β-catenin和突变体ΔN90腺病毒载体的构建及其在MSCs中的表达

旨在研究β-catenin对MSCs迁移的作用,构建β-catenin和突变体ΔN90的重组腺病毒载体,在MSCs中验证其表达情况。将目的基因定向克隆到pAdTrack-CMV穿梭载体上,并经PmeⅠ线性化后在BJ5183细菌中与pAdEasy-1骨架质粒同源重组,获得重组腺病毒载体,在QBI-293A细胞中包装和扩增。结果显示,酶切和测序证实Ad-β-catenin和Ad-ΔN90质粒构建正确,荧光显微镜可观察到GFP的表达,并选出150 MOI为最适感染MSCs的感染复数,Western blot检测到Ad-β-catenin和Ad-ΔN90都能增加β-catenin的蛋白表达量,TOPFlash检测到Ad-β-catenin和Ad-ΔN90都能增加β-catenin的转录活性。说明成功构建Ad-β-catenin和Ad-ΔN90腺病毒载体,并获得高滴度病毒子。