非洲猪瘟病毒感染与致病机制的研究进展

非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的猪的一种高度接触性传染病,对家猪致死率可达100%,严重威胁我国及世界养猪业可持续发展,目前尚无确实安全有效的预防用疫苗。本文总结了ASFV的流行历史与态势、生物学特性与复制、感染与致病机制、与靶细胞的相互作用以及适应性免疫应答,并讨论了相关预防与控制措施,以期为我国ASFV研究和防控提供帮助。

非洲猪瘟病毒O174L蛋白的真核表达载体构建及分子特征分析

为分析非洲猪瘟病毒O174L基因,通过同源重组方式将O174L基因连接至p RK5M-C-2×Strep载体,构建重组质粒,经PCR扩增和测序鉴定正确后,将重组质粒转染至猪小肠上皮细胞系(porcine intestinal columnar epithelial cells,IPEC-J2)中,通过免疫荧光和Western blot检测O174L蛋白的表达情况。PCR及测序结果显示,p RK5M-C-2×Strep-O174L重组质粒构建成功。免疫荧光和Western blot检测结果显示,O174L蛋白能够在IPEC-J2细胞中稳定表达。生物信息学分析结果显示,基于O174L基因和B646L(p72)基因序列构建各分离毒株的2个系统发育树间排列高度相似。来自中国的16株分离株中,O174L基因序列的相似性高达96.76%~100.00%。其中,与中国爆发的其他Ⅱ型分离株相比,China/2018/Anhui XCGQ在O174L蛋白的第67、75及110位氨基酸存在差异,GZ201801在第110位氨基酸存在差异。Ⅰ型分离株SD/DY-I/2021和HeN/ZZ-P1/2021的O174L蛋白的氨基酸序列分别在第13、73、93、95、113和114位上与其他中国Ⅱ型分离株存在差异。O174L蛋白为稳定的亲水蛋白,没有信号肽和跨膜区;其二级结构由α螺旋、β折叠和无规则卷曲组成,三级结构预测结果与二级结构预测相符。以上结果为深入研究ASFV O174L蛋白与宿主间的相互作用和遗传进化提供了基础。

非洲猪瘟病毒入胞过程相关蛋白及分子机制的研究进展

非洲猪瘟病毒(ASFV)是非洲猪瘟的病原,可引发家猪和野猪急性、出血性死亡,目前尚无有效的疫苗和抗病毒药物。ASFV是囊膜病毒,其囊膜蛋白的结构和功能可能是影响病毒入侵和细胞嗜性的重要因素。病毒入胞是病毒感染细胞的第一步,通常是通过细胞表面特定的分子与病毒蛋白相结合吸附于宿主细胞表面,以ASFV入胞过程的病毒蛋白或宿主因子为靶点或可有效抑制ASFV的复制。从ASFV入胞过程中起重要作用的囊膜蛋白出发,了解ASFV的入胞分子机制,为ASFV入胞深入研究以及治疗性药物和疫苗的研发提供参考。

非洲猪瘟病毒的分子生物学研究进展

非洲猪瘟是一类动物传染病,致死率高达100%,在我国虽未发现该病,但一旦发生会给畜牧养殖业带来巨大经济损失。文中概述了非洲猪瘟病毒的分类、形态、基因组特征、主要结构蛋白,以及分子生物学诊断技术的研究进展。为进一步研究该病毒的复制机理、毒力、致病机理及疫苗的开发提供参考依据。

非洲猪瘟病毒RPA等温检测方法的建立

为建立一种简单、快速的非洲猪瘟病毒（ASFV）分子检测方法,基于ASFV P72基因保守序列,设计并合成引物,建立了一种ASFV重组酶聚合酶扩增（RPA）等温检测方法。结果表明,所建立的RPA方法在38℃水浴锅中恒温反应30 min,即可实现对目的片段的有效扩增;以包含ASFV P72基因的ORF质粒为模板,RPA的检测限达到10～2 copies,同世界动物卫生组织（OIE）推荐的实时荧光PCR方法检测限一致,但比OIE推荐方法的检测限高10倍;RPA仅特异性扩增ASFV P72基因,对FMDV、CSFV、PRRSV、PRV和PCV-2基因组c DNA或DNA没有扩增。本研究所建立的RPA方法操作简单、反应快速、检测成本低、结果确实可靠,为非洲猪瘟的一线防控提供了一种新的、可靠的技术支持。

非洲猪瘟病毒的分子病原学及致病机理研究进展

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起的一种烈性传染病,具有急性、高热、高病死率等特征,主要暴发于非洲、东欧国家、俄罗斯及高加索地区。目前,该病缺乏有效的疫苗和治疗方法,给病情爆发地区的养猪业造成严重的影响。ASFV的主要靶细胞是网状内皮细胞和单核—巨噬细胞,造成细胞凋亡,影响宿主的免疫系统,进而表现出相应的疫病特征。ASFV具有基因组较大、基因型较多且易变异等特征。文章主要从分子病原学和致病机理方面对ASFV的研究情况进行综述,为ASF的防控提供理论依据。

非洲猪瘟病毒TaqMan探针法荧光定量PCR检测方法建立

为建立一种快速、准确的非洲猪瘟病毒(ASFV)分子检测方法,以2018年8月分离的SY18毒株P72基因序列(GenBank登录号:MH713612.1)为参考毒株,人工合成质粒标准品,命名为pcDNA3-P72,基于该毒株P72基因序列,在1627~1876 bp处设计一对特异性引物和TaqMan探针,优化反应体系及条件,本研究成功建立了基于P72基因的TaqMan探针qPCR方法,并与OIE的特异性引物和TaqMan探针进行灵敏度、稳定性和特异性比较.结果显示:本研究建立的qPCR检测方法,标准曲线线性关系良好,R^2值可达到0.9932,灵敏性最低能检测到10 copies/μL,与OIE引物扩增灵敏度相当,比普通PCR方法高100倍.该方法重复性良好,批内和批间变异系数均小于1%.这一方法为我国非洲猪瘟疫情的快速确诊提供了必要的分子诊断工具.

非洲猪瘟病毒检测方法的研究进展

非洲猪瘟是一种影响各个品种与年龄段猪的毁灭性传染病,其特征包括高烧,皮肤发绀,淋巴严重出血,死亡率接近100%,被世界动物卫生组织列为必须及时通报的动物疫病,而我国也将其列为主要的外来动物疾病。自20世纪90年代被报道流行于非洲撒哈拉沙漠以南的国家以来,非洲猪瘟逐步流行于欧洲、南美、俄罗斯高加索地区,并在全球各地爆发,对全球养猪业构成了巨大威胁,造成了巨额经济损失。非洲猪瘟是由双链DNA虫媒病毒——非洲猪瘟病毒引起的,它是非洲猪瘟病毒科非洲猪瘟病毒属的唯一成员,具有复杂的二十面体结构,直径约200 nm。目前来说,还没有针对于非洲猪瘟病毒的特效药和疫苗,其主要的防控策略依靠卫生措施的实施以及对感染或暴露动物的屠宰。因此,非洲猪瘟病毒的检测与早期诊断对于疫情确认和控制至关重要。该文根据非洲猪瘟病毒的检测原理将其检测方法分为病毒分离方法、免疫学检测方法与分子学检测方法,免疫学方法可细分为免疫荧光试验、免疫印迹试验、酶联免疫吸附试验、免疫层析试纸及其他免疫学检测方法,分子学检测方法可细分为聚合酶链式反应、等温扩增技术、CRISPR(成簇规律间隔的短回文重复序列)/Cas系统及其他分子学检测方法。该文对这些方法的原理和特点进行介绍,并对非洲猪瘟病毒检测的研究进展进行综述。因这些方法的检测能力与适用场景尚存在一定不足,故非洲猪瘟病毒检测方法的未来发展方向为在保证灵敏度和特异性的情况下,提高检测限与现场即时诊断的应用能力,研究集中于低成本、工业化、高通量、高性能等方向。

猪瘟病毒分子生物学诊断的研究进展

猪瘟是由猪瘟病毒引起的猪的急性、热性、高度接触性传染病,严重危害我国养猪业。尽管中国很早就研制成功了猪瘟兔化弱毒疫苗,但近年来猪瘟的流行和发病特点发生了很大的变化,很多地区和猪场不断出现非典型猪瘟、温和型猪瘟,给该病的诊断带来了困难。近年来,猪瘟病毒分子生物学诊断方法的研究进展迅速,为猪瘟的快速、准确诊断起到了重要的作用。从聚合酶链式反应技术、核酸探针技术、DNA芯片技术等方面对猪瘟病毒的分子生物学诊断方法进行了综述。

非洲猪瘟病毒检测方法研究进展

非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起猪的一种以高热、皮肤和内脏器官出血、高病死率为主要特征的急性、热性、高度致死性传染病。论文就非洲猪瘟病毒的PCR、荧光定量PCR、LAMP、ELISA等检测方法的最新研究进展及优缺点进行论述,旨在为非洲猪瘟病毒的检测提供技术参考。

非洲猪瘟病毒调控宿主免疫应答机制研究进展

非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)编码多种免疫逃逸蛋白以拮抗宿主免疫应答,造成病毒在宿主体内持续感染。非洲猪瘟(African swine fever,ASF)疫苗研发面临的主要困难是对ASFV的毒力相关基因、致病及免疫调控机制知之甚少。对ASFV入侵机体后的免疫调控机制进行总结,从天然免疫和获得性免疫两个角度分析ASFV免疫调控蛋白的功能:调控机体内炎症与干扰素产生,调控抗原呈递与细胞免疫;并探讨潜在的ASFV新型疫苗候选:重组NH/P68弱毒株、融合蛋白ZPMT、基因缺失毒株ASFV-ΔECM3等。为ASFV致病机制研究和新型疫苗研发提供参考。

猪瘟的分子生物学检测技术研究进展

猪瘟是由猪瘟病毒引起的高致死率的烈性传染病。针对猪瘟近年来的发病特征,分子生物学检测技术在实验室诊断中发挥了重要作用。对几种主要的猪瘟分子生物学检测技术进行了综述,为快速、准确、高通量地检测猪瘟病毒提供参考。

非洲猪瘟检测方法研究进展

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染而引发的一种发病快、病程短、高病死率的接触性猪传染病。目前缺乏成熟有效的治疗药物和预防疫苗,早期快速有效的检测方法有利于ASF的诊断防控。文章总结了近年来国内外针对非洲猪瘟病毒分离和猪红细胞吸附检测、分子生物学检测、血清学检测方法,以期为ASF的有效诊断提供理论参考。

非洲猪瘟病毒p72和CD2v双基因实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

为了建立一种快速、准确、敏感的非洲猪瘟病毒p72和CD2v基因双重荧光定量PCR方法,根据GenBank公布的ASFV基因序列,针对p72基因保守区域和CD2v基因保守区域分别设计特异性引物和探针,并且对反应条件进行了优化。结果显示,该方法对ASFV p72、CD2v基因呈现特异性扩增,对猪瘟病毒(CSFV)、口蹄疫病毒(FMDV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪肺炎支原体均无扩增。建立的方法可检出低至7.3 copies/μL~24.5 copies/μL的ASFV核酸。用建立的方法检测2017年以前保存的105份来自国内猪场的血清和组织样本,105份样品均无ASFV核酸扩增。用该方法检测5份ASFV灭活参考样品,符合率为100%。说明建立的方法快速、敏感、准确,可用于ASFV的分子诊断和监测。

非洲猪瘟病毒p72蛋白可溶性表达及鉴定

为获得可溶性的非洲猪瘟病毒(ASFV)p72蛋白,将重组质粒pColdⅠ-p72分别与5种分子伴侣质粒进行融合表达,SDS-PAGE鉴定表达产物;以重组蛋白His-p72免疫小鼠制备多克隆抗体,通过Western blot和间接免疫荧光方法鉴定多克隆抗体与真核表达蛋白的免疫反应性。结果显示,重组蛋白His-p72与伴侣蛋白pG-Tf2或pTf16共表达后,实现了可溶性表达。以可溶性His-p72蛋白免疫小鼠后,获得His-p72多克隆抗体,抗体效价达到1∶512000;Western blot和间接免疫荧光的试验结果显示多抗血清可特异性识别真核表达的p72蛋白。说明利用分子伴侣融合表达的ASFV p72可溶性蛋白具有较好的免疫反应性,为抗ASFV药物的研发提供了候选蛋白。

非洲猪瘟病毒拮抗宿主抗病毒免疫分子机制研究进展

非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)是核质巨DNA病毒,它引起的非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是一种高度接触性、致死性传染病。ASF的出现给全球养猪业和整个市场经济带来了巨大威胁和挑战。目前尚无针对ASF的有效疫苗,而对ASFV感染机制和免疫逃逸机制认识的不足是制约商品化疫苗研究的主要因素。本文对ASFV的结构和生命周期进行了总结,并从先天性免疫反应、适应性免疫反应和程序性细胞死亡3个方面,对ASFV调控宿主抗病毒反应的分子机制进行了归纳,以期为ASFV致病机制研究和新型疫苗靶点研究提供参考。

非洲猪瘟病毒及其分子检测技术研究进展

由于非洲猪瘟病毒(ASFV)的感染机制极为复杂,基因型多,尚未研制出有效的疫苗进行防控,早期的ASFV检测是ASF防控的重点。对ASFV分子检测技术研究进展进行综述,分析常规PCR、荧光定量PCR、数字PCR、LAMP、RRA检测技术的研究进展和优缺点,为更好地开展ASFV快速检测技术研究提供参考。

非洲猪瘟病毒分子生物学检测方法研究进展

非洲猪瘟病毒感染猪后可引起猪高热、皮肤和内脏器官出血和高死亡率,死亡率可达100%。自2018年8月非洲猪瘟在中国首次报道以来,迅速席卷全国,给猪业造成严重的经济损失。文章综述6种非洲猪瘟病毒分子生物学检测方法,主要包括核酸探针、纳米PCR、荧光定量PCR、微滴数字PCR、环介导等温扩增技术、重组聚合酶扩增技术等。

35株非洲猪瘟病毒全基因组序列的系统生物学分析

非洲猪瘟(African Swine Fever,ASF)源于非洲猪瘟病毒(African Swine Fever Virus,ASFV)感染所引起的烈性传染病,主要是以蜱和野猪为天然宿主。ASFV感染能够导致家猪及野猪直接死亡,死亡率近乎100%。目前在非洲、欧洲、亚洲等地区均出现大面积爆发,却尚未出现对该病毒进行预防的商业化疫苗。因此,需要对病毒基因组信息有更深入的了解。通过对不同地区发生的ASFV全基因组进行多序列比对、系统进化树构建、保守区域检测等,获得与ASFV毒力、进化等相关的基因片段,并研究这些基因片段在不同区域的病毒株中的关系。结果表明:Ⅶ与Ⅱ基因型相比较,后者出现很多大片段基因序列的增加,这些增加的片段主要出现在V110、360、505/530多基因家族中。其中,对多基因家族中MGF 505/5307R、MGF 3601L基因研究分析表明,不同基因型之间由于这些基因的差异影响巨噬细胞的存活能力、病毒复制强弱与病毒变异和进化有关,结果为研究病毒进化及未来病毒疫苗研发提供新的方向。

云南省文山壮族苗族自治州首例非洲猪瘟的初步诊断

2019年5月23日,云南省文山壮族苗族自治州砚山县维摩乡散养户饲养的猪发生疑似非洲猪瘟疫情。文山州动物疫病预防控制中心兽医分子生物学实验室运用PCR核酸检测技术结合临床剖检,对该起疫情进行了初步诊断,并经云南省动物疫病预防控制中心兽医实验室复核,确诊为非洲猪瘟病毒感染。此次非洲猪瘟的临床诊断与PCR检测,为基层实验室非洲猪瘟诊断积累了经验,对非洲猪瘟的早发现、早控制具有积极意义。