Af116609基因对胃癌细胞系SGC7901/VCR耐药性的影响

目的研究Af116609基因转染胃癌耐药细胞系SGC7901/VCR后,对胃癌细胞耐药性的影响。方法采用RT-PCR法克隆Af116609基因,用Northernblot检测其差异表达,以基因转染技术调节其表达,通过体外药敏实验观察其对胃癌耐药表型的影响。结果从胃癌耐药细胞SGC7901/VCR中克隆到Af116609基因的CDS序列327bp,该序列与GenBank登录的一致。Northernblot结果显示,该基因在耐药细胞高表达。体外药敏实验发现,转染正义真核表达载体的药敏细胞中该基因上调,对长春新碱、5-氟脲嘧啶和阿糖胞苷的耐药性增加,而对阿霉素的抗性有损害,对氨甲喋呤的抗性无明显影响;转染反义真核表达载体的耐药细胞中该基因下调,对上述5种药物的抗性均减弱。结论Af116609基因与胃癌MDR表型相关,可作为逆转胃癌MDR的候选靶分子。

豌豆小叶突变基因(af)的遗传及其育种利用

以半无叶类型、普通类型豌豆为试验材料 ,对小叶突变基因、子叶颜色基因和初花节位基因的遗传距离进行了研究。结果表明 ,小叶突变体性状受单基因控制 ,呈完全隐性 ;小叶突变体基因af、子叶颜色基因i、初花节位基因lf表现为连锁遗传 ,且位于第一染色体 ;测得小叶突变体af基因和子叶颜色基因i之间的遗传距离为 6 .71个遗传单位 ,小叶突变体af基因和初花节位基因lf的遗传距离为 44 .44个遗传单位 ,3对基因之间的顺序为lf、i、af。af基因在育种上有重要的利用价值 ,利用af基因已培育出超高产、优质豌豆新品种宝峰 3号。

U2AF65蛋白表达水平影响基因UBQLN1的可变剪接

目的:研究U2AF65蛋白的表达水平对基因UBQLN1可变剪接的影响。方法:应用pSR-GFP/Neo载体构建2个U2AF65-siRNA干扰载体,转染293T细胞,通过Western印迹、QRT-PCR检测干扰效果,RT-PCR验证基因UBQLN1的可变剪接。结果:利用设计的U2AF65-siRNA能够干扰细胞中U2AF65的表达;RT-PCR结果显示U2AF65表达水平的下降促使UBQLN1第8外显子的跳跃增加。结论:U2AF65可以通过表达水平的变化参与调控基因UBQLN1的可变剪接。

急性髓系白血病患者U2AF1基因突变的临床特征及预后分析

目的:探讨U2AF1基因突变在急性髓系白血病(AML)患者中的发生率、临床特点和其对预后的影响。方法:选取161例AML患者,应用二代测序方法检测U2AF1基因突变情况并分析其临床特征和治疗预后的关系。结果:161例AML患者中,U2AF1基因突变率为3.73%。U2AF1基因突变组外周血白细胞数和血小板数较野生型组低。U2AF1基因突变组完全缓解率为66.67%,野生型组为55.48%,两者无统计学差异(P=0.70)。U2AF1基因野生型组和突变组的中位无事件生存期分别为未达到和133 d(P=0.03),中位总生存时间分别为未达到和210 d(P=0.01)。结论:在急性髓系白血病中,伴有U2AF1基因突变阳性患者的预后较野生型组差,这可能是急性髓系白血病预后不良的一个因素。

“豌豆‘af’基因研究及超高产、优质豌豆新品种宝峰东8选育”成果通过鉴定

河北科技师范学院完成的“豌豆‘af’基因研究及超高产、优质豌豆新品种宝峰东8选育”成果于2003年10月26日通过河北省教育厅组织的专家鉴定。 该项研究以普通型豌豆品种中豌6号为母本,法国新注册的半无叶型豌豆品种90-PE-10为父本杂交,对杂交后代用春、夏、冬一年三代选择培育法,历经多年育成了半无叶型高产、优质豌豆新品种宝峰东8。

豌豆小叶突变体基因(af)的定位

以半无叶类型、普通类型豌豆为试验材料,对小叶突变体基因位置与子叶颜色基因、初花节位基因的遗传距离进行了研究。结果表明:小叶突变体性状是受单基因控制的,呈完全隐性,小叶突变体基因af、子叶颜色基因i、初花前节位lf表现连锁遗传,且位于第一染色体,测得小叶突变体基因af和子叶颜色基因i之间的遗传距离为6.71个遗传单位,小叶突变体af基因和初花节位基因lf的遗传距离为37.73个遗传单位,三对基因之间的顺序为lf,af,i。

大葱AfCER1基因的克隆及表达分析

基于大葱RNA-seq转录组数据库中蜡质相关基因Af CER1的序列设计引物,利用RT-PCR(Reverse transcription-polymerase chain reaction)和RACE(Rapid amplification of c DNA ends)技术获得Af CER1(Allium fistulisum CER1)的全长c DNA序列,并通过生物信息学手段分析基因的序列;利用RT-PCR和Real-time PCR分析Af CER1基因在大葱野生型和突变型植株中的空间表达模式。结果表明,Af CER1基因全长为2 144 bp,包含一个1 857 bp完整的开放阅读框(ORF),编码618个氨基酸。蛋白序列比对分析表明,Af CER1与其他物种的CER1具有相似的结构域:脂肪酸羟化酶结构域和WAX2-C结构域。由RT-PCR的结果可知,Af CER1基因在大葱的根、叶鞘、叶片等部位均有表达,且在野生型和突变型植株中的表达量有差异。Real-time PCR分析表明,在大葱的根和叶鞘及刚见光的叶片中,Af CER1在突变型植株中的表达量相对野生型少;而在见光较多的叶片部位,Af CER1在突变型植株中的表达量却比野生型多。研究可为大葱蜡质合成的分子机制提供理论基础。

茄子SmU2AF^65基因的可变剪接

U2AF(U2 snRNP auxiliary factor)是参与前体mRNA剪接的重要辅助因子,在进化上具有较高保守性。文章根据茄子BAC 77N19(GenBank登录号:EF517791)的基因组序列信息和烟草NpU2AF65a和NpU2AF65b基因的全长cDNA序列,设计特异引物,经cDNA末端快速扩增法(RACE)获得了1986bp的茄子同源基因(SmU2AF65)全长cDNA,GenBank登录号为EU543263。序列分析表明该序列包含1665bp的可阅读框,编码554个氨基酸,在氨基酸序列的C末端有3个保守的RNA识别结构域RRM。RT-PCR分析表明,SmU2AF65基因在不同组织中均有表达,但是该基因通过可变剪接至少能够产生两个转录本,在根中产生与其他组织中不同的剪切子。

耐旱基因PC2300 AF1在寒地粳稻上的功能验证

对转入耐旱基因PC2300 AF1水稻的T1代和T2代材料进行干旱胁迫试验,验证寒地转基因水稻是否具有耐旱节水功能。结果表明:供试52份材料耐旱性不同,水稻有效穗、穗粒数、千粒质量均表现不同,与对照相比,有3份材料未结实,有20份材料产量高于对照,29份材料产量下降,不同材料间产量差异达到显著水平。

U2AF1基因突变的急性髓系白血病患者的临床特征及预后

目的观察U2AF1基因突变的成人急性髓系白血病(AML)患者的临床特征及预后。方法对2016年1月至2019年12月就诊于郑州大学第一附属医院的690例AML患者的病历资料进行回顾性分析。按U2AF1突变与否将患者分为U2AF1未突变组(652例)和U2AF1突变组(38例)。比较两组临床特征及预后。结果690例AML患者中,U2AF1突变率为5.5%,常合并ASXL1、NRAS、SETBP1等基因突变。与U2AF1未突变组相比,U2AF1突变组外周血白细胞计数(WBC)、骨髓原始细胞比率低,预后中等及不良染色体核型多见,+8核型较多(P<0.05)。在625例可评估疗效的AML患者中,单因素分析发现,U2AF1突变组中位总生存期(OS)、中位无进展生存期(PFS)较U2AF1未突变组短,完全缓解(CR)率、2 a OS率较U2AF1未突变组低(P<0.05)。与未突变组相比,U2AF1 S34F突变组CR率较低,中位OS较短(P<0.05);两者中位PFS比较,差异无统计学意义(P>0.05)。U2AF1 S34Y突变组中位PFS较未突变组短(P<0.05);两者CR率、中位OS比较,差异无统计学意义(P>0.05)。多因素分析发现,U2AF1突变是影响<60岁AML患者OS、PFS的独立危险因素,1~2个疗程内达CR、接受造血干细胞移植、CEBPA双突变是影响<60岁AML患者OS及PFS的有利因素(P<0.05)。结论U2AF1突变在AML患者中发生率低,常与其他基因突变共存,预后中等及不良染色体核型多见。不同突变位点的预后意义不同。U2AF1突变是年轻(<60岁)AML患者的预后不良因素。

AF0.3启动子调控的PNP/MeP-dR系统对AFP阳性肝癌细胞的特异杀伤作用

背景与目的:甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)启动子调控下的目的基因能在AFP阳性肝癌组织中特异性表达;嘌呤核苷磷酸化酶(Escherichiacolipurinenucleosidephosphorylase,PNP)/6-甲基嘌呤-2′-脱氧核糖核苷(6-methylpurine-2-deoxyriboside,MeP-dR)自杀基因系统具有强杀瘤效应。本研究旨在探讨AF0.3启动子调控下的PNP/MeP-dR系统对AFP阳性肝癌细胞的特异性杀伤作用。方法:构建甲胎蛋白启动子AF0.3调控下PNP基因表达载体pAF0.3/PNP,导入AFP阳性肝癌细胞HepG2和阴性的肝癌细胞株SMMC7721,利用G418筛选获得稳定转染PNP基因的HepG2/0.3-PNP及SMMC7721/0.3-PNP细胞。RT-PCR检测二者在细胞中的表达。台盼蓝拒染法检测细胞增殖效应,MTT法和流式细胞仪检测两株细胞对MeP-dR的敏感性及旁观者效应,高效液相色谱法(highperformanceliquidchromatography,HPLC)检测PNP基因产物活性。结果:不论有氧还是缺氧条件,HepG2/0.3-PNP对MeP-dR均较为敏感,SMMC7721/0.3-PNP则对MeP-dR完全不敏感。在任何一种条件下,HepG2/AF0.3-PNP在混合细胞中比例达25%后,就可致明显旁观者效应;而在同样条件下,SMMC7721/0.3-PNP不导致明显的旁观者效应。HPLC结果显示,pAF0.3/PNP在HepG2细胞中可以将MeP-dR转化为6-MP,但其在SMMC7721中则不具有转化活性。结论:AF0.3启动子调控下的PNP/MeP-dR系统对AFP阳性HepG2细胞有较好的杀伤作用。

TEL/AML1、BCR/ABL、E2A/PBX1、MLL/AF4阳性儿童急性淋巴细胞白血病的临床特点及预后

目的探讨儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)TEL/AML1、BCR/ABL、E2A/PBX1、MLL/AF4四种融合基因的表达及其临床诊治意义。方法用实时荧光定量PCR(RQ-PCR)方法检测TEL/AML1、BCR/ABL(p190和p210两种亚型)、E2A/PBX1、MLL/AF4四种融合基因在312例ALL患儿中的表达情况,并总结融合基因阳性患儿的临床和生物学特点、治疗反应及预后情况。结果 (1)融合基因阳性共120例,TEL/AML1阳性组72例(23.1%),BCR/ABL阳性组22例(7.1%),p190 16例(5.1%)、p210 6例(1.9%),E2A/PBX1阳性组18例(5.8%),MLL/AF4阳性组8例(2.6%)。(2)TEL/AML1阳性组诊断时WBC平均值为(18.02±6.45)×109/L,诱导化疗结束完全缓解率(CR)100%,随访期间无复发;BCR/ABL阳性组发病时年龄(9.40±3.55)岁,诱导化疗结束CR81.8%,强化治疗末仍有6例融合基因未转阴,随访中有8例(36.3%)复发,8例死亡;E2A/PBX1阳性组全部按高危标准给予化疗,诱导化疗结束CR88.9%,强化治疗期末仍有3例基因微量表达,随访中2例复发;MLL/AF4阳性组发病时WBC(38.41±9.30)×109/L,强化治疗期末仍有2例基因呈阳性,随访中均复发死亡。结论融合基因可作为ALL危险度分层、监测微小残留病、判断预后的重要指标之一。

糖心康对糖尿病大鼠心肌细胞凋亡促进与抑制因子基因表达的调控作用

目的探讨糖心康对糖尿病心肌损伤的保护作用及机理。方法采用STZ加高脂饮食造模。治疗组以中药糖心康灌胃,空白组及模型组以生理盐水灌胃,以基因芯片技术TUNEL法检测心肌细胞凋亡。结果模型组细胞凋亡较正常组发生率明显增加,两组比较差异非常显著(P<0.01),而糖心康组心肌凋亡率则下降,模型组大鼠Fas基因蛋白表达增强,与正常组比较差异非常显著(P<0.01),而糖心康组Fas基因表达减弱,与模型组比较差异显著(P<0.01),模型组Bcl-2表达减弱,而糖心康组Bcl-2表达较模型组增强,二者比较差异显著(P<0.01)。利用基因芯片技术在心肌基因表达谱中筛选出与细胞凋亡有关的促进与抑制因子基因主要有2个,即AFO41376,M75720。结论糖心康有抑制心肌细胞凋亡作用,可使Fas基因、AFD41376基因表达下调,使Bcl-2,M75720表达上调。这也是中药复方糖心康具有心肌损伤保护作用的机制之一。

BRAF V600E基因突变与细针穿刺细胞学对甲状腺乳头状癌诊断价值的Meta分析

目的系统评价BRAF V600E基因突变的检测与细针穿刺细胞学(fine needle aspiration cytology,FNAC)对甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)的诊断价值。方法计算机检索中国期刊全文数据库(CNKI)、万方数据库(WANFANG)、维普中文科技期刊数据库(VIP)、Pubmed、Embase、Cochrane图书馆,自2019年1月至2022年12月以病理组织诊断为“金标准”,对比分析BRAF V600E基因突变的检测与FNAC诊断PTC的诊断性试验文献,应用Review Manager 5.0、MetaDiSc软件进行Meta分析,并绘制汇总受试者工作特征(SROC)曲线,计算曲线下面积。结果最终纳入32篇文献共计7223枚甲状腺结节,BRAF V600E基因突变检测和FNAC诊断PTC合并敏感性分别为0.79(95%CI:0.78~0.80)和0.78(95%CI:0.77~0.79);特异性分别为0.96(95%CI:0.95~0.97)和0.90(95%CI:0.89~0.91);诊断比数比分别为64.87(95%CI:33.96~123.94)和22.55(95%CI:14.47~35.14);两种诊断方法联合的敏感性、特异性、诊断比数比分别为0.92(95%CI:0.91~0.93)、0.93(95%CI:0.92~0.94)和141.37(95%CI:85.30~234.31)。SROC曲线下面积分别为0.89、0.88和0.97。结论BRAF V600E基因突变的检测对于PTC的诊断具有较高的特异性,可以有效减少细胞学诊断意义不明确甲状腺结节患者的不必要手术比率,但是其较低的敏感性,限制了其在临床诊断中的单独应用。BRAF V600E基因突变检测联合FNAC应用于PTC的诊断,具有较高的敏感性和特异性,对PTC的术前诊断具有重要的临床意义。

CALM/AF10反义核酸对原代CALM/AF10融合转录白血病细胞的体外作用分析

目的 :确定 CALM和 AF1 0融合转录在原发性 t( 1 0 ;1 1 )转换的白血病形成和治疗中的作用。方法 :检测 5例原发性 t( 1 0 ;1 1 )转换的白血病患者 CAL M- AF1 0融合转录 ,检测 CALM/AF1 0硫代反义核酸对其白血病细胞体外化疗敏感性和凋亡的作用。结果 :RT-PCR在 5例原发性 t( 1 0 ;1 1 )转换的白血病患者中检测到 5种分子量大小的 AF1 0 - CALM融合转录和 4种分子量大小的 CAL M- AF1 0融合转录。原代 t( 1 0 ;1 1 )转换的白血病细胞对体外化疗敏感性较非 t( 1 0 ;1 1 )转换的显著低 ,而 AS- PS- ODNs增加了其体外化疗敏感性和凋亡率。5μM AS- PS- ODNs处理时有 4例阳性 ,1 0μM和 2 0μM AS- PS- ODNs处理时 5例全阳性 ,而单纯化疗药组和化疗药 + 1 0μM正义硫代核酸 ( S- PS- ODNs)组分别只有 3例。化疗药+ 1 0μM AS- PS- ODNs处理 48h、72 h、96h后 ,细胞凋亡指数分别显著高于单纯化疗药组和化疗药 + 1 0μM S- PS- ODNs组。而单纯化疗药组和化疗药 + 1 0μM S- PS- ODNs组间凋亡指数在对应时间无差别。结论 :CALM- AF1 0与 t( 1 0 ;1 1 )转换白血病的发生密切相关 ,且 t( 1 0 ;1 1 )转换的白血病患者预后较差。

乳腺癌细胞中E1AF、MMP-2、VEGF的表达及意义

目的探讨乳腺癌发生侵袭和转移的分子机制。方法应用免疫细胞化学技术检测雌激素受体阳性(ER+)乳腺癌细胞MCF-7和雌激素受体阴性(ER-)乳腺癌细胞MDA-MB-231及MDA-MB-435s中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、血管内皮生长因子(VEGF)表达,采用RT-PCR法检测细胞株中E1AF mRNA表达。结果 MDA-MB-231中E1AF mNA、MMP-2及VEGF表达水平均明显高于MCF-7和MDA-MB-435s,且E1AF表达与MMP-2、VEGF呈正相关。结论 MMP-2、VEGF与E1AF在肿瘤细胞侵袭和转移过程中发挥重要作用,其机制可能在转录水平调节基因表达,增加肿瘤侵袭性。E1AF可能是乳腺癌侵袭转移的重要因子。

骨髓增生异常综合征中U2AF1突变的研究进展

骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndromes,MDS)是一组起源于造血干细胞,以骨髓病态造血,高风险向急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)转化为特征的异质性髓系肿瘤。剪接体基因是MDS患者常见的突变靶点之一,这些突变在50%~60%的MDS患者中发生,其中RNA剪接体基因U2AF1能够影响MDS患者mRNA的异常剪接和造血系统。目前已有研究证明U2AF1突变是MDS的预后不良因素,故针对U2AF1突变的研究对于MDS患者具有较高的临床意义。文章总结了近年来U2AF1在MDS中的研究进展,就U2AF1突变所改变的剪切机制及其对MDS的影响做一综述。

鸭MSTN基因多种新剪接体的发现

为研究MSTN基因在鸭肌肉发生过程的作用,克隆MSTN基因测序验证后进行序列分析。结果表明:鸭MSTN基因至少存在MSTN-a、MSTN-b、MSTN-c、MSTN-d、MSTN-e、MSTN-f和MSTN-g 7种剪接体,其中MSTN-e、MSTN-f和MSTN-g为3种新发现的剪接体,剪接因子U2AF35可能参与MSTN基因的选择性剪接。

E1AF基因对大肠癌细胞侵袭力的影响及其作用机制

E1AF基因是ETS（E26 transforming specific or E twenty six specific）癌基因家族的新成员，是鼠PEA3癌基因的同源类似物。以往研究发现，ElAF苯因对恶性肿瘤的进展有促进作用，其作用可能与基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）有关。本研究的目的在于阐明E1AF基因对大肠癌侵袭能力的影响，并同时研究E1AF对MMP。2和MMP-7的调控，以明确E1AF基因促进大肠癌侵袭能力的机制。