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Model prediction of inactivation of Aeromonas salmonicida grown on poultry in situ by intense pulsed light
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作者 Jingwen Wang Zhenzhen Ning +2 位作者 Yifan Chen Xinglian Xu Huhu Wang 《Food Science and Human Wellness》 SCIE CSCD 2024年第2期1011-1017,共7页
The aim of this study was to evaluate the factors influencing the inactivation effect of intense pulsed light(IPL)on Aeromonas salmonicida grown on chicken meat and skin,and to further develop prediction models of ina... The aim of this study was to evaluate the factors influencing the inactivation effect of intense pulsed light(IPL)on Aeromonas salmonicida grown on chicken meat and skin,and to further develop prediction models of inactivation.In this work,chicken meat and skin inoculated with meat-borne A.salmonicida isolates were subjected to IPL treatments under different conditions.The results showed that IPL had obvious bactericidal effect in the chicken skin and thickness groups when the treatment voltage and time were 7 V combined with 5 s.In addition,the lethality curves of A.salmonicida were fitted under IPL conditions of 3.5-7.5 V.The comparison of statistical parameters revealed that the Weibull model could best fit the mortality curves and could accurately predict the mortality dynamic of A.salmonicida grown on chicken skin.And further a secondary model between the scale factor b and the treatment voltage in Weibull model was established using linear equations,which determined that the secondary model could accurately predict the inactivation of A.salmonicida.This study provides a theoretical basis for future prediction models of Aeromonas,and also provides new ideas for sterilization approaches of meat-borne Aeromonas. 展开更多
关键词 aeromonas salmonicida Intense pulsed light INACTIVATION Chicken meat MODEL
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Immuno-Protective Efficiency of the Bivalent Inactivated Vaccine Against Vibrio scophthalmi and Aeromonas salmonicida Infections in Turbot(Scophthalmus maximus L.)
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作者 ZHOU Shun ZHENG Xujia +3 位作者 DING Yuanyuan SU Lin HUANG Qing XIU Yunji 《Journal of Ocean University of China》 SCIE CAS CSCD 2023年第4期1079-1086,共8页
Vibrio scophthalmi and Aeromonas salmonicida can cause high turbot mortality and huge economic losses.Presently,vaccination is the most promising method for preventing communicable diseases.In this study,we used forma... Vibrio scophthalmi and Aeromonas salmonicida can cause high turbot mortality and huge economic losses.Presently,vaccination is the most promising method for preventing communicable diseases.In this study,we used formalin to kill V.scophthalmi and A.salmonicida cells,and mixed with the mineralized oil adjuvant(Montanide^(TM)ISA 763 AVG)to prepare the bivalent inactivated vaccine.The results showed that turbot inoculated with the bivalent inactivated vaccine exhibited strong tolerance to the infection of V.scophthalmi and A.salmonicida,and no obvious clinical symptoms and pathological changes were observed.The activities of enzymes lysozyme,acid phosphatase and complement C3 had significantly increased after the vaccination.The antibody titer response of vaccinated turbot was greatly boosted,which was positively connected with the immunological impact according to ELISA results.Simultaneously,the expression levels of immune-related genes such as MHC-IIα,MHC-IIβ,CD4,CD8,TNF-αand IL^(-1)βwere up-regulated,demonstrating that it might stimulate humoral and cellular immunological response in turbot.These findings highlight the potential of the bivalent inactivated vaccine for controlling V.scophthalmi and A.salmonicida infections in turbot. 展开更多
关键词 aeromonas salmonicida Vibrio scophthalmi bivalent inactivated vaccine immune response
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Concentration of Enrofloxacin Residue from Tilapia (Oreochromis niloticus) Muscular That Infected by Aeromonas salmonicida
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作者 Kumiasih Fera Aryanti 《Journal of Agricultural Science and Technology(A)》 2014年第9期750-754,共5页
关键词 恩诺沙星 罗非鱼肉 扩散浓度 残留浓度 感染 肌肉 气单胞菌 抗生素治疗
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Identification and histopathological and pathogenicity analysis of Aeromonas salmonicida salmonicida from goldfish (Carassius auratus) in North China 被引量:1
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作者 Shibo Jin Songzhe Fu +4 位作者 Ruijun Li Huifeng Dang Dongxu Gao Shigen Ye Zhiqiang Jiang 《Aquaculture and Fisheries》 2020年第1期36-41,共6页
In this study,bacterial pathogens were isolated from the liver,spleen,kidney,heart,and muscle of diseased goldfish(Carassius auratus)after a massive outbreak of disease in an aquaculture farm in Anshan,Liaoning Provin... In this study,bacterial pathogens were isolated from the liver,spleen,kidney,heart,and muscle of diseased goldfish(Carassius auratus)after a massive outbreak of disease in an aquaculture farm in Anshan,Liaoning Province,North China(N41°05′58.42″E122°53′31.89″).Based on physiological and biochemical characterization of the bacteria and 16S rDNA sequence analysis,the bacterial isolates were identified as Aeromonas salmonicida salmonicida.Virulence gene multilocus sequence typing analysis showed that the bacterial isolates from all the organs collected were of the same type,and clustered in the same phylogenetic group as A.salmonicida salmonicida.The pathogen,was named AS.17 and was resistant to rifampicin,bacitracin,vancomycin,penicillin and compound sulfamethoxazole,but was highly sensitive to nalidixic acid,lomefloxacin,spectinomycin,ofloxacin,and ciprofloxacin.Goldfish experimentally infected with AS.17 had similar symptoms to naturally infected fish,including gill filament anemia,intestinal bleeding,intra-abdominal fluid,and jaw bleeding.Histological analyses showed that the liver,the spleen,the kidney and the intestines of fish infected with AS.17 had severe pathological alterations.In summary,this study reports the isolation of A.salmonicida salmonicida from C.auratus in North China and provides a reference strain and a research foundation for further studies on A.salmonicida disease control and epidemiology. 展开更多
关键词 aeromonas salmonicida salmonicida Carassius auratus Histopathology IDENTIFICATION MLST PATHOGENICITY
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河川沙塘鳢病原杀鲑气单胞菌致病性及感染后宿主免疫相关基因差异表达分析
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作者 李杰 刘国兴 +6 位作者 钱且奇 朱玉洁 陈圳 姜群 王骏 张晓君 高晓建 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2024年第1期45-56,共12页
为探明2021年3月常熟某养殖场河川沙塘鳢(Odontobutis potamophilus)疾病暴发的原因,本研究从患病鱼体内分离到优势菌株,通过形态观察、理化特性测定及gyrB基因同源性分析鉴定优势菌,同时通过人工感染试验、组织病理观察、毒力因子及毒... 为探明2021年3月常熟某养殖场河川沙塘鳢(Odontobutis potamophilus)疾病暴发的原因,本研究从患病鱼体内分离到优势菌株,通过形态观察、理化特性测定及gyrB基因同源性分析鉴定优势菌,同时通过人工感染试验、组织病理观察、毒力因子及毒力基因检测确定其致病性,并测定分离菌的耐药性和感染后河川沙塘鳢免疫相关基因表达变化。结果显示:引起河川沙塘鳢大量死亡的病原菌为杀鲑气单胞菌(Aeromonas salmonicida)。代表菌株G2-4-1对河川沙塘鳢的LD 50为1.8×106 CFU/mL;该病原菌感染可引起河川沙塘鳢肝脏、脾脏、肾脏和鳃组织出现明显的变性、坏死和炎性细胞浸润;该菌株携带aer、hly、exu等毒力基因,且具有蛋白酶、卵磷脂酶、淀粉酶、脂酶、明胶酶和溶血素活性,但不具有DNA酶活性;耐药性分析发现,分离菌G2-4-1对青霉素G、氨苄西林、苯唑西林等8种药物耐药,对克拉霉素和大观霉素2种药物中介,对恩诺沙星、氟苯尼考等24类药物敏感;免疫相关基因表达分析显示,在感染初期MHCⅡB、MyD88、TLR和SOD在鳃、脾脏和肾脏组织中都显著上调表达。 展开更多
关键词 河川沙塘鳢(Odontobutis potamophilus) 杀鲑气单胞菌(aeromonas salmonicida) 致病性 组织病理 免疫相关基因
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Dot-ELISA法检测致病性嗜水气单胞菌 被引量:5
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作者 任燕 潘子豪 +2 位作者 陆承平 姚火春 吴淑勤 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1409-1415,共7页
在鱼类致病性气单胞菌诊断试剂盒的基础上,用斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)检测致病性嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,Ah)胞外蛋白酶ECPase54,同时用脱脂奶平板、PCR特异性扩增气溶素基因aer和16SrRNA基因检测72株气单胞菌分离... 在鱼类致病性气单胞菌诊断试剂盒的基础上,用斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)检测致病性嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,Ah)胞外蛋白酶ECPase54,同时用脱脂奶平板、PCR特异性扩增气溶素基因aer和16SrRNA基因检测72株气单胞菌分离株。结果显示致病性嗜水气单胞菌检测阳性率分别如下:Dot-ELISA法90.3%(65/72)、脱脂奶平板法75%(54/72)、aer基因PCR法94.4%(68/72)、16SrRNA PCR法81.9%(59/72),Dot-ELISA与其他3种方法的符合率分别为79.2%(57/72)、91.6%(66/72)、81.9%(59/72)。在ECPase54兔抗血清制备后的2、4、6、12、18个月,用Dot-ELISA检测72株分离株,检测结果重复性好。结果表明Dot-ELISA法敏感、特异、实用,可用于鱼类致病性Ah的临床诊断。 展开更多
关键词 嗜水气单胞菌 胞外蛋白酶 斑点酶联免疫吸附试验(Dot-elisa) 检测
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Dot-ELISA快速检测鱼类运动性气单胞菌的研究 被引量:14
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作者 马家好 李学勤 +2 位作者 王振英 杨振国 王文东 《大连水产学院学报》 CSCD 1997年第3期72-78,共7页
制备了引起常见鱼病的6株运动性气单胞菌的兔抗血清,建立了检测运动性气单胞菌的Dot-ELISA法。该法能检出含107菌细胞/mL的菌悬液及10个菌细胞/mL增菌20h的培养物,与运动性气单胞菌群内的菌株,均呈现明显的... 制备了引起常见鱼病的6株运动性气单胞菌的兔抗血清,建立了检测运动性气单胞菌的Dot-ELISA法。该法能检出含107菌细胞/mL的菌悬液及10个菌细胞/mL增菌20h的培养物,与运动性气单胞菌群内的菌株,均呈现明显的阳性反应,不与鲁克耶尔森氏菌、荧光假单胞菌、鳗弧菌等10株对照菌发生影响检测结果的交叉反应。应用Dot-ELISA与常规分离法分别对人工感染的40份样本进行检测,其阳性数分别为33和34,两法符合率为97%。经X2检验表明,两法检测结果间有显著意义的一致性(P<0.05),但前者可在24h内报告结果。应用Dot-ELISA又对8株鱼源菌检定,结果与细菌学检查相符。Dot-ELISA法具有快速、敏感、特异、实用的优点,可用于引起常见鱼病的运动性气单胞菌群的检测。 展开更多
关键词 运动性气单胞菌 DOT-elisa 鱼病
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施氏鲟病原嗜水气单胞菌ELISA快速检测方法的研究 被引量:4
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作者 刘双凤 邹作宇 +4 位作者 韩志忠 曲立 董宏伟 徐连伟 蔡勋 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2009年第6期69-73,共5页
以施氏鲟(Acipenser schrenchii)细菌性败血症病原菌嗜水气单胞菌为抗原,免疫兔获得高免血清,建立一种快速检测施氏鲟细菌性败血症病原菌嗜水气单胞菌的ELISA技术。结果显示:采用棋盘滴定法确定抗原和抗血清的最适工作浓度分别为107CFU... 以施氏鲟(Acipenser schrenchii)细菌性败血症病原菌嗜水气单胞菌为抗原,免疫兔获得高免血清,建立一种快速检测施氏鲟细菌性败血症病原菌嗜水气单胞菌的ELISA技术。结果显示:采用棋盘滴定法确定抗原和抗血清的最适工作浓度分别为107CFU/mL和1∶20000;病原菌检测灵敏度为每孔104CFU;抗血清与其它细菌标准菌株的交叉反应结果均呈阴性;阻断实验中的阻断率达66.88%;交叉反应和阻断实验的结果表明该方法具有较高的特异性。将该方法标准化后检测了22份人工感染后的施氏鲟和健康施氏鲟,阳性检测率分别为90.9%和13.6%,表明该技术不仅能够检测已发病的施氏鲟,而且能够检测带菌的施氏鲟。 展开更多
关键词 施氏鲟(Acipenser schrenchii) 细菌性败血症 嗜水气单胞菌 间接elisa
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草鱼点状产气单胞菌单克隆抗体的制备与双抗原夹心ELISA法的建立 被引量:1
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作者 马丽 康洁 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2012年第5期138-141,共4页
为了建立一种快速、准确能早期检测草鱼肠炎病原菌的方法,以患病草鱼为材料,制备点状产气单胞菌单克隆抗体(McAb),并鉴定其特异性和抗原表位;采用过碘酸钠方法,以辣根过氧化物酶标记单抗,用试管凝集试验测定其活性;建立点状产气单胞菌M... 为了建立一种快速、准确能早期检测草鱼肠炎病原菌的方法,以患病草鱼为材料,制备点状产气单胞菌单克隆抗体(McAb),并鉴定其特异性和抗原表位;采用过碘酸钠方法,以辣根过氧化物酶标记单抗,用试管凝集试验测定其活性;建立点状产气单胞菌McAb的双抗原夹心ELISA检测方法,确定包被单抗和酶标单抗的浓度,并测定其灵敏度和特异性。结果:1)获得了2株特异性强和抗原表位不同的单抗,其ELISA效价为1∶16 000。2)辣根过氧化物酶标记的抗体活性为1∶640。3)建立了包被抗体稀释度为1∶800、酶标抗体稀释度为1∶1 600的双抗原夹心ELISA检测方法,该方法与点状产气单胞菌呈强阳性反应,与近似菌无交叉反应,灵敏性为7×103cfu/mL。结论:制备的点状产气单胞菌McAb的效价高、特异性强;建立的双抗原夹心ELISA方法操作简单、灵敏度高、特异性强,可应用于草鱼肠炎病原体的早期快速检测。 展开更多
关键词 草鱼 点状产气单胞菌 单克隆抗体 双抗原夹心elisa
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豚鼠气单胞菌快速检测间接ELISA法的建立 被引量:8
10
作者 吴斌 《福建水产》 2006年第4期48-51,共4页
应用从患败血症的鳗鲡中分离、纯化出的豚鼠气单胞菌(Aeromonas caviae)菌株AB40511NA1,制备了兔抗血清,建立了快速检测豚鼠气单胞菌的间接ELISA方法。研究结果显示:AB40511NA1兔抗血清的效价为1:16000。该法对AB40511NA1最低检测量为6&... 应用从患败血症的鳗鲡中分离、纯化出的豚鼠气单胞菌(Aeromonas caviae)菌株AB40511NA1,制备了兔抗血清,建立了快速检测豚鼠气单胞菌的间接ELISA方法。研究结果显示:AB40511NA1兔抗血清的效价为1:16000。该法对AB40511NA1最低检测量为6×10~4 cfu·mL^(-1);与水产养殖动物主要致病菌嗜水气单胞菌(A.hydrophila)、温和气单胞菌(A.sobria)、鳗弧菌(V.anguillarum)、溶藻弧菌(V.alginolyticus)、副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)及非O1-群霍乱弧菌(Non-O1 Vibrio cholerae)均无交叉反应,特异性强;能快速、准确、方便地检测出豚鼠气单胞菌。 展开更多
关键词 豚鼠气单胞菌 间接elisa 快速检测
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草鱼肠型点状产气单胞菌双抗夹心ELISA试剂盒的研制
11
作者 康洁 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期61-65,共5页
通过对包被单抗和酶标单抗以及抗原最佳工作浓度的优化,建立草鱼肠型点状产气单胞菌双抗夹心ELISA试剂盒检测体系。用分光光度法对检测体系的特异性、稳定性和灵敏度进行测定;用脱脂奶平板法对试剂盒的临床应用进行检测。结果表明,单抗... 通过对包被单抗和酶标单抗以及抗原最佳工作浓度的优化,建立草鱼肠型点状产气单胞菌双抗夹心ELISA试剂盒检测体系。用分光光度法对检测体系的特异性、稳定性和灵敏度进行测定;用脱脂奶平板法对试剂盒的临床应用进行检测。结果表明,单抗最适稀释液为pH9.4的碳酸盐缓冲液,洗涤液为含φ=0.05%Tween-20的PBS,包被单抗最适体积稀释倍数为1∶800,酶标单抗最适体积稀释倍数为1∶6 000,抗原最佳工作浓度为3×104cfu/mL。试剂盒与肠型点状产气单胞菌有特异性反应,脱脂奶平板法与试剂盒法对草鱼患病检出率基本一致,符合率达90%;试剂盒有很好的储存稳定性,检测灵敏度为7×103cfu/mL。 展开更多
关键词 草鱼 肠型点状产气单胞菌 试剂盒 双抗夹心elisa
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间接ELISA法研究嗜水气单胞菌对鳗鲡表皮黏液的黏附特性 被引量:2
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作者 林桂芳 鄢庆枇 +2 位作者 陈文博 苏永全 覃映雪 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期1023-1031,共9页
采用间接ELISA法研究菌浓度、孵育时间、温度、pH、阳离子及碳源等因子对嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)黏附鳗鲡(Anguilla anguilla)表皮黏液的影响。结果表明, 改良后的间接ELISA法的检测灵敏度约为9.92×104 CFU, 细菌... 采用间接ELISA法研究菌浓度、孵育时间、温度、pH、阳离子及碳源等因子对嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)黏附鳗鲡(Anguilla anguilla)表皮黏液的影响。结果表明, 改良后的间接ELISA法的检测灵敏度约为9.92×104 CFU, 细菌的黏附量随菌浓度的升高而逐渐增大并符合饱和黏附动力学方程: y=0.135ln(x)-0.936(R2= 0.986); 嗜水气单胞菌黏附鳗鲡表皮黏液的最佳条件为: 温度20-28℃, pH 6.2-6.6, NaCl、MgCl2质量浓度分别为15-25 g/L和3 g/L, 孵育时间为150 min。碳源对嗜水气单胞菌的黏附作用有不同程度的影响, 葡萄糖和麦芽糖能显著提高嗜水气单胞菌的黏附量(P〈0. 05), 果糖则显著降低嗜水气单胞菌的黏附量(P〈0. 05)。以上结果说明, 嗜水气单胞菌对鳗鲡表皮黏液具有较强的黏附作用, 且其黏附作用具有可控性。 展开更多
关键词 嗜水气单胞菌 黏附 间接elisa 鳗鲡 表皮黏液
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虹鳟杀鲑气单胞菌耐药性研究与盐酸多西环素给药方案制定
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作者 刘博 张培 +4 位作者 彭嘉琪 程波 赵雅贤 穆迎春 孙慧武 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2023年第6期69-79,共11页
为科学制定虹鳟(Oncorhynchus mykiss)杀鲑气单胞菌(Aeromonas salmonicida)病的给药方案,对3株分离自虹鳟的杀鲑气单胞菌采用纸片扩散法(K-B法)进行24种抗生素耐药性测定,并对其中4种敏感且批准使用的抗生素进行体外药效学实验,研究20... 为科学制定虹鳟(Oncorhynchus mykiss)杀鲑气单胞菌(Aeromonas salmonicida)病的给药方案,对3株分离自虹鳟的杀鲑气单胞菌采用纸片扩散法(K-B法)进行24种抗生素耐药性测定,并对其中4种敏感且批准使用的抗生素进行体外药效学实验,研究20、30、40和60 mg/kg盐酸多西环素在染病虹鳟体内的药代动力学特征。结果显示:3株杀鲑气单胞菌对复方新诺明、磺胺异恶唑、青霉素、阿莫西林、头孢唑林耐药,对盐酸多西环素最敏感,其最小抑菌浓度(MIC)为0.5μg/mL,最小杀菌浓度(MBC)在2~4μg/mL之间,防耐药突变浓度(MPC)为1μg/mL;恩诺沙星的MIC在0.25~1μg/mL之间,MBC为4μg/mL,MPC为1.5μg/mL;氟苯尼考的MIC为1μg/mL,MBC为8μg/mL,MPC为2μg/mL;硫酸新霉素MIC为4μg/mL,MBC为8μg/mL,MPC为12μg/mL。40 mg/kg剂量单次给药,盐酸多西环素在患病虹鳟血浆中的峰浓度为1.19μg/mL,达峰时间为4 h,且血药浓度维持在MIC以上16 h,可以满足虹鳟杀鲑气单胞菌病治疗需要。60 mg/kg剂量单次给药,盐酸多西环素在患病虹鳟血浆、肌肉、肾脏和肝脏中药物浓度维持在MIC以上的时间分别为23、18、23.5和23.5 h,在患病虹鳟血浆、肾脏和肝脏中药物浓度维持在MPC之上的时间分别为6、23.5和23.5 h,此使用剂量既能达到虹鳟杀鲑气单胞菌治疗作用,又能有效防止产生耐药性。 展开更多
关键词 杀鲑气单胞菌(aeromonas salmonicida) 虹鳟(Oncorhynchus mykiss) 耐药 盐酸多西环素 给药方案
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绿鳍马面鲀与许氏平鲉杀鲑气单胞菌病原的分离和鉴定 被引量:1
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作者 晋怀远 刘耀宽 +5 位作者 高晔 夏苏东 陈四清 莫照兰 边力 李杰 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2023年第1期191-200,共10页
2018年和2019年,山东省烟台市蓬莱市一养殖场工厂化养殖的绿鳍马面鲀(Thamnaconus septentrionalis)和许氏平鲉(Sebastes schlegeli)发病死亡,主要症状为嘴部溃疡、红肿和出血。从发病鱼内脏中均可分离到大量形态一致的优势菌,分别命名... 2018年和2019年,山东省烟台市蓬莱市一养殖场工厂化养殖的绿鳍马面鲀(Thamnaconus septentrionalis)和许氏平鲉(Sebastes schlegeli)发病死亡,主要症状为嘴部溃疡、红肿和出血。从发病鱼内脏中均可分离到大量形态一致的优势菌,分别命名为2018TS-1和2019SS-1,分离菌株经16S rRNA测序、生理生化鉴定和vap A基因分析确定为杀鲑气单胞菌杀日本鲑亚种(Aeromonas salmonicida subsp. masoucida)。人工感染结果显示,2018TS-1和2019SS-1分别能引起绿鳍马面鲀和许氏平鲉的死亡,被感染鱼呈嘴部红肿症状,与自然发病症状一致,其半数致死量分别为1.78×10^(5)和0.89×10^(5) CFU/尾。本研究首次报道了国内工厂化养殖绿鳍马面鲀和许氏平鲉感染杀鲑气单胞菌的病例,是目前人工养殖绿鳍马面鲀的首个疾病报道,也是继大西洋鲑(Salmo salar)、大菱鲆(Scophthalmus maximus)和裸盖鱼(Anoplopoma fimbria)等品种后,在山东省海水养殖鱼类中再次发现杀鲑气单胞菌杀日本鲑亚种的感染。本研究结果丰富了杀鲑气单胞菌杀日本鲑亚种的感染宿主范围,也为绿鳍马面鲀和许氏平鲉养殖的病害防控提供依据。 展开更多
关键词 绿鳍马面鲀 许氏平鲉 细菌鉴定 杀鲑气单胞菌杀日本鲑亚种
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杀鲑气单胞菌杀鲑亚种和杀日本鲑亚种PCR检测方法的建立
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作者 刘静静 李贵阳 +3 位作者 晋怀远 高晔 王会林 李杰 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2023年第4期223-233,共11页
杀鲑气单胞菌(Aeromonas salmonicida)是一种重要的鱼类致病菌,可以感染多种海淡水鱼类。杀鲑气单胞菌包括5个亚种,目前常用的生理生化特征和16S rDNA序列分析方法很难实现亚种的快速精确区分。为实现杀鲑气单胞菌亚种的快速鉴定和检测... 杀鲑气单胞菌(Aeromonas salmonicida)是一种重要的鱼类致病菌,可以感染多种海淡水鱼类。杀鲑气单胞菌包括5个亚种,目前常用的生理生化特征和16S rDNA序列分析方法很难实现亚种的快速精确区分。为实现杀鲑气单胞菌亚种的快速鉴定和检测,针对我国常见的杀鲑气单胞菌杀鲑亚种(A.salmonicida subsp.salmonicida)和杀日本鲑亚种(A.salmonicida subsp.masoucida),本研究开发了其特异性的PCR检测方法。根据Gene Bank已公布的杀鲑气单胞菌基因组信息,选择杀鲑亚种phoB基因和杀日本鲑亚种LOC111476736基因作为目标基因,根据其序列设计特异性引物,进一步对PCR反应的退火温度、引物浓度、dNTPs浓度、Mg^(2+)浓度和酶浓度5个方面进行了优化,并测试了该方法的特异性、敏感性和应用效果。结果显示,2对引物分别可以扩增出杀鲑气单胞菌杀鲑亚种522 bp的phoB特异性基因片段和杀日本鲑亚种515 bp的LOC111476736特异性基因片段。杀鲑亚种特异性引物最适退火温度为64℃,10μmol/L引物、2 mmol/L dNTPs、25 mmol/L MgSO4和1 U/μL KOD酶的最适添加量分别为1.5、2、1.5和0.5μL。杀日本鲑亚种特异性引物最适退火温度为64℃,10μmol/L引物、2 mmol/L dNTPs、25 mmol/L MgSO4和1 U/μL KOD酶的最适添加量分别为0.75、1、1.5和0.5μL。以鳗弧菌(Vibrio anguillarum)、美人鱼发光杆菌(Photobacterium damselae)、杀鱼爱德华氏菌(Edwardsiella piscicida)、杀鲑气单胞菌其他亚种等14种其他水产病原菌或常见环境菌为模板进行PCR检测,均无特异性条带。该方法对杀鲑气单胞菌杀鲑亚种的检测灵敏度为12.8 CFU/反应(菌体)或17.6 fg/反应(DNA),对杀鲑气单胞菌杀日本鲑亚种的检测灵敏度为23.8 CFU/反应(菌体)或27.2 fg/反应(DNA)。利用杀鲑气单胞菌杀鲑亚种和杀日本鲑亚种分别对大菱鲆(Scophthalmus maximus)进行人工感染实验,感染后取病鱼组织进行PCR检测,结果显示,本方法可以从感染后的大菱鲆中分别检测到相应病原。综上所述,本研究建立了杀鲑气单胞菌杀鲑亚种和杀日本鲑亚种的特异性PCR检测方法,该检测方法为杀鲑气单胞菌杀鲑亚种和杀日本鲑亚种的流行病调查和快速诊断提供了支撑。 展开更多
关键词 杀鲑气单胞菌杀鲑亚种 杀鲑气单胞菌杀日本鲑亚种 PCR 检测
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亚东鲑细菌性鳃病病原菌的分离鉴定
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作者 孙帅杰 周建设 +4 位作者 王万良 陈美群 张驰 李明 扎西拉姆 《水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期288-295,共8页
2020年9月西藏自治区日喀则市亚东县某养殖基地的亚东鲑出现鳃病症状,主要临床症状为鳃盖打开、鳃丝充血、病鱼离群及呼吸困难。为探究此次疾病的病因,寻找其治疗方法,自患有鳃病症状的亚东鲑鳃组织中分离到1株优势菌YDX-1,采用常规细... 2020年9月西藏自治区日喀则市亚东县某养殖基地的亚东鲑出现鳃病症状,主要临床症状为鳃盖打开、鳃丝充血、病鱼离群及呼吸困难。为探究此次疾病的病因,寻找其治疗方法,自患有鳃病症状的亚东鲑鳃组织中分离到1株优势菌YDX-1,采用常规细菌分析、16S rRNA基因序列比对分析和人工感染试验等方法对此株优势菌进行鉴定,同时查明菌株YDX-1的耐药性。试验结果表明,菌株YDX-1为革兰氏阴性菌,在16S rRNA基因序列比对构建的系统发育树中,其与杀鲑气单胞菌聚为一支,相似度达99%以上,结合该菌的形态学特征、生化特性和测序鉴定结果,综合鉴定菌株YDX-1为杀鲑气单胞菌。通过人工感染试验发现,杀鲑气单胞菌YDX-1对亚东鲑的致死率较高,且该菌具有传染性。药敏试验结果显示,杀鲑气单胞菌YDX-1对使用的6类(21种)药物普遍敏感,仅对复方新诺明中介。试验结果对西藏地区亚东鲑细菌性鳃病的防治具有指导意义。 展开更多
关键词 亚东鲑 细菌性鳃病 分离鉴定 杀鲑气单胞菌 药敏试验
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斑点叉尾■溃烂症的病原鉴定和致病特性 被引量:2
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作者 许晓牧 陶敏慧 +9 位作者 韩阳 徐婷婷 樊慧敏 唐庆权 彭开松 刘天龙 田纪景 佘锐萍 朱若林 鲍传和 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2020年第1期68-75,共8页
为探明斑点叉尾[鱼回](Ictalunes punctatus)溃烂症的病因,从4尾患鱼肝脾中分离纯化出4株优势菌株,并进行病原鉴定、毒力基因检测、动物回归感染和药敏试验。4株优势菌经鉴定并命名为杀鲑气单胞菌无色亚种(Aeromonas salmonicida subsp ... 为探明斑点叉尾[鱼回](Ictalunes punctatus)溃烂症的病因,从4尾患鱼肝脾中分离纯化出4株优势菌株,并进行病原鉴定、毒力基因检测、动物回归感染和药敏试验。4株优势菌经鉴定并命名为杀鲑气单胞菌无色亚种(Aeromonas salmonicida subsp achromogenes)X-G1,杀鲑气单胞菌杀鲑亚种(A.s subsp salmonicida)X-P2、X-P3和嗜水气单胞菌(A.hydrophila)X-P4。15℃时,杀鲑气单胞菌X-G1、X-P2和X-P3的世代时间(约14 min)均小于嗜水气单胞菌X-P4(约20 min);25℃时,杀鲑气单胞菌X-G1、X-P2和X-P3株的世代时间(约20 min)均大于嗜水气单胞菌X-P4株(约16 min)。X-G1株可检到弹性蛋白酶、溶血素和甘油磷脂胆固醇酰基转移酶等3种毒力基因;X-P2株仅可检到弹性蛋白酶1种毒力基因;X-P3株可检测到弹性蛋白酶、溶血素、细胞毒性肠毒素、丝氨酸蛋白酶、酯酶、气溶素和甘油磷脂胆固醇酰基转移酶等7种毒力基因;X-P4株可检测到鞭毛、弹性蛋白酶、气溶素、细胞毒性肠毒素、热不稳定性肠毒素、丝氨酸蛋白酶和溶血素等7种毒力基因。分离株X-G1、X-P2、X-P3和X-P4在15~17℃水温下腹腔注射攻毒的半数致死浓度(LD 50)依次为0.49×10^4、0.78×10^4、0.53×10^4、3.84×10^4 CFU/g;而在23~26℃水温下测得的LD 50依次为1.48×10^4、1.80×10^4、0.82×10^4、0.68×10^4 CFU/g。分离株混合感染比单一株感染均表现出更强的致死能力。分离菌株对多西环素、恩诺沙星、氟苯尼考均敏感,但因患病鱼不能摄食药饵而导致治疗失败。 展开更多
关键词 斑点叉尾[鱼回](Ictalunes punctatus) 杀鲑气单胞菌(aeromonas salmonicida) 嗜水气单胞菌(aeromonas hydrophila) 毒力基因 致病性 药敏试验
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大西洋鲑杀鲑气单胞菌的分离鉴定 被引量:20
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作者 曹成易 汪开毓 +1 位作者 王玲 黄小丽 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2009年第1期54-57,共4页
从皮肤溃烂的大西洋鲑(Salmon salar)肌肉、肝、肾分离到一致病性的菌株(AB080226),经人工感染实验证实其为该病的病原菌,研究了该菌的形态、生理生化特征并对其16SrDNA序列进行了在线Classifer和Blast分析。结果显示:该菌为革兰氏阴性... 从皮肤溃烂的大西洋鲑(Salmon salar)肌肉、肝、肾分离到一致病性的菌株(AB080226),经人工感染实验证实其为该病的病原菌,研究了该菌的形态、生理生化特征并对其16SrDNA序列进行了在线Classifer和Blast分析。结果显示:该菌为革兰氏阴性杆菌,葡萄糖氧化发酵阳性,氧化酶检测阳性,0%NaCl生长;能利用甘露醇,不具运动性,能发酵麦芽糖,葡萄糖产酸阳性,精氨酸双水解酶阳性,苯丙氨酸脱氨酶阴性;该菌属于气单胞菌属的细菌,在系统发育树上与杀鲑气单胞菌形成一个簇群,同源性高达99.9%以上。综合形态学、生理生化特征及16SrDNA序列鉴定其为杀鲑气单胞菌(Aeromonas salmonicida)。 展开更多
关键词 杀鲑气单胞菌(aeromonas salmonicida) 体表溃疡病 大西洋鲑(Salmon salar)
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患病细鳞鱼杀鲑气单胞菌的分离与鉴定 被引量:13
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作者 刘宁 时晓 +3 位作者 杜迎春 周杰珑 刘建宏 何宏轩 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2015年第1期88-92,共5页
从患病细鳞鱼(Brachymystax lenok)的病变组织处分离到1株致病菌,经过分离培养,生化鉴定,16 S rRNA序列分析和人工感染实验确定该病原菌为杀鲑气单胞菌无色亚种(Aeromonas salmonicida subsp.achromogenes)。采用20种药物进行药敏分析,... 从患病细鳞鱼(Brachymystax lenok)的病变组织处分离到1株致病菌,经过分离培养,生化鉴定,16 S rRNA序列分析和人工感染实验确定该病原菌为杀鲑气单胞菌无色亚种(Aeromonas salmonicida subsp.achromogenes)。采用20种药物进行药敏分析,结果显示:分离菌株对阿米卡星、哌拉西林、恩诺沙星等9种抗生素敏感;对环丙沙星、诺氟沙星等4种抗生素中度敏感;对卡那霉素、青霉素、氨苄西林等7种抗生素耐药。 展开更多
关键词 细鳞鱼(Brachymystax lenok) 杀鲑气单胞菌(aeromonas salmonicida) 分离 鉴定
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养殖刺参溃疡病杀鲑气单胞菌的分离、致病性及胞外产物特性分析 被引量:33
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作者 杨嘉龙 周丽 +2 位作者 邢婧 绳秀珍 战文斌 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期981-989,共9页
从患溃疡病的养殖刺参(Apostichopus japonicus)病灶处分离出1株优势菌H1,以浸浴、创伤浸浴、体腔注射和体壁肌肉注射等方式进行感染实验,证实菌株H1为养殖刺参溃疡病病原菌,并证明该菌通过体表创伤侵入的方式感染刺参,以创伤浸浴和体... 从患溃疡病的养殖刺参(Apostichopus japonicus)病灶处分离出1株优势菌H1,以浸浴、创伤浸浴、体腔注射和体壁肌肉注射等方式进行感染实验,证实菌株H1为养殖刺参溃疡病病原菌,并证明该菌通过体表创伤侵入的方式感染刺参,以创伤浸浴和体壁肌肉注射感染的LD50(半数致死量)分别为2.26×107CFU/尾和1.80×107CFU/尾。经形态学观察、生理生化特性分析和mini API系统鉴定,确定菌株H1为杀鲑气单胞菌杀日本鲑亚种(Aeromonas salmonicida ma-soucida)。提取菌株H1的胞外产物(ECP)进行致病性实验,结果表明ECP可导致刺参死亡,其对刺参的LD50为5.24μg蛋白/g体质量。H1-ECP具有酪蛋白酶、明胶蛋白酶、几丁质酶和淀粉酶活性,并具有溶血素活性;对底物偶氮酪蛋白(Azocasin)作用的酶比活力可达到674.5活力单位/mg蛋白,最适作用温度为50℃;对热不稳定,70℃作用30 min时,酪蛋白酶活性降到0;100℃作用30 min,ECP对刺参的毒性消失;ECP酶活可被10 mmol/L EDTA完全抑制,可被5 mmol/L PMSF抑制98.8%,Ca2+和Mg2+可使酶活性分别提高约9%和4%。结论认为,该病原菌通过体表创伤侵入方式感染宿主刺参,菌株H1胞外产物是其对刺参致病的因子之一。 展开更多
关键词 刺参 溃疡病 杀鲑气单胞菌 胞外产物 蛋白酶
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