鲍曼不动杆菌adeB基因检测及外排泵抑制剂逆转亚胺培南耐药性的研究

目的研究多重耐药鲍曼不动杆菌外排泵adeB基因表达量与亚胺培南耐药性的关系,探讨外排泵抑制剂对亚胺培南敏感性的影响,为外排泵及外排泵抑制剂在鲍曼不动杆菌亚胺培南耐药性中的作用提供理论依据。方法筛选临床分离多重耐药鲍曼不动杆菌79株,采用PCR法检测adeB基因表达情况,RT-PCR方法对adeB基因进行转录水平测定,并比较亚胺培南敏感及耐药组基因转录表达量有无差异;采用微量肉汤稀释法检测加入外排泵抑制剂PAβN、奥美拉唑前后adeB阳性及阴性组多重耐药菌对亚胺培南MIC值的变化。结果 79株多重耐药鲍曼不动杆菌中,adeB基因在亚胺培南敏感组及耐药组表达量存在差异。PAβN对adeB阳性组亚胺培南耐药性降低有统计学意义,对adeB阴性组无明显影响;奥美拉唑对adeB阳性组及阴性组亚胺培南耐药性降低均无统计学意义。结论鲍曼不动杆菌亚胺培南耐药性与adeB基因高表达有关。PAβN降低adeB阳性组多重耐药鲍曼不动杆菌亚胺培南耐药性,提高亚胺培南敏感性,对adeB阴性组无明显影响;奥美拉唑对亚胺培南耐药性无明显影响。

泛耐药鲍曼不动杆菌主动外排泵adeB基因表达及耐药性研究

目的探讨细菌主动外排泵adeB基因在临床分离的泛耐药鲍曼不动杆菌耐药性中的作用。方法琼脂稀释法检测临床分离泛耐药鲍曼不动杆菌经外排泵抑制剂羰基氰氯苯腙(CCCP)处理前后对抗生素最小抑菌浓度(MIC)变化,以聚合酶链反应(PCR)、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测外排泵基因ade B及其表达水平。结果 50株泛耐药鲍曼不动杆菌临床株加入CCCP后,MIC值小于原值的1/4或1/4以下的四环素42株(84%)、氧氟沙星45株(90%)、亚胺培南45株(90%)、头孢噻肟50株(100%)、庆大霉素50株(100%)。50株泛耐药鲍曼不动杆菌临床株和4株敏感菌株均检测到ade B基因,但泛耐药株表达水平明显高于敏感株(P<0.01)。结论泛耐药鲍曼不动杆菌耐药性与外排泵adeB基因高表达密切相关。

外排泵adeB基因与鲍曼不动杆菌多重耐药的关系

目的探讨临床分离鲍曼不动杆菌主动外排基因ade B的表达与其多重耐药的关系。方法对临床分离的64株鲍曼不动杆菌采用纸片扩散法检测对抗菌药物的敏感性;罗丹明6G检测外排活性,RT-PCR检测外排泵基因ade B的分布和表达水平。结果 64株鲍曼不动杆菌耐0~2种抗菌药物4株,耐3~5种抗菌药物33株,耐6~8种抗菌药物27株;罗丹明6G外排实验显示,外排增强的多重耐药菌株其外排基因ade B的表达明显增高。结论药物主动外排增强与鲍曼不动杆菌多重耐药相关;外排基因的过度表达可能是导致鲍曼不动杆菌多重耐药的主要原因。

中药痰热清对鲍氏不动杆菌外排泵adeB基因影响的实验研究

目的：探讨中药痰热清注射液对鲍氏不动杆菌外排泵adeB基因的影响。方法：选择我院自2013年5月～2014年1月临床中分离出的38株多药耐药鲍氏不动杆菌中应用外排泵抑制剂（CCCP）筛选对环丙沙星外排泵编码呈阳性的10株作为试验细菌株，利用琼脂对倍稀释法检测10株鲍氏不动杆菌对环丙沙星的最小抑制浓度，用同样方法检测痰热清注射液5mg/ml、10mg/ml、20mg/ml、40mg/ml作用后对10株细菌株的最低抑菌浓度（MIC）变化。结果：中药痰热清可以降低环丙沙星对鲍氏不动杆菌的MIC值，10mg/ml、20mg/ml组与5mg/ml组比较，差异有统计学意义（P﹤0.05）。结论：痰热清可以抑制鲍氏不动杆菌的主动外排泵adeB，从而改善鲍氏不动杆菌对环丙沙星的耐药性。

外排泵adeB基因表达与鲍曼不动杆菌泛耐药的关系

目的探讨主动外排泵adeB基因在泛耐药鲍曼不动杆菌(Pandrug Resistance Acinetobacter Baumannii PRABA)耐药性中的作用。方法M-H琼脂稀释法检测临床分离PRABA对常用抗生素的最小抑菌浓度MIC,同时测定经外排泵抑制剂碳酰氰基-对-氯苯腙(CCCP)处理前后PRABA对常用抗生素的MIC值;PCR实时荧光RT-PCR检测外排泵adeB基因及其表达水平,PCR动力学经典算法:QR=(1+E)-△△CT,对基因表达进行相对定量分析。结果10株PRABA adeB基因阳性,2株全敏感鲍曼不动杆菌(PSABA)adeB基因阴性,PRABA菌株adeB基因mRNA的表达范围为2.5E+2~2.45E+3拷贝。结论PRABA菌株主动外排泵adeB基因高表达导致对常用抗生素泛耐药,甚至全部耐药。

耐碳青酶烯类鲍曼不动杆菌肺部感染患者adeB基因检测分析

目的:探讨耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌耐药性与adeB基因的关系,为临床治疗提供新思路。方法:收集2018年1月至2019年1月肺部感染患者痰液标本642份,分离鉴定鲍曼不动杆菌株,采用PCR检测其adeB基因表达,采用微量二倍稀释法检测MIC50。结果:分离出鲍曼不动杆菌250株,adeB基因表达异常的为152株。adeB异常表达组中亚胺培南耐药87株(57.24%)、美罗培南耐药79株(51.97%)均高于adeB正常表达组。治疗后adeB异常表达组亚胺培南、美罗培南MIC50均显著低于治疗前(P<0.05)。结论:adeB基因异常的鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗菌药物更易产生耐药,加入外排泵抑制剂后能提高碳青霉烯类抗菌药物的治疗效果。

鲍曼不动杆菌耐药性监测与外排泵adeB基因存在状况分析

目的探讨我院临床分离鲍曼不动杆菌的耐药性及外排泵adeB基因存在状况。方法WHONET5.6回顾性分析鲍曼不动杆菌耐药性,聚合酶链反应(PCR)扩增检测adeB基因。结果2011年,鲍曼不动杆菌对头孢菌素类、碳青霉烯类、β-内酰胺酶抑制剂、氟喹诺酮类和氨基糖苷类抗菌药物均较敏感,耐药率几乎均在40%以下,2012年出现较大幅度上升,对5大类抗菌药物的耐药率几乎均在50%以上,2013年变化不明显;鲍曼不动杆菌外排泵adeB基因阳性率高(80.9%),多重耐药菌adeB基因阳性率(89.7%)明显高于相对敏感菌adeB基因阳性率(37.5%)(<0.05)。结论鲍曼不动杆菌耐药情况严重,adeB基因阳性率高;主动外排在鲍曼不动杆菌多重耐药中可能发挥重要作用。

鲍曼不动杆菌adeB基因检测及外排泵抑制剂对其药物敏感性的影响

目的了解该院临床分离的鲍曼不动杆菌外排泵基因adeB表达情况。探讨外排泵抑制剂羰基氰化氯苯腙(CCCP)对鲍曼不动杆菌药物敏感性的影响。方法收集、分离及鉴定鲍曼不动杆菌68株,应用聚合酶链反应方法对外排泵基因adeB进行检测,采用琼脂稀释法检测加入CCCP前后adeB阳性鲍曼不动杆菌对头孢曲松、环丙沙星、亚胺培南、阿米卡星和阿奇霉素敏感性的变化。结果 68株鲍曼不动杆菌中,其中有57株adeB基因阳性,阳性率为83.8%,且adeB阳性组的耐药率和50%最低抑菌浓度均高于adeB阴性组。在CCCP干预实验中,利用上述5种抗菌药物为底物,57株adeB阳性鲍曼不动杆菌中,分别有31、34、38、35和30株在10μg/mL CCCP条件下最低抑菌浓度值降低4倍或4倍以上。结论外排泵基因adeB广泛存在于临床分离鲍曼不动杆菌中,外排泵过度表达与细菌多重耐药机制关系密切,CCCP干预能恢复细菌对抗菌药物的敏感性。

AdeB基因变异介导鲍曼不动杆菌多药耐药

采用纸片扩散法(K-B法)测定鲍曼不动杆菌(AB)菌株对临床常用9大类22种抗生素的耐药性,应用PCR检测耐药基因,将耐药基因adeB转化至敏感菌株AB43中,荧光定量PCR检测AdeB mRNA的转录,药敏试验检测转化后菌株的耐药性变化。结果表明:收集的68株AB对亚胺培南和美罗培南耐药率分别高达51.47%和50.00%。耐药基因adeR、adeS、adeA、adeB、adeC、OXA-23、OXA-51、TEM-1、VIM-1在碳青霉烯类耐药、中介及敏感株中的分布差异不大;adeB基因在耐药株和敏感株中的序列存在较大差异,二者同源区也存在3个氨基酸残基的变异;耐药菌株来源的adeB基因在敏感菌株中表达后可导致AB的耐药性显著增强。这一研究提示AdeB基因变异可导致AB多药耐药性显著增加。

鲍曼不动杆菌耐药性监测与外排泵adeB基因表达水平检测

目的探讨鲍曼不动杆菌临床分离株的耐药性以及外排泵adeB基因的表达情况。方法琼脂稀释法检测最低抑菌浓度(MIC)、聚合酶链反应(PCR)扩增adeB基因,逆转录PCR(rt-PCR)检测adeB基因的mRNA表达水平。结果药敏试验结果显示,60株鲍曼不动杆菌对哌拉西林耐药率最高(92.3%),对亚胺培南耐药率最低(30.0%);43%(26/60)为多药耐药菌株;多药耐药菌株与相对敏感菌株均为adeB基因阳性;多药耐药组adeB基因mRNA水平高于相对敏感组(P<0.01)。结论鲍曼不动杆菌临床分离株耐药率高且多药耐药严重,与其主动外排系统adeB基因表达增强密切相关。

连翘对多药耐药鲍曼不动杆菌主动外排泵编码基因adeB的影响

目的研究中药连翘对多药耐药鲍曼不动杆菌主动外排泵编码基因adeB的影响,从分子水平探讨其主动外排耐药机制。方法从临床分离的30株多药耐药鲍曼不动杆菌中筛选出对环丙沙星(CIP)外排表型和外排泵编码基因均阳性的9株菌作为实验菌株,应用琼脂对倍稀释法检测连翘水煎剂作用前后CIP对上述9株菌的最小抑菌浓度(MIC),选取作用前后MIC变化较大的代表菌株进行基因测序,并将作用前后的测序结果进行比对分析。结果连翘水煎剂可降低CIP对多药耐药鲍曼不动杆菌的MIC;PCR扩增目的基因片段为2 242 bp,与预期结果一致;测序分析表明,连翘作用后鲍曼不动杆菌adeB基因序列共有12个碱基突变;突变发生氨基酸替换的有E140V、K145I、A147V、K150N、A151V、K153I,并有3个未发生氨基酸替换的突变。结论连翘水煎剂可抑制鲍曼不动杆菌的主动外排泵,并可引起主动外排泵编码基因adeB序列发生变异。

外排泵adeB基因高表达在鲍氏不动杆菌临床分离株产生泛耐药中的作用

目的探讨外排泵adeB基因高表达在鲍氏不动杆菌临床分离株产生泛耐药中的作用。方法 M-H琼脂稀释法检测临床分离的泛耐药鲍氏不动杆菌(PRABA)对常用抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC)及羰氰氯苯腙(CCCP)处理前后MIC值的变化情况,聚合酶链反应(PCR)和实时荧光RT-PCR检测泛耐药株adeB基因及adeBmRNA量。结果 PRABA对环丙沙星、四环素、头孢噻肟较CCCP处理前其MIC下降两个折点;头孢西丁下降4个折点,1号与5号菌株庆大霉素下降6个折点,为原MIC值的1/64;10株PRABAadeB基因阳性,2株全敏感鲍氏不动杆菌(PSABA)未检测到adeB基因,PRABAadeB基因mRNA的表达量平均为(0.84E+3)拷贝。结论主动外排泵adeB基因高表达与鲍氏不动杆菌产生泛耐药相关。

替加环素对多重耐药鲍曼不动杆菌adeB基因表达水平的影响及临床意义

目的探讨替加环素对多重耐药鲍曼不动杆菌ade B基因表达水平的影响及临床意义。方法选取临床分离的60株多重耐药鲍曼不动杆菌(MDR-AB),从中筛选出对环丙沙星(CIP)外排泵编码基因呈阳性的实验菌株15株,用琼脂二倍稀释法检测替加环素作用前后对15株实验菌株的最小抑菌浓度(MIC),对替加环素作用前后MIC变化相对较大的菌株基因进行测序并对比分析。结果替加环素对MDR-AB的MIC最低为2 mg·m L-1;质量浓度为0,0.62 mg·m L-1替加环素同质量浓度为1.25,2.5 mg·m L-1环丙沙星对MDR-AB的MIC值差异有统计学意义(P<0.05)。替加环素作用后,ade B基因片段有15个碱基突变,5处氨基酸发生替换,还有4个突变氨基酸未发生替换。替加环素作用前后ade B基因表达水平分别为(2.51±0.72),(0.87±0.21),差异有统计学意义(P<0.05)。结论替加环素可抑制MDR-AB外排泵ade B基因表达,降低ade B表达水平,环丙沙星联合替加环素治疗MDR-AB可能提高临床疗效。

鲍曼不动杆菌的耐药分析及主动外排基因adeB的检测

目的了解临床分离不动杆菌属对16种抗菌药物的耐药性,为耐药菌的抗菌药物选择提供依据,并扩增外排泵蛋白编码基因adeB,以探讨鲍曼不动杆菌多重耐药与细胞膜主动外排作用的关系。方法随机收集40株不重复鲍曼不动杆菌,采用K-B法对鲍曼不动杆菌进行药物敏感试验。后采用聚合酶链反应(PCR)方法筛选鲍曼不动杆菌的主动外排基因adeB,并进行序列分析。结果 40株鲍曼不动杆菌对头孢哌酮/舒巴坦、亚胺培南最为敏感,耐药率为0;其次对氨苄西林/舒巴坦,耐药率仅为27.5%;对其余抗菌药物的耐药率在52.5%～75.0%之间;根据PCR产物片段大小,40株鲍曼不动杆菌共有adeB基因阳性菌株26株(65.0%)。序列分析显示adeB基因与参考序列AF37088599%相同,与参考序列AJ971416100%相同。结论鲍曼不动杆菌是医院感染的重要病原菌,对多种抗生素的耐药率高,且呈多重耐药。主动外排作用可能是鲍曼不动杆菌多重耐药的重要机制之一。

鲍曼不动杆菌耐药性分析及其主动外排基因adeB的分子检测

目的了解临床鲍曼不动杆菌的多重耐药状况及主动外排基因adeB的检测情况。方法对南华大学附一医院所分离的鲍曼不动杆菌在不同类型标本中的分布与科室来源进行分析,利用ATB药敏系统对所分离菌株进行药物敏感试验;通过Primer Premier软件设计特异性扩增引物,采用聚合酶链反应(PCR)对鲍曼不动杆菌主动外排基因adeB在不同类型标本中的分布情况进行检测,探讨鲍曼不动杆菌的耐药性与主动外排基因adeB之间可能存在的关系。结果所分离的50株鲍曼不动杆菌耐药率较高,对美罗培南和亚胺培南的耐药率达76.0%和74.0%,对其它抗菌药物的耐药率均在80%以上;50株鲍曼不动杆菌经PCR检测,主动外排基因adeB阳性者42株,检出率为84.0%。结论本地区鲍曼不动杆菌耐药率及主动外排基因adeB检出率较高,主动外排基因adeB可能介导了鲍曼不动杆菌的多重耐药。

主动外排机制在鲍曼不动杆菌耐药性中的作用

目的探讨细菌主动外排机制在临床分离的鲍曼不动杆菌耐药性中的作用。方法琼脂稀释法检测临床分离的鲍曼不动杆菌对常用抗生素的耐药性,测定经外排泵抑制剂碳酰氰基-对-氯苯腙(CCCP)处理前后鲍曼不动杆菌对抗生素最小抑菌浓度(MIC)的变化,以聚合酶链反应(PCR)、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测多重耐药主动外排基因adeB及其表达水平。结果临床分离的鲍曼不动杆菌对常用抗生素耐药率高且具有多重耐药性,并存在药物的主动外排。所有临床分离的菌株均能检测到adeB基因,但多重耐药株表达水平明显高于敏感株(P<0.01)。结论临床分离的鲍曼不动杆菌的耐药性尤其是多重耐药性与外排泵介导的耐药机制密切相关。

鲍曼不动杆菌多重耐药与胞膜主动外排作用关系的研究

目的观察外排泵抑制剂对多重耐药不动杆菌耐药水平的降低作用,并扩增外排泵蛋白编码基因,以探讨不动杆菌多重耐药与细胞膜主动外排作用的关系。方法用琼脂稀释法测定30株鲍曼不动杆菌对环丙沙星、四环素、阿米卡星和亚胺培南的最小抑制浓度(MIC)值,并观察在含10μg/ml利血平或25μg/ml羰基氰氯苯腙(CCCP)条件下MIC值的变化。用PCR法扩增外排泵编码基因adeB。结果以环丙沙星、四环素、阿米卡星和亚胺培南作为底物,分别有12、5、6、6株菌在10μg/mlCCCP或含25μg/ml利血平的条件下MIC值降低4倍或4倍以上。6、11、17号菌都同时对3种药物有明显的外排作用。以利血平和CCCP作为抑制剂所得的结果一致。18株菌经PCR扩增得到与目的片段大小一致的阳性片段,经测序证实与GenBank登录号为AF370885的鲍曼不动杆菌RND族药物外排泵编码基因adeB的同源性达99%。该序列已在GenBank登录,登录号为DQ294294。结论主动外排作用是鲍曼不动杆菌多重耐药的重要原因之一。

泛耐药鲍曼不动杆菌β-内酰胺类抗菌药物耐药机制研究

目的 探讨一组泛耐药鲍氏不动杆菌β-内酰胺类抗菌药物耐药机制.方法 收集2015年1月~6月湖北省黄石市中心医院(A)住院患者中分离的20株泛耐药鲍氏不动杆菌,用mdfA测序确认菌种,再采用聚合酶链反应(PCR)法分析32种β-内酰胺类药物获得性耐药基因、1种膜孔蛋白carO基因、1种获得性外排泵adeB泵蛋白基因.结果 20株泛耐药鲍氏不动杆菌共检出4种β-内酰胺类获得性耐药基因,A类β-内酰胺酶基因TEM、C类β-内酰胺酶基因ADC、D类β-内酰胺酶基因OXA-23、OXA-51,四者阳性率均为100.00%;B类β-内酰胺酶基因未检出;膜孔蛋白carO基因缺失率为100.00%,外排泵adeB基因阳性率为95.00%.结论 泛耐药鲍氏不动杆菌中携带的耐药基因和耐药表型相对应,对β-内酰胺类药物耐药与产TEM、ADC、OXA-23、OXA-51β-内酰胺酶基因,膜孔蛋白carO基因缺失和获得外排泵adeB3种耐药机制有关.

鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类药物的耐药机制研究

目的鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,Ab)是引起院内感染的重要病原菌,近年来,对氨基糖苷类药物耐药逐渐升高。文中分析Ab基因同源性及其对氨基糖苷类抗菌药的耐药机制。方法2005年10月至2006年11月,收集临床分离的55株Ab,采用肠杆菌科基因间重复一致序列-聚合酶链式反应(enterobacterial repetitive intergenic consensus se-quence-polymerase chain reaction,ERIC-PCR)方法进行菌株基因组同源性分析。采用PCR方法检测氨基糖苷类修饰酶(Amin-oglycosides modifying enzymes,AME)基因及外排泵基因adeB。结果ERIC-PCR将55株Ab分为2型,其中A型最多为51株,包括2个亚型,A1型39株,A2型12株;B型4株。49株检测出AME基因,aac(3)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅰ基因阳性率分别为82%、64%,而aac(3)-Ⅱ、aph(3′)-Ⅵ基因均为阴性。所有菌株均检测出adeB基因。结论55株Ab由2种克隆构成,92.7%为A型。菌株AME基因携带率高,55株均检测出adeB基因,外排泵是否参与耐药有待进一步研究。

鲍曼不动杆菌RND主动外排泵的表达与耐药性的关系

目的检测鲍曼不动杆菌耐药结节分化家族(RND)外排系统的分布,探索其表达与耐药性的关系。方法对南昌大学第一附属医院临床标本分离的59株多重耐药鲍曼不动杆菌进行细菌的鉴定与药敏分析,采用PCR技术检测鲍曼不动杆菌中RND主动外排系统的分布情况,比较不同耐药表型的鲍曼不动杆菌间外排泵基因的表达情况,分析其表达量与耐药的关系,并对RND外排系统的扩增产物进行测序。结果鲍曼不动杆菌对氨苄西林/舒巴坦、亚胺培南、庆大霉素、环丙沙星、左氧氟沙星耐药率高达93.2%、94.9%、88.1%、96.6%、52.5%。59株鲍曼不动杆菌经外排泵及整合子基因PCR扩增检测,adeR、adeS、adeB、adeJ、adeG基因的携带率分别为81.4%、91.5%、93.2%、100.0%、61.0%。不同菌株外排泵基因的表达均不相同,其中庆大霉素、亚胺培南、氨苄西林/舒巴坦耐药组与非耐药组鲍曼不动杆菌adeB、adeJ基因的表达量相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。adeABC外排泵的调控基因adeR、adeS的碱基序列未出现基因突变或插入序列。结论 RND外排系统在鲍曼不动杆菌中普遍存在,RND外排系统中adeB、adeJ基因的表达水平升高与细菌对庆大霉素、亚胺培南、氨苄西林/舒巴坦的耐药性有关。