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慢病毒介导转染Adra1d基因shRNA对大鼠主动脉血管平滑肌细胞钙离子和钙调蛋白的影响
被引量:
3
1
作者
赵良渊
侯晓敏
秦小江
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第7期1306-1310,1316,共6页
目的:探讨慢病毒介导转染α1D-肾上腺素能受体(Adra1d)基因shRNA对大鼠主动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)中Ca^(2+)浓度及钙调蛋白(Ca M)表达的影响。方法:Adra1d基因shRNA与GV248载体拼接得到重组载体,经包装...
目的:探讨慢病毒介导转染α1D-肾上腺素能受体(Adra1d)基因shRNA对大鼠主动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)中Ca^(2+)浓度及钙调蛋白(Ca M)表达的影响。方法:Adra1d基因shRNA与GV248载体拼接得到重组载体,经包装质粒共转染293T细胞,包装病毒,收集病毒原液,超速离心浓缩,并测定滴度得到重组慢病毒载体。用得到的重组慢病毒载体转染大鼠VSMCs,通过RT-q PCR和Western blot鉴定干扰效果,然后激光共聚焦检测VSMCs内Ca^(2+)浓度变化,RT-q PCR和Western blot法检测VSMCs Ca M的mRNA和蛋白表达。结果:慢病毒载体构建成功;收集得到293T细胞分泌的病毒上清,测定病毒的滴度为3×1011TU/L。转染后大鼠主动脉VSMCs的Adra1d mRNA和蛋白表达量均显著下调。慢病毒Lv-shRNA4-Adr对目的基因Adra1d的干扰效率大于85%;Adra1d基因被靶向沉默后,与scrambled组相比,大鼠主动脉VSMCs的Ca^(2+)荧光强度显著升高,而且Ca M的mRNA和蛋白表达量也显著增加。结论:慢病毒介导转染Adra1d基因shRNA可显著增加大鼠主动脉VSMCs中Ca^(2+)浓度和Ca M表达。
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关键词
adra1d
基因
血管平滑肌细胞
RNA干扰
钙离子
钙调蛋白
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职称材料
题名
慢病毒介导转染Adra1d基因shRNA对大鼠主动脉血管平滑肌细胞钙离子和钙调蛋白的影响
被引量:
3
1
作者
赵良渊
侯晓敏
秦小江
机构
山西医科大学体育教学部
山西医科大学基础医学院
山西医科大学公共卫生学院
出处
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第7期1306-1310,1316,共6页
基金
山西省高等学校科技创新项目(No.2017146
No.2017147)
+7 种基金
山西省青年科技研究基金资助项目(No.201701D221247
No.201701D221259)
山西医科大学博士启动基金资助项目(No.03201510
No.03201521)
山西医科大学青年基金资助项目(No.02201604
No.02201613)
山西医科大学教育教学改革创新项目(No.XJ2018003)
山西医科大学校级教育教学改革研究课题(No.2017-8)
文摘
目的:探讨慢病毒介导转染α1D-肾上腺素能受体(Adra1d)基因shRNA对大鼠主动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)中Ca^(2+)浓度及钙调蛋白(Ca M)表达的影响。方法:Adra1d基因shRNA与GV248载体拼接得到重组载体,经包装质粒共转染293T细胞,包装病毒,收集病毒原液,超速离心浓缩,并测定滴度得到重组慢病毒载体。用得到的重组慢病毒载体转染大鼠VSMCs,通过RT-q PCR和Western blot鉴定干扰效果,然后激光共聚焦检测VSMCs内Ca^(2+)浓度变化,RT-q PCR和Western blot法检测VSMCs Ca M的mRNA和蛋白表达。结果:慢病毒载体构建成功;收集得到293T细胞分泌的病毒上清,测定病毒的滴度为3×1011TU/L。转染后大鼠主动脉VSMCs的Adra1d mRNA和蛋白表达量均显著下调。慢病毒Lv-shRNA4-Adr对目的基因Adra1d的干扰效率大于85%;Adra1d基因被靶向沉默后,与scrambled组相比,大鼠主动脉VSMCs的Ca^(2+)荧光强度显著升高,而且Ca M的mRNA和蛋白表达量也显著增加。结论:慢病毒介导转染Adra1d基因shRNA可显著增加大鼠主动脉VSMCs中Ca^(2+)浓度和Ca M表达。
关键词
adra1d
基因
血管平滑肌细胞
RNA干扰
钙离子
钙调蛋白
Keywords
adra1d gere
Vascular smooth muscle cells
RNA interference
Calcium ion
Calmodulin
分类号
R331 [医药卫生—人体生理学]
R363 [医药卫生—病理学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
慢病毒介导转染Adra1d基因shRNA对大鼠主动脉血管平滑肌细胞钙离子和钙调蛋白的影响
赵良渊
侯晓敏
秦小江
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2018
3
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职称材料
已选择
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