因转染后大鼠缺血后肢血流灌注改善明显优于其他各组{基因转染28 d A×β标化值:Saline vs Ad-Null vs Ad-HIF-1αvs Ad-HIF-1α-trip:[(0.529±0.045)vs(0.535±0.062)vs(0.642±0.056)vs(0.895±0.049),P<0.05];CD31免疫组化示:转染后28 d,Ad-HIF-1α-trip组缺血后肢肌肉组织MVD计数明显优于其他各组[Saline vs Ad-Null vs Ad-HIF-1αvs Ad-HIF-1α-trip:(82.316±19.258)vs(89.662±21.374)vs(175.248±31.736)vs(213.426±48.073),P<0.05]}。结论 Ad-HIF-1α-Trip在大鼠缺血肢体肌肉组织能有效表达,促进缺血肢体的血管新生及血流灌注。

Ad-HIF-1α-Trip转染兔缺血后肢的部分安全性研究

目的:探讨Ad-HIF-1α-Trip基因转染兔缺血后肢的部分安全性。方法:22只新西兰大白兔建立急性左后肢缺血模型,随机分为生理盐水组(Saline组,n=6)、腺病毒空载体组(Ad-Null组,n=6)、Ad-HIF-1α-Trip组(n=10)。分别在术后即刻肌注生理盐水、Ad-Null、Ad-HIF-1α-Trip。术后10 d Ad-HIF-1α-Trip组取4只行Real-time PCR了解HIF-1α-Trip转染后在缺血后肢及在心、肝、肾、肺的表达情况;术前、术后3 d、7 d、14 d、28 d,测量体温、体重,检测肝及肾功能、心肌酶;术后28 d对Ad-HIF-1α-Trip组心、肝、肾、肺进行HE染色,了解有无严重病理改变。结果 :转染后10 d,Ad-HIF-1α-Trip组缺血骨骼肌HIF-1α-Trip转染后有确切表达;心、肝、肾、肺未见表达。3组实验兔血常规、肝肾功能指标均在正常值范围,组间对比差异无统计学意义(P>0.05)。Ad-HIF-1α-Trip组心、肝、肾、肺HE染色未见明显异常。结论:Ad-HIF-1α-Trip单次肌肉注射能在兔缺血后肢明确表达,且未发现明显毒副反应。

Ad-HIF-1α双突变体对急性心肌梗死大鼠心功能的短期影响

目的研究重组腺病毒低氧诱导因子-1α双突变体基因(Ad-HIF-1α-564/402)对心肌梗死大鼠心功能的影响。方法 36只雄性SD大鼠建立急性心肌梗死模型,随机分成3组,分别为生理盐水组(Saline组,n=12)、腺病毒空载体组(Ad-Null组,n=12)、Ad-HIF-1α-564/402组(n=12),分别在术后即刻肌肉注射0.1 m L生理盐水、Ad-Null、Ad-HIF-1α-564/402,病毒滴度1.0×10~8PFU。术后7d,行心脏超声检查,了解心功能情况;检测血清中肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白I(c Tn I)含量;氯化三苯基四氮唑法(TTC)评价心肌梗死面积。结果基因转染后7d,心脏超声结果显示,Ad-HIF-1α-564/402组心功能指标中左室射血分数(LVEF)、心输出量(CO)优于Saline组和Ad-Null组,3组间差异有统计学意义(P<0.05),Saline组和Ad-Null组差异无统计学意义(P>0.05),Ad-HIF-1α-564/402组左室短轴缩短率(LVFS)大于其他两组,但3组间差异无统计学意义(P>0.05);CK-MB、c Tn I在Ad-HIF-1α-564/402组含量较其他两组为低,3组间差异有统计学意义(P<0.05),Saline组和Ad-Null组差异无统计学意义(P>0.05);TTC法评价心肌梗死面积,结果示AdHIF-1α-564/402组心肌梗死面积百分数小于其他两组,3组间差异有统计学意义(P<0.05),Saline组和AdNull组差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Ad-HIF-1α-564/402能减轻心肌梗死大鼠近期心肌损伤,减小梗死面积,改善心功能。