禽流感间接ELISA诊断试剂盒的研制及应用

将成熟的禽流感间接ELISA快速诊断技术试剂盒化 ,确定其外包装、规格、盒内组成 ,对盒内各组分的性状、保存、质量控制以及诊断试剂盒的特异性、敏感性、可重复性、符合率、与国外同类产品比较、保存期等进行了全面、详细的研究。试剂盒由 9种成套试剂组成 ,在 - 15℃至 - 2 0℃保存 5 40天各项性能仍然很好。该试剂盒与进口禽流感间接ELISA诊断试剂盒对同样血清样品检测 ,符合率为 10 0 %。拥有该试剂盒 ,只需准备生理盐水 ,即可对大量血清样品同时进行检测 ,操作简单方便、结果特异性强、敏感性高、稳定、快速 ,更适合于禽流感免疫抗体的监测及现地疫病诊断等需要。先后制备诊断试剂盒 16个批次 ,已成功应用于我国省、市兽医站、兽医研究所、农业院校、农科院、农业公司、口岸检疫部门及鸡场等各领域对禽流感的定性诊断、流行病学调查、免疫抗体监测等。

鸡肿瘤病快速鉴别诊断试剂盒的研制及其应用

建立了快速鉴别诊断鸡肿瘤病的PCR技术 ,研制鸡肿瘤病快速鉴别诊断试剂盒。应用该试剂盒在两年多时间里 ,对来源于广西养鸡业发达地区的 13 9个鸡群共 5 0 5只病、死鸡的 15 70份肿瘤及可疑肿瘤组织病料进行了检测 ,马立克氏病、网状内皮增生症和禽白血病的阳性率分别为 74.0 6%、11.49%和 6.73 % ,肿瘤病的混合发生率为 16.83 %。结果表明 ,应用PCR技术建立的鸡肿瘤病快速鉴别诊断试剂盒具有操作简便快捷、结果准确可靠、保存方便等特点 ,不仅适用于临床肿瘤病的鉴别诊断 。

T SPOT-TB试剂盒在结核病临床诊断中的应用价值

目的:研究TSPOT-TB试剂盒在结核病临床诊断中的应用价值。方法:应用TSPOT-TB试剂盒检测结核感染组(包括26例临床已确诊结核病患者和4例PPD强阳性志愿者)和非结核感染组(包括20例PPD阴性的非结核病患者和10例PPD阴性的健康对照者)外周血单个核细胞,观察斑点形成细胞(SFC)的数量。结果:30例结核感染组中,28例(93.3%)TSPOT-TB检测阳性,其中4例PPD强阳性志愿者检测均为阳性;30例非结核感染组中,仅1例(3.4%)TSPOT-TB检测阳性。TSPOT-TB阳性组的SFC显著高于TSPOT-TB阴性组。在29例TSPOT-TB阳性者中,31.0%检测孔A(ESAT-6抗原)和B(CFP-10抗原)均阳性,44.8%仅检测孔A阳性,24.2%仅检测孔B阳性。结论:TSPOT-TB试剂盒在检测结核感染、辅助结核病诊断方面具有很高的应用价值。

用二种ELISA法进行烟草花叶病快速诊断试剂盒的研究

以改良的间接ELISA和DotELISA为基础,研制了烟草花叶病毒(TMV)快速诊断试剂盒,其中抗体最佳工作浓度为1∶5000.通过模拟田间试验条件进行检测,并与电子显微技术相互印证,经过对云南省峨山?江川等县样品的测定,结果表明试剂盒具有敏感?特异?快捷3个特点,准确率分别为100%(间接ELISA)和98.7%(DotELISA).

Parasight-F试剂盒快速诊断云南恶性疟

评价Parasight F试剂盒快速诊断云南恶性疟的现场应用价值。用Parasight F试剂盒检测 187例疑似恶性疟病人血样 ,与镜检法进行比较。检出恶性疟 (包括 4例混合感染 )敏感度和特异度分别为 87 5 %和 98 7% ;其敏感度与原虫密度呈正相关 (趋势卡方 χ2 =34 5 4,P <0 0 1) ;检测 10例间日疟患者血样无交叉反应。培训每个卫生技术人员 ,可在 30min内学会。试剂盒在常温下保存一年以上仍稳定。整个测试过程可在 7～ 10min内完成。Parasight F试剂盒诊断恶性疟快速、方便 ,适合于医院门诊及个体诊所快速诊断恶性疟患者。

鸡传染性鼻炎单抗阻断ELISA诊断试剂盒的研究

本研究在单抗阻断ELISA方法的基础上成功地建立了鸡传染性鼻炎阻断ELISA诊断试剂盒，结果证明，本盒具有较子的敏感性、特异性和重复性，在对临床病鸡、人工感染鸡和免疫鸡的检测中，A型检出率可高达75％-90％，C型的检出率也可达到60％。试剂盒在37℃可保存7天以上，4℃可保存10个月，-20℃可保存1年以上。是一种适合推广应用的良好的鸡传染生鼻炎诊断产品。

鱼类致病性气单胞菌诊断试剂盒的研制

在 Dot-ELISA检测胞外蛋白酶 ( ECPase)的基础上 ,研制了鱼类致病性气单胞菌诊断试剂盒。该试剂盒可检出气单胞菌培养上清中的 ECPase,检出的最低水平为 78μg/L;气单胞菌属的细菌均呈现阳性反应 ,与迟缓爱德华菌、鳗弧菌、鲁氏耶氏菌、荧光假单胞菌等 4种常见鱼类致病菌不发生交叉反应 ,仅与大肠杆菌有轻微交叉反应。反应试剂盒和脱脂奶平板法检测 2 3株参考株和 1 2 4株样本 ,两者符合率分别为 73.9%和87.2 %。以上试验批内、批外重复 3次结果一致。试剂盒可在 2 4 h内报告结果 ,保存期达 1 a,具有敏感、特异、实用的优点 。

鸡传染性法氏囊病间接ELISA诊断试剂盒的研制及初步应用

采用 vero细胞增殖的 IBDV抗原建立了间接 EL ISA,用于定量检测 IBDV抗体。对该方法进行了标准化研究 ,确立了该方法的最佳工作条件。在此基础上研制了相应的诊断试剂盒 ,并对盒内各组分的性状、保存、质量控制以及诊断试剂盒的特异性、敏感性、可重复性、符合率、与国外同类产品的比较、保存期等进行了全面、详细的研究。结果表明 ,研制的试剂盒在 - 2 0℃保存至 6个月时各项性能都很好。该试剂盒与进口试剂盒对同样血清样品检测 ,符合率为86 .7%。间接 EL ISA试剂盒与琼扩试验的符合率为 92 .5 %。该试剂盒可对大量血清样品进行检测 ,操作简单方便、结果特异性强、敏感性高、快速 ,更适合于大型鸡场 IBD免疫抗体水平的监测及现地疫病诊断等需要。

犬细小病毒的PCR诊断试剂盒的研制

目的 建立检测犬细小病毒的PCR诊断试剂盒。方法 通过在犬细小病毒 (CPV)的基因组中设计的特异性寡核苷酸引物 ,利用PCR技术研制犬细小病毒的PCR诊断试剂盒。结果 在特定的反应条件下 ,使用该试剂盒能特异地扩增含有犬细小病毒的样品 ,且能检出痕量 (10ng)的犬细小病毒DNA ,被测粪样只需进行简单煮沸就能进行PCR反应 ,该试剂盒能在常温下保存 1周以上、4℃保存 1年以上。同血凝试验 (HA〕及单克隆抗体ELISA方法比较 ,对 6 6份样品进行检测 ,显示该PCR试剂盒具有特异、灵敏等优点。结论 成功研制了犬细小病毒的PCR诊断试剂盒 。

禽流感病毒夹心ELISA诊断试剂盒的研制及应用

将成熟的禽流感病毒(AIV)夹心ELISA快速检测方法组装成诊断试剂盒.试剂盒由1～11号试剂、一块酶标板和一份说明书组成.对试剂盒内各组份进行了特异性、敏感性、重复性及保存期的测定.结果表明,在-10℃下能保存6个月,而且特异性强、敏感性高、重复性好,操作简单、方便,能快速、准确地检测出样品中是否带有AIV抗原.先后制备了8个批次的诊断试剂盒,于湖北、安徽及河南等地的养禽场、兽医站、农科院、农业院校等化验室应用,取得了良好的效果.

旋毛虫基因重组抗原快速ELISA诊断试剂盒的研究

用旋毛虫基因重组抗原 (TSRA)建立了诊断猪旋毛虫病的快速ELISA诊断试剂盒。用TSRA和旋毛虫肌幼虫排泄 -分泌抗原 (ES)分别对 12份人工感染旋毛虫病猪血清进行快速ELISA检测 ,阳性率为 10 0 %。在猪旋毛虫病发病区随机采集 10 3份血清和肉样 ,分别用TSRA和ES作抗原对血清进行快速ELISA检测 ,结果显示 ,它们与肌肉消化法的诊断符合率分别为95 12 %和 96 3%。研究证明 ,用TSRA组装的诊断试剂盒具有良好的灵敏性、特异性和重复性。

新型HCVEIA诊断试剂盒的研制

丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因组结构区核壳蛋白（Ｃ）区抗原、膜蛋白Ｅ１和Ｅ２区抗原，以及非结构区ＮＳ３－ＮＳ５区抗原的区段，已经在原核细胞中获得有效的表达。同时，相应区段中的优势抗原表位肽也经化学合成法大规模地制备。ＨＣＶ基因组上各区段抗原性的分析发现，由Ｃ区和ＮＳ３区分别编码的Ｃ抗原和Ｃ３３ｃ抗原是ＨＣＶ基因组上两个优势抗原区段。其相应的抗体出现早（感染后６周可检出抗Ｃ３３ｃ抗体），阳转率高（约９９％阳性检出率），特异性和重复性均优于其它区段抗原。以中国人ＨＣＶ的Ｃ３３ｃ重组蛋白和分支状合成肽ＭＡＰ－Ｃ－１９为复合抗原，研制了适合我国抗ＨＣＶ抗体检测的新型丙型肝炎病毒酶免疫测定（ＨＣＶＥＬＡ）诊断试剂盒。它同当代美国Ａｂｂｏｔｔ／ＵＢＩＨＣＶＥＬＡ诊断试剂的符合率约９８％，同加拿大ＹＥＳ公司ＨＣＶＥＩＡ诊断试剂的符合率约９７．８％，阳性检出率提高了约２％，３次重复性达１００％，表明其特异性、敏感性和重复性均达到了当代第二代ＪＣＶＥＬＡ诊断试剂的水平。我国人群中抗ＨＣＶ抗体的分布情况为：正常人群的检出率１％－２％；外科类住院病人检出率约２８．８％；肝炎患者抗ＨＣＶ阳性率为３４．４％，慢活肝、肝硬化和重症肝炎患者?

猪戊型肝炎ELISA诊断试剂盒的研制及应用

本试验旨在建立有效的针对猪戊型肝炎病毒(HEV)的诊断技术及试剂盒。作者建立了应用猪HEVORF3筛选出来的一段序列合成肽swHEV11检测HEV血清抗体的间接ELISA诊断方法,确定的抗原最适包被浓度为3μg·mL-1;血清最适稀释度为1∶10,作用时间为30min;酶标抗体最适稀释度为1∶12000,作用时间为60min。用HEV ORF3合成肽swHEV11研制的猪HEV ELISA诊断试剂盒,与北京万泰试剂盒检测比较,符合率为73.4%(205/279),灵敏度和特异性分别为73.3%(200/273)和83.3%(5/6)。该试剂盒批内重复的变异系数<10%,批间变异系数<20%。结果表明,该方法的建立和所研制的猪戊型肝炎诊断试剂盒灵敏度高,特异性强,稳定性合格,为猪戊型肝炎病毒抗体的检测和流行病学的调查提供了一种简便快速的血清学诊断方法。

三种结核抗体试剂盒诊断女性生殖器结核的评价

女性生殖器结核又称盆腔结核,近年来有增长的趋势[1,2],且多伴有不孕.由于宫腔分泌物及经血涂片抗酸染色和结核菌培养阳性率低,使临床诊断有一定困难.而分子生物学技术如PCR所需设备复杂,费用昂贵,假阳性率高.

安氏隐孢子虫PCR诊断试剂盒的初步应用

运用首次研制的安氏隐孢子虫PCR诊断试剂盒对广东省4个奶牛场和河南省1个奶牛场共234份样品,进行了安氏隐孢子虫感染的实际检测,并与常规检测方法饱和蔗糖漂浮法、改良抗酸染色法进行了比较。本试剂盒的检出率比常规检测方法提高了2%～13%,显示该试剂盒具有特异、敏感等优点,对开展隐孢子虫病的鉴别诊断和分子流行病学调查具有重要的应用价值。

鸡传染性法氏囊病单抗快速诊断试剂盒的研制及初步应用

以感染传染性法氏囊病病毒 ( IBDV)的鸡法氏囊组织制备免疫抗原 ,免疫 BALB/c系小鼠 ,取其脾细胞与 NS0浆细胞进行细胞融合 ;以 AC-ELISA筛选阳性细胞克隆 ,经 3次有限稀释克隆化及鉴定 ,获得 2株识别 IBDV不同抗原决定簇的高亲和力单克隆抗体株。以该 2株单克隆抗体制备快速诊断试剂 ,组装了鸡传染性法氏囊病快速诊断试剂盒。该试剂盒由若干 4 0孔酶标板 ,1号酶标液 ( HRP标记 IBDV单抗 )、2号洗涤液、3号显色液 ( TMD显色底物 )、4号显色液 (供氢体 )等反应液 ,0 .0 1 mol/L PBS( p H7.2 )阴性对照、IBDV阳性对照 (提取的 IBDV蛋白 )组成 ,并对试剂盒特异性、敏感性、重复性及稳定性等进行了鉴定。应用该快速诊断试剂盒对来源于不同地区的临床诊断疑似 IBD的法氏囊病料各 2 0份进行了检测 ,并与琼扩试验、常规ELISA检测结果作了比较 ,结果表明 ,该快速诊断试剂盒的检测结果与常规 ELISA的检测结果相似 ,操作程序简便 ,可在 1 0～ 1 5min内完成 。

快速诊断人畜旋毛虫病ELISA试剂盒的研制及应用

本研究建立了快速诊断人畜旋毛虫病的ELISA试剂盒,该试剂盒与常规ELISA平行检测107例旋毛虫病人血清,阳性率分别为99.07％和97.19％;检测10份感染旋毛虫的病猪血清、5份病豚鼠血清、4份病犬血清、5份病兔血清,除病兔的阳性率两法均为80％外,其余两法均为100％。实验证明该试剂盒具有较好的特异性和重复性,已在全国人体寄生虫病分布调查中推广应用。

鸡肿瘤病快速鉴别诊断试剂盒及其应用研究

建立快速鉴别诊断鸡肿瘤病的聚合酶链式反应技术并研制成配套的诊断试剂盒。应用该试剂盒及其配套的操作程序 ,在 2 0 0 0年 5月～ 2 0 0 4年 7月检测来源于广西 6个地区 2 0 2个禽群共 6 85羽病、死鸡和火鸡的肿瘤和可疑肿瘤组织病料以及来源于安徽省不同地区的 4 6个鸡群的疑似肿瘤病、死鸡 30 5羽 ;同时 ,检测广西、安徽、山东、河南主要养鸡地区临床表现为生长缓慢、消瘦、贫血、疫苗免疫应答不佳、发病率和死亡率偏高等疑为免疫抑制状态的 15 4个鸡群中的 6 4 4羽病、死鸡。结果 ,在肿瘤和可疑肿瘤病料的检测中 ,马立克氏病、网状内皮增生症和禽白血病的阳性率分别为 5 7.17%、11.84 %和 5 .4 7% ,其中二重、三重混合感染总检测率为 16 .2 5 %。在疑似免疫抑制性疾病病料的检测中 ,3种鸡肿瘤病的阳性率分别为 2 8.2 6 %、7.4 5 %和 4 .19% ,其中二重、三重肿瘤病以及与其它免疫抑制性疾病的混合感染率达 35 .92 %。建立的鸡肿瘤病快速鉴别诊断程序及试剂盒 ,操作简便快捷、结果准确可靠、保存方便、检测成本低 ,适用于临床鸡肿瘤病的鉴别诊断 ,对鸡肿瘤病的流行病学调查、免疫抑制病检测以及兽医检疫有重要价值。

猪伪狂犬病毒野毒株SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR诊断试剂盒的研制

根据GenBank中猪伪狂犬病毒(PRV)gE基因序列设计特异性的引物,PCR扩增获得PRV gE基因片段,构建重组质粒pMD18-T-gE,作为阳性标准品。对SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR反应条件进行优化,建立猪PRV SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR诊断方法,研制诊断试剂盒。扩增产物的熔解曲线分析结果显示只出现单特异峰,无引物二聚体,对猪圆环病毒(PCV-2)、猪细小病毒(PPV)、PRV(gE基因缺失株)、猪源E.coli、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)均无阳性信号扩增,且重复性好,灵敏度可达2.3×101拷贝/μL。结果表明,研制的PRV野毒株SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR试剂盒特异、灵敏、快速、重复性好,适于伪狂犬病毒临床样品的检测。