超声波辅助提取柴达木大肥菇多糖工艺优化及其抗缺氧活性研究

以柴达木大肥菇(Agaricus bitorquis(Quél.)Sacc)子实体为原料,基于超声波辅助提取手段,采用单因素、响应面优化试验针对超声波提取多糖工艺参数进行优化,结果表明:通过响应面优化提取条件,确定柴达木大肥菇粗多糖提取的最佳工艺为超声功率126 W,料液比1:36 g/mL,提取时间为15 min。采用在此提取工艺条件下提取获得的粗多糖进行动物评价实验,通过小鼠常压耐缺氧、亚硝酸钠中毒、急性脑缺血性缺氧三项抗缺氧试验,分别检测小鼠死亡时间、存活时间及喘息时间等指标,对数据进行方差分析,与对照组、阳性(红景天苷)对照组比较(p<0.05)差异显著,3项试验结果判断均为阳性;粗多糖试验组与空白对照组比较对小鼠死亡时间、喘息时间及存活时间的延长率分别为76.60%、50.33%及144.96%,粗多糖试验组与阳性对照组比较对小鼠死亡时间、喘息时间及存活时间的延长率分别为19.20%、34.20%及43.07%,综上分析,柴达木大肥菇子实体粗多糖具有较强的抗缺氧功效。

柴达木大肥菇子实体营养成分分析与评价

经测定,柴达木大肥菇子实体含粗蛋白24.0%、粗脂肪2.10%、粗纤维17.32%、碳水化合物34.91%、灰分13.65%;必需氨基酸(5.215 g/100g)占氨基酸总量(15.88 g/100g)的35.84%;含维生素B20.107 mg/100g、维生素B3(烟酸)8.168 mg/100g;l kg子实体含钾118 mg、磷38.5 mg、硫272.6 mg、钙624.9 mg、铜11.07 mg、铁163.4 mg、镁608.6 mg、锰5.77 mg和钠223.5 mg。

柴达木盆地野生大肥菇菌种培养基配方筛选

[目的]筛选最佳的柴达木野生大肥菇母种、原种和栽培种培养基。[方法]以柴达木野生大肥菇为供试菌株,以发酵棉籽壳、发酵干牛粪、小麦粒等为主料,轻质碳酸钙等为辅料配置不同配方的各级菌种培养基,研究不同配方的各级菌种培养基对柴达木野生大肥菇菌丝生长的影响。[结果]不同配方的各级菌种培养基上柴达木野生大肥菇菌丝的生长存在明显差异,其中菌丝生长速度最快的母种培养基为PDA、PT、CDA培养基,其菌丝长势良好,洁白浓密;菌丝生长速度最快的原种、栽培种培养基为麦粒、牛粪和发酵棉籽壳、牛粪及麦草屑2种培养基,菌丝纯白、浓密,发菌率均为100%;各级菌种适宜培养温度为20～25℃。[结论]该试验为进一步人工驯化及高产栽培技术研究提供了依据。

柴达木大肥菇菌丝胞内酚酸的提取工艺优化及抗氧化活性分析

以柴达木大肥菇(Agaricus bitorquis(Quél.)Sacc)菌丝体为原料,基于超声波辅助提取手段,采用单因素和Box-Behnken法优化酚酸提取工艺,以大孔树脂纯化粗酚酸,并采用5种经典的体外抗氧化体系对纯化前后2种酚酸进行活性评价。结果表明:超声波功率130 W,乙醇浓度90%,提取温度61℃,提取时间30 min,液料比40:1(mL/g)为最佳提取工艺;体外抗氧化试验结果显示,在高浓度条件下,纯化酚酸(PPA)组对DPPH、ABTS自由基清除率分别高于对照组(Vc)4.31%、3.69%,也分别高于粗酚酸组(CPA)27.45%、32.45%,且PPA组的IC50值分别低于Vc组18.57%、5.20%,也分别低于CPA组40.78%、42.52%,其强弱顺序为:PPA>Vc>CPA;PPA组对羟自由基和超氧阴离子自由基清除率分别高于粗酚酸组(CPA)8.56%、30.09%,且PPA组的IC50值也分别低于CPM组17.39%、53.57%,强弱顺序为:PPA>CPA;PPA组还原能力高出CPM组51.05%;PPA组相对于CPA组具有较强的抗氧化活性。综上,柴达木大肥菇纯化酚酸具有较强的抗氧化活性,是天然抗氧化剂的良好来源。

柴达木大肥菇发酵过程中酚酸抗氧化活性变化

采用液体发酵法发酵柴达木大肥菇,利用超声波辅助法提取胞内、胞外酚酸,通过测定菌丝体生物量、酚酸含量以及发酵过程中胞内、胞外酚酸的5种抗氧化指标,探究柴达木大肥菇发酵过程中酚酸抗氧化活性。结果表明:柴达木大肥菇菌丝体生物量和胞内、胞外酚酸产量达到最大时分别为(22.91±0.21)、(6.73±0.05)、(10.11±0.05)g/L,且胞外酚酸含量大于胞内酚酸含量;柴达木大肥菇胞内、胞外酚酸对不同自由基的清除能力不同,在发酵过程中抗氧化活性处于动态变化,且胞内活性高于胞外。胞内酚酸对2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐阳离子[2,2'-azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate)cation,ABTS+]自由基、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基、超氧阴离子自由基、羟自由基的最高清除率及铁离子还原能力分别为44.52%、50.54%、63.90%、29.35%、7.17%;胞外酚酸对4种自由基的最高清除率及铁离子还原能力分别为47.32%、34.39%、23.95%、28.61%、3.67%。因此,柴达木大肥菇胞内、胞外酚酸是天然抗氧化剂的良好来源。

柴达木大肥菇胞内多糖改善氧化应激作用

为研究柴达木大肥菇胞内多糖对氧化损伤小鼠抗氧化应激作用,将小鼠随机分为5组,分别为胞内多糖低剂量组[25 mg/(kg·d)]、中剂量组[50 mg/(kg·d)]、高剂量组[100 mg/(kg·d)]、空白对照组[蒸馏水100 mg/(kg·d)]和阳性对照组[红景天胶囊200 mg/(kg·d)],连续灌胃35 d,测定小鼠氧化损伤条件下相关生理生化指标,探究柴达木大肥菇胞内多糖对小鼠氧化应激的保护作用。结果表明:与空白对照组相比,胞内多糖低、中、高剂量组小鼠力竭游泳时间延长极显著(P<0.01),缺氧存活时间延长显著(P<0.05);低、中、高剂量组肝脏中丙二醛含量降低极显著(P<0.01),抗氧化酶系中超氧化物歧化酶、过氧化氢酶活性升高极显著(P<0.01),低、中剂量组谷胱甘肽过氧化物酶活性升高显著(P<0.05),高剂量组升高极显著(P<0.01);低、中、高剂量组血清中尿素氮含量、血乳酸浓度、乳酸脱氢酶活性和小鼠脑组织中NO含量均显著降低(P<0.05)。与阳性对照组相比,中剂量组力竭游泳时间延长显著(P<0.05),高剂量组延长极显著(P<0.01);中、高剂量组缺氧存活时间延长显著(P<0.05);中剂量组丙二醛含量降低显著(P<0.05),高剂量组降低极显著(P<0.01),低、中、高剂量组超氧化物歧化酶活性无明显差异,中、高剂量组过氧化氢酶活性升高显著(P<0.05),中剂量组谷胱甘肽过氧化物酶活性升高显著(P<0.05),高剂量组升高极显著(P<0.01);中剂量组尿素氮含量降低显著(P<0.05),高剂量组降低极显著(P<0.01),高剂量组血乳酸浓度降低极显著(P<0.01),中、高剂量组乳酸脱氢酶活性和小鼠脑组织中NO含量降低极显著(P<0.01)。胞内多糖高剂量组的抗氧化效果优于低、中剂量组,呈剂量依赖性。综上,柴达木大肥菇胞内多糖可以通过增强抗氧化防御机制减轻氧化应激损伤,提高氧化胁迫条件下机体的代偿代谢水平,增强机体抗氧化应激的能力。

柴达木大肥菇多糖对小鼠的抗疲劳作用

本文以柴达木大肥菇为研究对象,采用热水浸提法提取柴达木大肥菇子实体多糖、发酵液多糖和菌丝体多糖,并将三种多糖按照100 mg/kg的剂量分别灌胃小鼠35 d,灌胃结束后分析小鼠力竭游泳时间及力竭游泳结束后小鼠血液中氰化高铁血红蛋白(hemoglobin,Hb)、血清中尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和乳酸(lactic acid,LA)含量、肝糖原(hepatic glycogen,HG)含量变化的差异性,研究柴达木大肥菇多糖的抗疲劳作用。结果表明,从子实体多糖(polysaccharides from sporocarp,PS)、发酵液多糖(polysaccharides from fermentation broth,PFB)和菌丝体多糖(polysaccharides from mycelium,PM)中均分离得到3个多糖组分。PS组、PFB组和PM组中小鼠的力竭游泳时间分别是空白对照组(29.65±1.92 min)的1.93倍、2.33倍和3.03倍。PS、PFB和PM均能提高小鼠血液中Hb、血清中LDH含量和肝脏中HG含量,降低小鼠血清中BUN和LA含量,且PM的效果最明显,PM组小鼠血液中Hb、血清中LDH、BUN、LA和肝脏中HG含量分别是空白对照组(分别为236.72±15.20 g/L、9.95±0.32 Ku/L、16.28±0.04 mmol/L、17.61±1.29 mg/g)的2.19倍、1.27倍、0.26倍、0.38倍和3.05倍。本研究结果说明柴达木大肥菇PS、PFB和PM具有抗疲劳作用,可以提高小鼠的运动耐力、缓解运动疲劳,且PM的抗疲劳效果优于PS和PFB。