基于ACE/AngⅡ/AT1R通路探讨补肾降压方对盐敏感性高血压大鼠肾纤维化的作用机制

目的:探讨补肾降压方对盐敏感性高血压DS大鼠肾纤维化及肾素血管紧张素转换酶-血管紧张素Ⅱ-血管紧张素Ⅱ1型受体(ACE-AngⅡ-AT1R)信号通路的调节作用,探讨其防治高血压肾损害的作用机制。方法:选用盐敏感性高血压大鼠(Dahl salt-sensitve,DS)48只,随机数字表法分为低盐组、高盐组、缬沙坦组和补肾降压组,喂食以不同浓度钠盐饲料造模后,予药物干预8周。于干预前后测量血压。干预后酶联免疫吸附测定(ELISA)血清中血肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))的含量。苏木精-伊红(HE)染色观察肾组织病理学改变情况,Masson染色观察肾纤维化程度。反转录PCR(RT-PCR)及蛋白质印迹法分别检测肾脏血管紧张素转化酶(ACE)及血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)mRNA及蛋白表达水平。结果:喂食3周不同浓度盐后,喂食高盐各组收缩压均较低盐组升高(P<0.01)。干预后,与低盐组比较,高盐组收缩压升高,Cr、BUN升高,血清AngⅡ及TGF-β_(1)水平升高,HE及Masson染色显示肾脏纤维化程度加重,肾脏ACE及AT1R蛋白及mRNA表达升高(P<0.01)。与高盐组比较,缬沙坦组及补肾降压组收缩压降低,Cr、BUN降低,血清AngⅡ及TGF-β_(1)水平降低,肾脏纤维化程度减轻,肾脏ACE及AT1R蛋白及mRNA表达降低(P<0.05,P<0.01)。结论:补肾降压方有平稳降压,改善肾功能的作用,其作用机制可能与调节ACE/AngⅡ/AT1R轴进而抑制TGF-β_(1)达到延缓肾纤维化相关。

猪睾丸ACE启动子驱动的SPAG6 shRNA真核表达载体的构建

本文旨在研究猪睾丸ACE启动子驱动的SPAG6 shRNA在猪睾丸支持细胞(ST)中的干扰作用。利用PCR法从ST细胞基因组中扩增猪睾丸ACE启动子,构建重组质粒ACE-pIRES2-DsRed、ACE-pGL3-basic,通过红色荧光蛋白表达和双荧光素酶报告基因检测试验检测猪睾丸ACE启动子在ST细胞中的转录活性;根据SPAG6 mRNA靶序列设计合成3条siRNA序列,通过脂质体转染至ST细胞,利用实时荧光定量PCR及Western Blot检测siRNA的干扰效率;基于人miR-30a结构设计SPAG6 shRNA,构建重组载体ACE-sh-SPAG6-pcDNA3.1,Western Blot检测其对SPAG6的干扰效果。结果表明,成功构建重组质粒ACEpIRES2-DsRed、ACE-pGL3-basic,并证明猪睾丸ACE启动子在ST细胞中具有较强的转录活性;各试验组均能对靶基因SPAG6 mRNA的表达产生抑制作用,以siRNA-3的作用最佳。siRNA-3转染48 h后,SPAG6蛋白表达量显著下降(P<0.001),成功筛选出SPAG6基因的最佳干扰序列;成功构建重组质粒ACE-shSPAG6-pcDNA3.1,转染ST细胞48h后SPAG6蛋白表达量较阴性对照组显著下调(P<0.001)。本研究成功构建了猪睾丸ACE启动子驱动的SPAG6 shRNA真核表达载体,并在ST细胞中验证了其具有较好的干扰效果。

ACE2对猪流行性腹泻病毒体外感染传代猪小肠上皮细胞的影响

为探究血管紧张素转换酶2(angiotensin converting enzyme 2,ACE2)在猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)感染仔猪过程中发挥的作用,本研究通过转录组学分析仔猪肠道ACE2在PEDV感染前后表达的变化情况,然后利用猪小肠上皮细胞(porcine intestinal epithelial cells, IPEC-J2细胞)模型,通过RT-qPCR、Western blot检测PEDV感染后ACE2的mRNA、蛋白表达水平的变化。过表达与抑制表达ACE2后通过RT-qPCR、Western blot、TCID50检测PEDV复制水平。结果显示,PEDV感染IPEC-J2后ACE2的mRNA及蛋白表达水平均显著下调,与转录组学结果一致。过表达ACE2组PEDV感染量显著上升,抑制表达ACE2组PEDV感染量显著下降。本研究在细胞水平上验证了ACE2在PEDV感染过程中的作用,即PEDV感染能够使ACE2表达量下降,在IPEC-J2细胞中过表达ACE2能提高PEDV复制水平,抑制ACE2的表达可降低PEDV复制水平。

复合酶解南美白对虾虾头制备ACE抑制肽的工艺优化

以南美白对虾虾头为原料,利用复合酶解法制备血管紧张素转化酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)抑制肽。在传统酶解法基础上,对酶解效率较高的蛋白酶进行筛选和复配,结合双酶复合酶解法水解虾头蛋白。以ACE抑制率和水解度为指标,通过单因素和响应面试验对制备工艺进行优化,确定复合蛋白酶组合方式及配比等工艺参数。得到虾头蛋白源ACE抑制肽的最佳酶解条件为料液比1∶7(g/mL)、酶添加量400 U/g、初始pH7.5、酶解温度50℃、复合酶(胰蛋白酶∶风味蛋白酶)配比2.29∶1(U/U)、酶解时间2.17 h,在此条件下虾头蛋白水解度达71.48%,ACE抑制率达83.57%,酶解效率与优化前的单酶水解相比提高35.05%。结果表明南美白对虾虾头经胰蛋白酶和风味蛋白酶酶解后具有较高的ACE抑制活性。

青刺果ACE抑制肽的分离纯化、结构鉴定及其体外活性评价

以具有血管紧张素转化酶(ACE)抑制活性的青刺果蛋白酶解物为研究对象,采用超滤、强阴离子交换层析分离纯化ACE抑制肽,液相色谱-串联质谱鉴定其肽序列。采用傅里叶红外光谱、酶反应抑制剂动力学、MTT试验和分子对接技术解析其二级结构特征、体外活性以及与ACE的结合机制。结果表明,分子质量<3 ku的超滤组分活性较好(IC50=0.380 mg/mL),离子交换层析后以F-a组分活性最好(IC50=0.159 mg/mL)。质谱鉴定出4条肽序列,通过生物信息学分析确定肽PGDVF为潜在的ACE抑制肽[IC50=(0.56±0.1)mmol/L]。二级结构分析表明PGDVF由α-螺旋(20.28%)、β-折叠(6.21%)、β-转角(31.55%)和无规则卷曲(41.85%)构成,其抑制模型为非竞争性抑制,肽质量浓度小于1 mg/mL时,对HepG2细胞无毒性。分子对接显示PGDVF可通过氢键、疏水作用与ACE紧密结合,从而有效抑制ACE活性。研究结果可为青刺果降压肽的开发利用提供参考。

料酒糟源新ACE抑制肽的分离纯化、活性评价与结构解析

传统料酒以大米为原料发酵生产,料酒糟作为料酒酿造的主要产物,其中含有大量的营养物质。本文以料酒糟作为原料,通过一次醇沉分离,一次制备液相色谱分离和一次分析液相分离后,得到两个高活性ACE抑制肽单体F1和F2。在相同浓度下,单体F1、F2的ACE抑制率分别高于市售降压肽产品约17%和14%。后续,利用LTQ Orbitrap Velos Pro质谱仪对两个单体的结构进行解析,结合Uniprot数据库搜索,鉴定出了多肽的序列分别为F1:LIIPQH,F2:IFSGFNNELLS。其中,F1为已报道过的降压肽序列,而F2为本实验首次报道的降压肽序列。研究为酒糟的高值化加工利用提供了理论依据,也为食源性降压肽提供了新证据。

仿刺参不同部位ACE抑制活性分析及活性肽制备工艺优化

本文对仿刺参具有高降血压活性部位进行筛选并优化其活性肽制备工艺。采用酶解法对仿刺参不同部位(体壁、肠、卵)进行水解,以血管紧张素转换酶(Angiotensin converting enzyme,ACE)抑制率为指标筛选最适蛋白酶,通过对各酶解物ACE抑制率的半数抑制浓度(IC_(50))测定比较筛选出最优抑制活性部位。经单因素实验与响应面试验优化确定活性肽最佳酶解制备条件,对蛋白酶解物进行分子量测定确定其分布范围,经超滤膜分离后对不同组分的ACE抑制活性分析。结果显示,选用碱性蛋白酶为最适水解酶,体壁、肠、卵各蛋白酶解物的ACE抑制率的IC50分别为1.11、4.02、0.65 mg/mL,仿刺参卵具有更好的ACE抑制效果,为最优抑制活性部位。其最佳的酶解制备工艺参数为:酶解时间5 h,加酶量3.5 U/mg,酶解温度65.26℃,底物浓度3.51%,酶解pH9.02,在该条件下仿刺参卵酶解产物的ACE抑制率为80.65%±0.52%,与预测值接近。蛋白酶解产物的分子量集中分布在3000 Da以下,占总含量的98.37%,其中1000~3000 Da占比9.50%,小于1000 Da占比88.87%。超滤膜分离所得低聚肽组分ACE抑制活性(IC_(50)=0.30 mg/mL)显著(P<0.05)强于经工艺优化后酶解物及截留液组分。本研究结果为仿刺参副产物高值化利用提供理论依据,可作为分离纯化制备降血压肽的优质资源。

超声辅助酶解法制备小麦ACE抑制肽及其稳定性研究

以谷朊粉为原料,采用超声辅助酶解法制备小麦血管紧张素转换酶(Angiotensin Converting Enzyme,ACE)抑制肽,并以该抑制肽对ACE的抑制率为主要评价指标,以谷朊粉的水解度为次要评价指标,通过单因素试验结合响应面法对制备工艺进行优化,并研究该抑制肽的稳定性。结果表明:碱性蛋白酶是适宜酶解谷朊粉制备小麦ACE抑制肽的蛋白酶。最佳超声辅助酶解法制备小麦ACE抑制肽的条件为超声时间17 min、超声功率300 W、酶解温度60℃、酶解时间2.7 h、酶用量3600 U/g和谷朊粉质量分数5.1%,在此条件下,所制备的小麦ACE抑制肽对ACE的抑制率为72.90%,疏水性氨基酸含量为29.37 g/100 g。当该抑制肽的相对分子质量<3 kDa时,具有较好的强酸环境稳定性和热稳定性,在一定浓度K^(+)、Mg^(2+)环境中的稳定性也较好,且经体外模拟消化后仍能保持原活性的79.26%。因此,超声辅助酶解法是制备小麦ACE抑制肽的有效方法。

槲皮素通过抑制ACE2治疗SARS-CoV-2所致心肌损伤的研究进展

2019年底,由重症急性呼吸道综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)引起的新型冠状病毒病肺炎(COVID-19)在全球迅速蔓延,由于其潜伏期长、传播性强、突变率高,因此,COVID-19的防治已成为全球卫生领域的焦点问题。由于人体呼吸道黏膜表面血管紧张素转换酶2(angiotensin converting enzyme 2,ACE2)含量丰富,而SARS-CoV-2表面的刺突蛋白(S蛋白)具有介导受体识别和结合功能,其受体结构域可特异性结合ACE2的肽酶结构域。因此,ACE2是作为SARS-CoV-2感染的宿主的途径,在SARS-CoV-2感染机体过程中发挥至关重要的作用。与此同时,心肌组织ACE2含量较丰富,且COVID-19合并心肌损伤患者心肌组织ACE2呈现表达异常。而我国传统中医药六大处方防治COVID-19疗效显著,其中,共有中药单体成分槲皮素备受关注,防治机制可能与槲皮素抑制ACE2密切相关。迄今为止,少有SARS-CoV-2所致心肌损伤药物治疗的相关报道。因此,本文旨在通过文献汇总和生信预测探讨槲皮素是否通过抑制ACE2在心肌组织中的高表达从而改善COVID-19所致心肌损伤,从而降低COVID-19患者心源性死亡率及心血管并发症。

在小肠上皮细胞中稳定过表达ACE2的AAV血清型确立

血管紧张素转换酶2(angiotensin converting enzyme 2,ACE2),是血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme,ACE)的同源物,可将血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)裂解成血管紧张素1-7(angiotensin1-7,Ang1-7),后者通过G蛋白偶联受体Mas发挥作用,作为肾素-血管紧张素系统(renin angiotensin system,RAS)的调节轴,与经典级联信号ACE/AngII/AT1(AngII type 1 receptor)相拮抗[1]。ACE2/Ang1-7/Mas信号途径的激活对维持胰岛、肝脏、骨骼肌、脂肪组织的代谢稳定性至关重要[2]。

ACES色彩管理流程及其在影视数字合成中的应用

目前,学院颜色编码系统(ACES)已在影视视效制作领域频繁提及并广泛使用。然而,由于ACES的复杂性以及ACES色彩管理流程的专业性,人们对其理解尚不够全面细致。相较于影视数字合成线性工作流(Linear Workflow)的不足,ACES色彩管理流程更具完整性、先进性和前瞻性。本文梳理了同ACES紧密关联的色彩原理和相关概念,总结了ACES的产生原因、优势所在及其在影视数字合成中的具体应用。希望本文有助于视效从业者加深对ACES的全面理解,推进ACES色彩管理流程在剪辑、视效、调色以及虚拟摄制等领域的普及和规范应用。

抗奥合剂通过p38 MAPK/NF-κB信号通路和ACE2/Ang1-7/Mas轴缓解急性肺损伤研究

目的探讨抗奥合剂(KAHJ)治疗小鼠急性肺损伤(ALI)的作用及机制,为其可能作为缓解新型冠状病毒(COVID-19)感染后症状的药物提供依据。方法采用网络药理学方法预测KAHJ治疗ALI的主要活性成分、潜在靶点和相关信号通路。将C57BL/6J小鼠随机分为对照组、LPS组和LPS+KAHJ组。LPS+KAHJ组小鼠灌胃KAHJ(4.76 g·kg^(-1)·d^(-1),8.8 mL·kg^(-1)·d^(-1)),其余组小鼠灌胃生理盐水(8.8 mL·kg^(-1)·d^(-1))。14 d后,腹腔注射LPS(5 mg·kg^(-1))诱导ALI模型。收集小鼠血清和肺组织,通过组织病理学观察肺组织的病理变化。采用Western blot、qPCR、ELISA和IHC等方法评估KAHJ对ALI的改善作用。结果通过网络药理学筛选出疾病和药物共同的70个核心靶基因,并显示与多个信号通路密切相关,如MAPK、NF-κB、Apoptosis、COVID-19和肾素-血管紧张素系统(Ras)信号通路等。此外,通过实验验证发现KAHJ能改善小鼠ALI后的炎症和细胞凋亡,减少肺损伤和肺水肿,抑制肺纤维化。同时,KAHJ的作用机制与p38 MAPK和NF-κB的磷酸化以及ACE2/Ang1-7/Mas轴的调控也有着密切关系。结论KAHJ可能通过抑制p38 MAPK/NF-κB信号通路和调控ACE2/Ang1-7/Mas轴缓解ALI,为缓解COVID-19感染后症状提供了补充和替代药物。

基于ACE和深度学习的植物病害检测

如果农业生产遇到植物病害问题,就会导致大量的经济损失。植物病害种类繁多,因此为提高对植物叶片的识别性能,本文使用ACE算法对植物病害图像进行处理,分别以深度学习中的VGG16和GoogleNet为植物病害识别模型,分析ACE算法在植物病害识别中的效果与最佳参数。试验结果表明,在使用ACE算法对植物病害图片处理后,植物病害识别率提高了1%~3%。当在不同模型中得到最佳效果时,ACE算法中求取局部均值的窗口大小与最大对比度增益相同。

酶解法制备核桃谷蛋白-1 ACE抑制肽的工艺优化

为获得优质的核桃蛋白血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽的制备原料及优化其制备工艺,采用连续提取法从脱脂核桃粕中依次分离出清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白、谷蛋白-1和谷蛋白-25种组分蛋白,测定5种组分蛋白的占比及ACE抑制率,以ACE抑制率最大的组分蛋白作为原料采用酶解法制备ACE抑制肽,在筛选出最适酶解用酶基础上,采用单因素试验与响应面试验优化酶解制备核桃蛋白ACE抑制肽的工艺。结果表明:5种组分蛋白中谷蛋白-1占比仅次于谷蛋白-2,且其ACE抑制率最高,以核桃谷蛋白-1为原料,在筛选出胃蛋白酶作为酶解用酶基础上,经工艺优化得到最优的酶解法制备核桃谷蛋白-1 ACE抑制肽的工艺条件为酶解温度46℃、酶解时间6 h、酶用量4.2%(以底物质量计)、酶解pH 1.6,在该条件下所得核桃谷蛋白-1酶解液的ACE抑制率为(50.08±2.34)%。因此,核桃谷蛋白-1经胃蛋白酶酶解可生产ACE抑制活性较高的核桃多肽。

线上中文学习平台Lingo Bus和Lingo Ace比较研究

Lingo Bus和Lingo Ace平台是当前受到市场青睐的知名线上中文学习平台。对两个学习平台的建设、教学和管理营销三个方面的情况进行比较研究后发现:两个平台均通过线上直播课程面向海外青少儿教授中文,均建立了各自的官网和客户端,在品牌定位、课程资源体系、选课方式和学习者服务模式等方面的设计上都有差异,针对教师选拔、培训的侧重点和严格程度也有不同的标准;两个平台均注重通过口碑、新闻软文和社交媒体等途径进行营销,但在推广方式和营销经费投入力度方面做法不同。线上中文学习平台应建设本土化和标准化教学资源,提升系统稳定性和智能化水平,完善教师管理机制,建立良好服务体系,组建本土团队,实施精准营销等发展策略。

活性炭与树脂对芝麻ACE抑制肽脱苦的工艺优化及其性能比较

为改善芝麻ACE抑制肽的味道,分别采用活性炭与树脂对芝麻ACE抑制肽进行脱苦,以脱苦率、多肽损失率为评价指标,采用单因素实验和正交实验对两种脱苦工艺条件进行优化,并比较两种脱苦方法对芝麻ACE抑制肽味觉特性、活性及氨基酸组成的影响,以确定最适宜的脱苦方法。结果表明:两种方法均能使芝麻ACE抑制肽液苦味降至无法察觉,活性炭脱苦最佳工艺条件为活性炭2号添加量6%、芝麻ACE抑制肽液质量浓度10 g/100 mL、吸附温度55℃、吸附时间15 min,在此条件下脱苦率与多肽损失率分别为(96.46±0.57)%和(29.02±0.19)%(电子舌测定苦味为-0.61±0.02);AB-8大孔吸附树脂脱苦最佳工艺条件为树脂添加量12.5%、pH 7、吸附温度35℃、吸附时间15 min、芝麻ACE抑制肽液质量浓度10 g/100 mL,在此条件下脱苦率与多肽损失率分别为(95.21±0.93)%和(12.11±0.19)%(苦味为-0.03±0.08);AB-8大孔吸附树脂脱苦的芝麻ACE抑制肽活性显著强于活性炭脱苦的,这与不同脱苦方法引起的多肽组成差异有关。综合考虑,AB-8大孔吸附树脂可以更好地降低芝麻ACE抑制肽中苦味氨基酸含量,适合用于芝麻ACE抑制肽的脱苦。

ACE Star循证模式干预对恶性脑胶质瘤手术患者负性情绪和疼痛程度的影响

目的探讨ACE Star循证模式干预对恶性脑胶质瘤手术患者负性情绪和疼痛的影响。方法将92例恶性脑胶质瘤患者根据干预方式的不同分为对照组48例和循证组44例,对照组患者采取常规干预,循证组患者采取ACE Star循证模式干预。比较两组患者的负性情绪[汉密尔顿焦虑量表(HAMA)、汉密尔顿抑郁量表(HAMD)评分]、疼痛程度[视觉模拟评分法(VAS)评分]、生活质量[癌症患者生命质量测定量表(FACT)评分]以及并发症发生情况。结果干预后,两组患者HAMA、HAMD量表评分均较干预前降低,且循证组患者HAMA、HAMD量表评分均低于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。术后1、2、4天,循证组患者VAS评分均明显低于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。干预后,两组患者功能状况、躯体状况、社会状况评分均较干预前升高,且循证组患者功能状况、躯体状况、社会状况评分均高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。循证组患者并发症总发生率低于对照组,差异有统计学意义(P﹤0.05)。结论ACE Star循证模式干预能显著改善恶性脑胶质瘤手术患者的负性情绪、疼痛程度,提高生活质量,减少术后并发症。

杏仁蛋白源ACE抑制肽的研究进展

研究发现杏仁副产品中蛋白质含量极为丰富,功能活性物质种类齐全,其中也包括ACE抑制肽。介绍了杏仁的营养成分,ACE抑制肽的降血压机理,阐述了杏仁ACE抑制肽制备方法与分离纯化方法,介绍了几种杏仁ACE抑制肽的结构鉴定方法和构效关系研究、分析检测方法,并对以后杏仁ACE抑制肽的研究给出展望。

固定化酶ESM-BAP酶解制备甜杏仁ACE抑制肽及其工艺优化

为优化固定化酶酶解甜杏仁蛋白制备ACE抑制肽的工艺,采用交联法固定蛋壳膜(ESM)和碱性蛋白酶(BAP)后对甜杏仁蛋白进行酶解,通过单因素试验和响应面分析法对酶解条件进行优化。得到的最佳酶解工艺参数为加酶量7200 U/g,酶解时间4.1 h,酶解温度56.1℃,pH值10.7,在此条件下甜杏仁的ACE抑制率可达65.14%。该条件适合甜杏仁蛋白ACE抑制肽的制备,为实际生产和应用提供理论依据。

利用ACE抑制剂降压治疗高血压患者的长期效果研究

探究高血压患者行以ACE抑制剂降压治疗的效果。方法 2020年1月至2021年1月,就90例高血压患者择取,随机分组,分析马来酸氨氯地平片医治的对照组45例疗效、血压值、氧化应激、Hcy、血管内皮功能及心脑血管事件率,并与联合马来酸依那普利片医治的观察组45例研究数据展开对比。结果 观察组对其总有效率评估,其值以更高示(P<0.05)。观察组对其治疗后的血压值分析,以更低水平所示(P<0.05)。对患者氧化应激指标分析,SOD在治疗后以观察组的数据值更高,MDA与Hcy则以观察组更低(P<0.05)。在行血管内皮功能相关指标的分析中,观察组治疗后的VEGF、NO值更高以示,ET-1则居更低值(P<0.05)。2年随访期间,观察组心脑血管事件率更低(P<0.05)。结论 ACE抑制剂对高血压行降压治疗,可促其获理想疗效,更好调控血压水平,减轻氧化应激与血管内皮功能,控制Hcy释放,且具有良好的预防心脑血管事件的作用。