MMP1、MMP2、TIMP2在子宫腺肌症异位内膜和在位内膜中的表达

目的 :探讨 MMP1、MMP2、TIMP2在子宫腺肌症异位内膜和在位内膜中的表达情况 ,研究子宫腺肌症的发病机制。方法 :采有免疫组织化学方法检测 MMP1、MMP2、TIMP2在子宫腺肌症异位内膜 40例和在位内膜 40例中的表达。结果 :MMP1在子宫异位内膜腺体中阳性表达率较高 ( 85 % ) ,异位和在位内膜之间有显著性差异 ;MMP2在子宫腺肌症异位和在位内膜间质细胞、腺体中表达一致 ;TIMP2在子宫异位内膜间质中阳性表达率 ( 1 5 % )低于在位内膜间质细胞中阳性表达率 ( 4 0 % ) ,二者有显著性差异。结论 :MMP1可能参与子宫腺肌症的发生、发展 ;MMP2在子宫腺肌症异位和在位内膜间质细胞中均有较强的表达 ,说明子宫腺肌症异位和在位内膜间质细胞具有同源性 ;TIMP2不仅对 MMP2有抑制 ,且对 MMP1也有抑制作用 ,MMPs- TIMPs平衡失调可能有利于子宫腺肌症的发生。

基质金属蛋白酶-9在晚期直肠癌组织中的表达及其临床意义

目的研究基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在晚期直肠癌组织中的表达状况及其与分化程度、肿瘤转移及患者预后的关系。方法应用免疫组化和计算机图像分析技术,对晚期直肠癌34例癌组织活检标本进行MMP-9表达和反应强度定量检测。结果 MMP-9阳性率为67.6%(23/34),阳性物质主要分布于癌组织细胞质。MMP-9阳性率与癌组织分化类型无关(P>0.05),与肝和(或)肺转移状况及患者预后密切相关(P<0.05)。低分化腺癌MMP-9阳性细胞平均积分光密度(OD)值显著高于中分化腺癌和高分化腺癌(P<0.05),有肝和(或)肺转移者显著高于无转移者(P<0.05),1年内死亡者显著高于生存者(P<0.05)。结论测定MMP-9对于判断直肠癌恶性程度、预测生物学行为和评估患者预后具有重要意义。

丝裂原活化蛋白激酶对佛波酯诱导滋养细胞MMP-9基因表达的影响

目的探讨佛波酯(PMA)诱导细胞滋养层细胞(CTB)MMP-9基因表达的调控机制。方法用细胞ELISA法测定CTB细胞的蛋白激酶活性变化;用反转录聚合酶链反应检测CTB中MMP-9的基因表达。结果100 nmol/L PMA能迅速激活CTB中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族中细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、c-jun氨基末端激酶(JNK)以及p38 MAPK激酶的活性。100 nmol/L PMA刺激CTB引起MMP-9 mRNA表达显著增加,能被ERK或p38 MAPK的特异性抑制剂所抑制。结论ERK和p38 MAPK可能是PMA诱导CTB中MMP-9基因表达增加的重要调节物质。

小鼠Mmp-9 shRNA重组慢病毒包装、筛选及干扰效果检测

目的:设计、筛选、构建并鉴定Mmp-9小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),并构建其慢病毒表达载体,为血管化疾病的防治提供理论依据及实验室数据。方法:针对基质金属蛋白酶9靶基因设计siRNA序列,并合成小发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)结构的DNA,与经AgeΙ和EcoRΙ酶切的pSIL-RFP连接、转化大肠杆菌感受态细胞,构建成携带Mmp9-shRNA慢病毒质粒载体(pSIL-RFP/MMP9-shRNA),PCR及测序鉴定后,Western blot筛选出携带最佳siRNA的慢病毒质粒载体,并利用慢病毒包装质粒(pHelper1.0和pHelper2.0)将其制备成MMP9-shRNA慢病毒,并测定病毒滴度为1×1010pfu/l。结果:PCR和DNA测序证实合成的含基质金属蛋白酶9短发卡RNA慢病毒载体寡核苷酸链正确插入pSIL-RFP载体,表明实验成功构建基质金属蛋白酶9RNA干扰慢病毒表达载体。结论:成功的构建并筛选出针对小鼠Mmp9基因沉默的特异性shRNA重组慢病毒,为血管化性疾病的防治研究提供基础。

血管紧张素Ⅱ调控基质金属蛋白酶9的表达在蛛网膜下腔出血发病中的机制研究

目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)调控基质金属蛋白酶9(MMP⁃9)的表达在蛛网膜下腔出血(SAH)发病中的机制。方法人脑微血管内皮细胞(HBMEC)株分为AngⅡ组、AngⅡ+SB203580组和对照组。其中AngⅡ组以100μg/L浓度AngⅡ处理90 min、2 h、4 h、6 h、12 h后取细胞上清液进行相关指标检测;AngⅡ+SB203580组以5μΜ的SB203580处理20 min后以100μg/L浓度AngⅡ处理90 min、2 h、4 h、6 h、12 h后取细胞上清液进行相关指标检测;对照组加入RPMI⁃1640培养液培养90 min、2 h、4 h、6 h、12 h后取细胞上清液进行相关指标检测。以酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组细胞上清液MMP⁃9水平,并以实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测各组细胞p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)的mRNA和蛋白表达水平。结果与对照组比较,AngⅡ组细胞上清液MMP⁃9[处理12 h:(4.21±1.36)μg/L比(5.81±1.72)μg/L,P<0.01]水平升高,AngⅡ+SB203580组细胞上清液MMP⁃9[处理12 h:(4.21±1.36)μg/L比(3.64±1.45)μg/L,P<0.01]水平降低(P<0.05)。与AngⅡ组比较,AngⅡ+SB203580组细胞上清液MMP⁃9水平降低(P<0.001)。与对照组比较,AngⅡ组细胞p38 MAPK的mRNA[处理12 h:(0.422±0.057)比(0.538±0.071),P<0.05)]和蛋白表达水平[(0.452±0.105)比(0.635±0.133),P<0.001]升高,AngⅡ+SB203580组细胞p38 MAPK的mRNA[处理12 h:(0.422±0.057)比(0.375±0.066),P<0.05]和蛋白表达水平[(0.452±0.105)比(0.276±0.081),P<0.001]降低(P<0.05)。与AngⅡ组比较,AngⅡ+SB203580组细胞p38 MAPK的mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.001)。结论AngⅡ可能通过激活p38 MAPK信号通路上调MMP⁃9表达从而促进SAH发生发展。

骨关节炎关节软骨细胞凋亡的研究进展

骨关节炎(OA)是由肥胖、劳损、老化、创伤等一系列因素所致的炎性病症。研究发现,OA软骨细胞凋亡可直接导致关节软骨退变甚至钙化,影响关节功能。本文对OA中软骨细胞凋亡涉及的炎症介质、信号通路、靶点调控三方面进行综述,探讨软骨细胞凋亡在OA发生发展中的作用机制,为OA的预防及早期治疗提供理论基础。

多囊卵巢综合征患者种植窗口期子宫内膜容受性的研究

目的研究影响多囊卵巢综合征(PCOS)患者种植窗口期子宫内膜容受性的基因表达。方法 9例 PCOS 患者(PCOS 组)及7例非 PCOS 因男方原因不孕者(对照组)行阴道超声监测结合血清激素测定确定排卵时间,于种植窗口期对两组妇女进行子宫内膜活检,提取 cDNA,其中6例PCOS 患者应用含有21571个基因序列的寡核苷酸芯片进行扫描,经过分析后得到 PCOS 患者的子宫内膜与对照组相比的差异表达基因;另外3例 PCOS 患者进行实时荧光定量 PCR 实验检测基质金属蛋白酶26(MMP-26)基因的表达。结果 PCOS 患者种植窗口期子宫内膜的差异表达基因为116个,占全部表达基因的比例为1.23%(116/9421)。PCOS 组患者与对照组比较,表达上调的差异表达基因占0.12%(11/9421);表达下调的差异表达基因占1.11%(105/9421),其中,MMP-26在基因芯片中表达下调10.6倍。与对照组患者种植窗口期子宫内膜比较,3例 PCOS 患者子宫内膜 MMP-26基因的相对表达率(Ratio 值)分别为0.31、0.11和0.05。结论 PCOS 患者种植窗口期子宫内膜 MMP-26基因表达下调,提示 PCOS 患者存在子宫内膜容受能力下降。

二硫化碳对孕鼠胚胎和子宫组织基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶-9表达水平的影响

目的 观察二硫化碳（CS2）对孕鼠胚胎和子宫组织中基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9表达水平的影响,探讨CS2致胚胎毒性作用机制.方法 昆明种小鼠随机分为对照组、卵泡发育期染毒组、胚胎植入早期染毒组、胚胎植入晚期染毒组,染毒组分别在卵泡发育期、胚胎植入早期、胚胎植入晚期腹腔注射631.4 mg/kg CS2,1次/d,连续2 d.孕第9天检查胚胎植入和发育情况,应用明胶酶谱法检测胚胎和子宫组织中MMP-2、MMP-9表达水平.结果 与对照组（30.700±5.599）比较,植入晚期染毒组胚胎植入数（16.000±12.166）明显减少,差异有统计学意义（P＜0.05）.染毒后胚胎组织中MMP-2、MMP-9表达均降低,其中植入晚期染毒组MMP-2、MMP-9分别为0.6837±0.0929、0.7309±0.0822,卵泡发育期染毒组分别为0.6222±0.0997、0.7520±0.1068,与对照组（分别为1.0000±0.0710、1.0000±0.0413）比较,差异均有统计学意义（P＜0.01）;植入晚期染毒组孕鼠子宫组织中MMP-2（1.3153±0.3032）、MMP-9（5.0210±4.0307）表达水平较对照组（分别为1.0000±0.1771、1.0000±0.0996）明显升高,差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 胚胎植入晚期暴露CS2后胚胎毒作用明显,胚胎和子宫组织中MMP-2、MMP-9表达水平异常可能是CS2致胚胎毒性的重要机制之一.