耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的临床分布及agr基因分型调查

目的了解我院金黄色葡萄球菌的临床分布、耐药性变迁及agr基因分型。方法我院临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,采用微量肉汤法进行药敏试验和结果判断;采用多重PCR法进行agr基因分型测定。结果 2015年10月至2017年3月分离的183株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌主要来源于24个科室,感染标本来源主要是分泌物、深部痰及非开放性脓液标本,药敏试验提示万古霉素、利奈唑胺、替加环素、复方新诺明、利福平、莫西沙星、左氧氟沙星、环丙沙星、红霉素对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌敏感率分别为100%、100%、100%、83.06%、62.29%、57.38%、55.19%、53.0%和12.57%;agr基因分型以Ⅰ型为主,其次为Ⅱ型、Ⅲ型。结论我院耐甲氧西林金黄色葡萄球菌于全院均匀分布,对红霉素耐药率较高,未发现对万古霉素、利奈唑胺、替加环素耐药株。

血液来源表皮葡萄球菌生物被膜形成能力及agr基因多态性调查

目的 探讨临床分离血液来源表皮葡萄球菌附属基因调节因子(agr)基因多态性,了解其分子特征与生物被膜形成能力。方法 收集2012年3月~2015年2月四川省人民医院临床分离血液来源的菌株,表皮葡萄球菌经过全自动微生物鉴定系统鉴定后通过分子生物学方法做进一步鉴定确认。采用半定量黏附实验检测生物被膜形成能力,采用多重PCR分析agr基因多态性。结果 实验期间收集到81株表皮葡萄球菌,并全部纳入了下一步的鉴定和分型实验中。血液来源的表皮葡萄球菌中,agrⅠ型51株(62.96%),agrⅡ型6株(7.41%),agrⅢ型7株(8.64%),agr未分型17株(20.99%)。生物被膜阳性菌株54株,占66.67%。结论 临床分离血液来源表皮葡萄球菌agr基因存在明显多态性,以agrⅠ型为主,agr未分型较普遍;血液来源表皮葡萄球菌具有较强的生物被膜形成能力,即具备强致病率,应引起临床重视。

血流感染金黄色葡萄球菌毒力基因、agr分型及生物膜形成能力调查

目的探讨血液来源金黄色葡萄球菌耐药性、毒力基因、agr分型、生物膜形成能力,并比较甲氧西林敏感株与耐药株间的差异。方法收集2019年1月—2020年12月102株血液分离非重复金黄色葡萄球菌菌株,采用全自动微生物鉴定药敏分析系统进行药物敏感性检测;采用PCR及多重PCR分析菌株毒力基因携带情况及agr基因多态性;采用96孔板结晶紫染色法检测生物膜形成能力。采用卡方检验和Fisher精确概率法比较分析甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)菌株间耐药性、毒力基因、agr分型及生物膜形成能力的差异。结果102株金黄色葡萄球菌中,43株为MRSA,59株为MSSA。毒力基因普遍表达葡萄黄质蛋白基因crtN(99.0%)、溶血素基因(hla 97.1%、hlb 98.0%、hld 96.1%),其次为表面因子CP8合成酶基因cap8H(34.3%)、中毒性休克综合征毒素-1基因tst(21.6%),其中携带crtN/hla/hlb/hld 4种毒力基因组合的菌株最多(48株)。agr分型阳性率为97.1%,其中agrⅠ型占56.9%,agrⅡ型占36.3%,agrⅢ型占4.9%,未检测出agrⅣ型,agr未获分型3株。生物膜形成阳性共28株,其中12株可形成强生物膜。MRSA菌株对环丙沙星、四环素、红霉素、克林霉素、左氧氟沙星、莫西沙星的耐药率高于MSSA菌株(P<0.05);MRSA菌株tst基因携带率高于MSSA(P<0.01),cap8H基因携带率低于MSSA(P<0.05),差异有统计学意义;MRSA菌株中agrⅠ和agrⅡ型各占46.51%和48.84%;MRSA菌株更倾向形成中等或弱生物膜,与MSSA菌株相比在生物膜形成能力上差异无统计学意义。结论临床分离血流感染金黄色葡萄球菌存在多种毒力基因、agr分型、生物膜形成能力,需加强监测。

针对不同来源金黄色葡萄球菌分离菌株的agr Ⅰ-Ⅳ分型初探

目的:金黄色葡萄球菌附属基因调节子(agr)位点是一个全面的群集感应系统并且控制着毒力因子的产生,本研究旨在针对不同来源的金黄色葡萄球菌分离菌株进行agr Ⅰ-Ⅳ基因分型研究.方法:根据金黄色葡萄球菌agrⅠ-Ⅳ基因组别类型的引物,对五种不同来源的169株金黄色葡萄球菌DNA模板进行多重PCR扩增,获得目的基因,以判断agr基因型.结果:169株分离菌株中,agrⅡ型的检出率为19%(32/169),agrⅢ型检出率为12%(20/169),agrⅣ型检出率为8%(14/169),五种不同来源的金黄色葡萄球菌均有检出agrⅡ型,均未检出agrⅠ型,并且都含有未能分型的agr阴性菌株.研究结果表明不同来源金黄色葡萄球菌分离菌株中agr Ⅰ-Ⅳ基因型的流行情况.该方法对于金黄色葡萄球菌菌株分子分型有一定的借鉴意义,也为金黄色葡萄球菌菌株分子流行病学调查奠定一定的基础.

重叠延伸PCR法扩增猪囊尾蚴AgB基因及其在BHK-21细胞中的表达

【目的】克隆猪囊尾蚴AgB基因并在体外细胞中表达。【方法】采用RT-PCR法分别扩增AgB基因的上半段和下半段序列。采用重叠延伸PCR法(splicing overlap extension PCR method,SOE-PCR)把具有35个相同碱基的上下半段扩增为全长基因,并构建到真核表达载体pVAX1,将酶切、PCR、测序鉴定的阳性质粒经脂质体转染BHK-21细胞。通过SDS-PAGE、Western-blotting、间接免疫荧光法,检测细胞中B抗原的表达。【结果】琼脂糖凝胶电泳显示扩增的不同片段大小分别与预期的相同。重组表达载体转染BHK细胞后有荧光出现。表达的蛋白能被猪囊尾蚴病阳性血清所识别。【结论】通过重叠延伸PCR法成功扩增了AgB基因全长并构建到真核表达载体,目的蛋白在BHK-21细胞中表达。

重复序列致agrC突变对金黄色葡萄球菌致病性的影响

目的探讨金黄色葡萄球菌XQ株毒力变异的机制。方法以金黄色葡萄球菌ATCC25923为对照,采用动物实验观察临床分离的金葡菌XQ株在体外传代后的毒力改变;通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析菌体及培养上清的蛋白谱变化,应用PCR进行金葡菌附属调节基因agr扩增并测序,分析菌株毒力变异的机制,并进一步通过qRT-PCR检测XQ株agr调控的毒力因子变化情况。结果动物毒力实验证实XQ株的毒力较对照菌ATCC25923强,体外传代培养后,XQ株第180代菌株（XQ180）的毒力明显下降,SDS-PAGE分析发现毒力下降的XQ株（XQM株）培养上清的蛋白表达谱较XQ株有明显改变,对金葡菌agr基因进行测序分析发现XQM株的agr C基因第443位有一段188 bp的序列插入,而该插入序列就是agr C基因255~442间序列,正是该188 bp重复序列导致Agr C蛋白的截短型突变,引起新桥株的致病性降低,qRT-PCR检测结果证实XQM株中受agr调控的毒力基因表达水平显著下降。结论临床分离的金葡菌XQ株毒力强,在体外传代中易发生毒力变异,这种变异与重复序列导致的agr C突变有关。

AGR2对毒胡萝卜素作用下人肺癌NCI-H460细胞增殖及凋亡的影响

目的:观察anterior gradient 2(AGR2)基因在内质网应激诱导剂毒胡萝卜素作用下对人肺癌NCIH460细胞增殖能力及凋亡的影响。方法:通过慢病毒介导的shRNA建立AGR2基因沉默的稳定细胞系;采用集落形成实验检测AGR2在毒胡萝卜素作用下对细胞增殖能力的影响;流式细胞术分析在毒胡萝卜素作用下AGR2对细胞凋亡的影响。结果:成功构建AGR2基因沉默的稳定细胞系,Western blot结果显示AGR2的蛋白表达水平显著降低(P<0.01);在未经药物处理条件下,AGR2基因缺失对NCI-H460细胞集落形成率及凋亡无显著影响;毒胡萝卜素作用24 h后,AGR2基因沉默的细胞集落形成率远低于对照组(P<0.05);流式细胞术检测结果显示AGR2基因缺失提高了毒胡萝卜素诱导的细胞凋亡率(P<0.05)。结论:AGR2基因缺失不影响正常条件下NCI-H460细胞的存活及凋亡能力,但可使毒胡萝卜素作用下细胞的增殖能力显著下降,细胞凋亡率显著提高。本研究揭示了AGR2在内质网应激状态下促进肺癌细胞增殖和减轻细胞凋亡的作用,为进一步探讨AGR2在肺癌发生发展及耐药性中的作用提供了理论依据。

异质性万古霉素中介的金黄色葡萄球菌的分子特征

目的了解我院异质性万古霉素中介的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的分布及分子学特征。方法对2015年10月至2016年5月我院临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,采用菌群分析策略-曲线下面积法(PAP-AUC)筛选异质性万古霉素中介的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌;采用多重PCR法对hVISA进行agr、spa、SCC基因分型测定,对PCR产物进行测序确定spa分型。结果分离的79株MRSA经筛选获得9株h VISA;9株hVISA中有7株为agr-Ⅰ型,2株为agr-Ⅲ型;有6种spa克隆型,包括t437(4株),t114(1株)、t2310(1株)、t14062(1株)、t030(1株)、t16472(1株)。SCCmec分型以Ⅳa型为主,占55.56%,其次为Ⅲ型33.33%、Ⅱ型11.11%。结论我院hVISA检出率为11.39%,呈多克隆流行。

葡萄球菌生物膜形成影响因素的研究进展

细菌感染已成为临床中不能完全避免的情况,包括致病菌和条件致病菌。细菌生物膜成为细菌的有效保护途径,增强了细菌对抗机体的免疫防御作用及对抗生素的抵抗性。葡萄球菌生物膜形成受多因素及多基因调控,外部环境因素主要是机体免疫反应及外界有机物,内部基因调控主要是sar A、agr、aap、ica。本文就葡萄球菌生物膜的形成及影响生物膜形成的外部环境因素和内部基因调控因素进行综述,为葡萄球菌生物膜的靶向药物研究与治疗提供参考。

牛源纹带棒状杆菌的分离鉴定及其耐药基因与agr管家基因的检测

首次于牛鼻拭子中分离得到1株优势菌株,经16S rRNA鉴定该菌为纹带棒状杆菌。动物回归试验、小鼠致病性试验结果显示,该菌具有一定的条件致病性。药敏试验与耐药基因检测结果显示,该菌四环素耐药基因与大环内酯类药物耐药基因均呈显性表达。PCR检测结果显示,该纹带棒状杆菌存在毒力相关基因——agr管家基因(accessory gene regulator)。

一例早发型精氨酸血症患儿的AGR1基因变异分析

目的对1例早发型精氨酸血症患儿的致病基因进行变异分析,明确其遗传学病因.方法应用基于Ion Torrent半导体测序技术的遗传代谢病基因诊断Panel进行检测,对可疑致病变异进行Sanger测序法验证.结果基因测序结果显示患儿AGR1基因存在c.560+2T>C和c.811T>C复合杂合变异,父亲携带c.560+2T>C杂合变异,母亲携带c.811T>C杂合变异.其中,c.560+2T>C为可疑致病变异,c.811T>C为临床意义不明变异,经检索人群数据库gnomAD、疾病数据库HGMD及文献均为未报道过的新变异.结论AGR1基因c.560+2T>C和c.811T>C复合杂合变异可能为患儿的致病原因,新变异的检出丰富了AGR1基因变异谱.

《农业环境科学学报》2020年刊出论文简评

本文对《农业环境科学学报》2020年全年发表的文章作了评述,总结分析了与2019年相比各栏目刊登内容上的一些变化,并按当前农业环境领域关注的热点研究对象:重金属、温室气体、面源污染、抗生素和抗生素抗性基因(AGRs)、微塑料等分别进行了其研究内容评述,指出了各方面未来研究中应重点关注的问题及《农业环境科学学报》的未来刊登重点。

金黄色葡萄球菌生物被膜基因型的分子鉴定

本文选用常见的典型食源性微生物金黄色葡萄球菌,从食品微生物安全角度出发,采用生物被膜菌落结晶紫染色法定量检测58株金黄色葡萄球菌菌株生物被膜的形成能力。并对金黄色葡萄球菌生物被膜相关基因型进行分型研究,包括ica调控子分型(ica A、ica D、ica BC)与粘附特性分型(agr、atl E和aap)研究。结果显示,所有检测菌株均能生成生物被膜,其中3株能生成强粘附性生物被膜,占5.2%;生成中等生物被膜能力菌株有23株,占39.7%;32株金黄色葡萄球菌生成弱粘附生物被膜,占55.2%。实验所用的58株菌株中有48株能扩增出ica A基因,56株扩增出ica D基因,57株扩增出ica BC基因,56株扩增出agr,分别有53株和57株染色体中存在aap和atl E基因。本实验的结论:ica操纵子为金黄色葡萄球菌生物被膜形成所必须,aap基因可能作为促进金黄色葡萄球菌生物被膜形成的一个独立因素。而atl E,agr基因是金黄色葡萄球菌生物被膜粘附过程中形成所必须的调节因子。

生物材料植入感染与表皮葡萄球菌生物膜形成的相关基因调控

表皮葡萄球菌是寄居于人体皮肤和黏膜表面的共生菌群,现已发现其是引发临床生物材料相关感染的主要条件致病菌,在生物材料植入感染中占有重要地位.医用生物材料表面细菌生物膜的形成是其主要致病因素,细菌生物膜可有效抵御机体的防御反应和抗生素治疗,导致生物材料植入感染难以彻底治愈,使感染呈慢性、持续性和反复性特点,从而在临床上造成了极高的死亡率.就表皮葡萄球菌生物膜的形成、胞间黏附素基因（ica）操纵子和附属基因调节子（agr）基因对表皮葡萄球菌生物膜的调控及其在临床生物材料植入感染中的作用等方面作一综述.

金黄色葡萄球菌Agr群体感应系统及其抗毒力治疗研究进展

辅助基因调控(Auxiliary gene regulation,Agr)群体感应系统广泛存在于金黄色葡萄球菌中,是研究最广泛的细菌双组分调节系统之一,在金黄色葡萄球菌定植、感染过程中通过调控大量毒力因子、生物膜形成等起着至关重要的作用;抗毒力治疗是一种通过降低或阻断病原体感染后的毒力表达但不影响细菌生存能力,使其易被宿主的免疫防御系统杀死的治疗方法。本文通过对金黄色葡萄球菌Agr群体感应的表达调控与阻断Agr表达抑制其毒力产生的抗毒力治疗等两个方面进行阐述,以期为金黄色葡萄球菌的治疗提供新的研究思路。

SarA/Agr调控金黄色葡萄球菌生物被膜形成的研究进展

金黄色葡萄球菌生物被膜的形成是一个复杂的程序,受多种基因的共同调控。葡萄球菌辅助调节子A(SarA)和辅助基因调节子(Agr)分别属于转录调节系统和二元调节系统,二者可直接或间接调控多种生物被膜形成相关基因的表达。SarA/Agr在调控生物被膜形成的同时,对金黄色葡萄球菌耐药性及毒力因子也存在显著影响。本文从SarA对生物被膜形成的调控、Agr对生物被膜形成的调控以及SarA/Agr对生物被膜形成的双重调3个方面进行了综述,旨在为金黄色葡萄球菌生物被膜形成机制或干预机制的研究提供新思路。

MALDI-TOFMS鉴定一株小菌落变异型金黄色葡萄球菌

目的探讨运用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)技术对金黄色葡萄球菌小菌落变异型的特征性蛋白指纹图谱进行深度研究的价值。方法分别采用传统生化鉴定、16S r RNA测序技术和MALDI-TOF MS技术对1株小菌落变异型金黄色葡萄球菌进行鉴定,通过质谱鉴定系统VITEK MS的质谱科研模式获取金黄色葡萄球菌小菌落突变株(small colony variants,SCV)的质谱图,分析代表金黄色葡萄球菌agr和sig B系统的m/z表达强度,并用SARAMIS软件构建基于质谱峰谱特征的系统发育树。结果使用MALDI-TOF MS技术鉴定该菌株为金黄色葡萄球菌,与传统生化鉴定、16S rRNA测序技术的鉴定结果一致。其菌落形态符合典型SCV菌株的特征,预示生物膜形成的PSMα3(m/z 2634.4)、PSMα1(m/z 2286.8)和PSMα4(m/z 2198.6)的表达强度分别为100%、76.1%和32.3%,反映急性早期感染状态的agr调控系统的delta毒素强度只有10%;反映慢性、复发性感染的sigB调控系统的峰谱相对强度均<25%,该菌株和科研菌种库SCV的系统发育树近似度>70%。结论 MALDI-TOF MS技术不仅能够快速准确鉴定不典型金黄色葡萄球菌,且生成的质谱图能够初步提示菌株在宿主体内的感染状态,表明该技术具有极大的应用前景。