重组腺病毒载体Ad5-EGFP感染人树突状细胞的研究

目的探讨重组腺病毒载体AdS—EGFP感染人树突状细胞（dendritic cell，DC）的最佳条件。方法采用密度梯度离心法分离健康成人外周血中的单个核细胞（PBMC），再以黏附法分离出单核细胞，加入重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（rhGM—CSF）、重组人白细胞介素-4（rhIL-4）、重组人肿瘤坏死因子-α（rhTNF-α）等细胞因子诱导培养出DC，动态观察细胞形态，流式细胞仪检测其表面标志。AdS—EGFP以梯度感染复数值（MOI）10、100、200、400、600、800、1000pfu／cell感染人DC，于感染后24、48h，荧光倒置显微镜观察增强的绿色荧光蛋白（EGFP）表达，KS400型图像分析仪测定感染后48h的感染效率。结果MOI从10-800pfu／cell时，EGFP阳性细胞数量逐渐增多，感染效率和病毒滴度呈量效关系，当MOI为800pfu／cell时可获得较佳的感染效率，EGFP阳性细胞数量达到峰值，感染率达到95．25％。结论Ad5-EGFP是感染人DC的较理想载体，通过选择恰当的MOI值能提高细胞对重组腺病毒的摄人，从而提高感染效率。