小鼠肺腺癌动物模型的建立

目的通过建立小鼠肺腺癌动物模型,为下一步筛选肺腺癌形成过程中重要miRNAs提供实验平台。方法采用Lox-stop-lox K-ras G12D小鼠鼻腔吸入AdCre重组腺病毒的方法建立小鼠肺腺癌模型,以分散酶和Ⅳ型胶原酶酶解消化模型小鼠肺组织为单细胞悬液并以免疫荧光染色的方法检测其CD34、Sca-1的表达情况。结果通过Lox-stop-lox K-ras G12D小鼠鼻腔滴入AdCre成功建立了小鼠肺腺癌模型,模型小鼠中有CD34、Sca-1的表达。结论成功建立小鼠肺腺癌动物模型,为后续筛选小鼠肺腺癌发展过程中重要miRNA提供了实验基础。

2型猪链球菌AdcR蛋白的原核表达

目的表达2型猪链球菌(Streptococcus suis 2)调控因子AdcR蛋白,为研究其在2型猪链球菌中调控组氨酸三聚体家族蛋白的作用机制奠定基础。方法通过与相关家族蛋白进行同源性比较,在2型猪链球菌05ZYH33全基因组序列中找出编码AdcR的基因。以AdcR基因序列为基础,利用Primer5.0设计引物,采用PCR扩增AdcR基因,经BamHⅠ和HindIII双酶切后将目的片段通过T4DNA连接酶连接至表达载体pET32a,转化大肠埃希菌E.coli BL21,加入IPTG至终浓度为0.1mmol/L,37℃诱导4h表达AdcR蛋白,然后利用His亲和层析柱纯化AdcR蛋白。结果通过Blast分析,从2型猪链球菌05ZYH33全基因组序列中找到编码AdcR的编码基因05SSU0109。以合成的特异引物PCR扩增出469bp的AdcR片段,连接原核表达载体pET32a后转化E.coli,经IPTG 37℃诱导4h,成功表达出AdcR蛋白,其分子质量单位为40ku,与理论值相符。经His-Tag亲和层析纯化,获得较高纯度的重组AdcR蛋白。结论在大肠埃希菌中成功表达了可溶性的AdcR重组蛋白,为AdcR在2型猪链球菌中调控组氨酸三聚体家族蛋白作用机制研究奠定了基础。